HPLC-MS/MS法檢測葡萄中嘧菌酯的殘留量

馬新剛，張愛娟，梁 林，左伯軍

（山東省農藥科學研究院山東省化學農藥重點實驗室，濟南 250033）

嘧菌酯（azoxystrobin），別名阿米西達（amistar），化學名稱為(E)-2-{2-[6-(2-氰基苯氧基)嘧啶-4-基氧]苯基}-3-甲氧基丙烯酸甲酯，分子式為C22H17N3O5，CAS登錄號為31860-33-8。嘧菌酯是新型高效、廣譜、內吸性殺菌劑，對白粉病和霜霉病防治效果較好，且與現有殺菌劑無交互抗性，在果蔬、谷物等作物的病蟲害防治上應用廣泛[1-2]。目前，已有其在人參、小麥、水稻、茶葉、水果和蔬菜等作物中的殘留檢測報道，采用的方法主要為氣相色譜-火焰光度檢測法、氣相色譜-氮磷檢測法、氣相色譜-電子捕獲檢測法[3-5]、液相色譜-紫外線檢測法[6-7]、氣相色譜-串聯質譜法和液相色譜-串聯質譜法[8-13]，但嘧菌酯在葡萄中的殘留檢測未見報道。

本文參考QuEChERS方法，結合高效液相色譜-串聯質譜儀，建立了嘧菌酯的殘留量在葡萄中分析檢測方法，該方法處理樣品快速、簡便、靈敏度高，嘧菌酯的定性定量準確。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Aglient 1290Ⅱ-6460高效液相色譜-串聯質譜儀，美國安捷倫公司；Sorvall ST16型臺式通風離心機，賽默飛世爾科技有限公司；XBLL-25A型多功能食品加工機，上海市帥佳電子科技有限公司；QL-861型高速渦旋混合儀，上海書培實驗設備有限公司；JA21002型電子精密天平，上海賽德利思精密儀器儀表有限公司。

乙腈（色譜純和分析純），德國默克公司和天津市科密歐化學試劑有限公司；氯化鈉（分析純），上海阿拉丁生化科技股份有限公司；N-丙基乙二胺固相吸附劑（PSA）、石墨化碳黑（GCB）、十八烷基硅烷（C18），粒徑均為40～60 μm，天津市博納艾杰爾科技有限公司；嘧菌酯標準品（98.7%），上海市農藥研究所有限公司。

1.2 標準溶液配制

稱量嘧菌酯標準品0.023 2 g，轉移至25 mL容量瓶中，使用乙腈將標準品完全溶解，準確定容得916 mg/L嘧菌酯標準溶液，置于4℃冰箱中保存。

1.3 試驗樣品的前處理

用食品調理儀將葡萄粉碎，稱取10.0 g，置于50 mL具塞式塑料離心管中，加入10 mL乙腈和5 mL超純水，高速渦旋4 min，加入5 g氯化鈉，劇烈振蕩30 s，以4 500 r/min的轉速離心4 min至液面分層，取上清液1 mL至裝有40 mg PSA的2 mL塑料離心管中，高速渦旋30 s，靜置1 min，上清液過0.22 μm有機系微孔濾膜，待檢測。

1.4 色譜和質譜檢測條件

色譜柱：Eclispe plus C18RRHD型色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫為室溫；進樣體積1 μL；流動相：0.1%甲酸水溶液＋乙腈（體積比30∶70）；流速0.3 mL/min。

質譜條件：電噴霧離子源ESI（＋）；流速11 L/min；干燥器溫度300℃；霧化氣壓力103 kPa；毛細管電壓4 kV；干燥氣N2；碰撞氣N2。

2 結果與分析

2.1 儀器檢測條件確定

使用1 mg/L嘧菌酯標準溶液，采用電噴霧電離ESI（＋/-）模式下進行全掃描（m/z80～520），保留時間為0.747 min，駐留時間為200 ms。根據掃描結果，選擇合適的分子離子峰和電噴霧電離方式。結果表明，在ESI（＋）采集模式下，嘧菌酯［M＋1］峰（m/z403.9）響應值最高。選擇母離子（m/z403.9）進行子離子掃描，不斷優化碎裂電壓和碰撞能量等相關參數，最終獲得嘧菌酯的定量離子對m/z403.9＞372.0和定性離子對m/z403.9＞343.9，相應的碎裂電壓為100 V，碰撞能量均為20 V。

在0.3 mL/min流速、0.1%甲酸水溶液＋乙腈（體積比30∶70）流動相下，嘧菌酯有效成分基線平穩，峰形對稱，與其余雜質分離較好。

2.2 提取方法

試驗結果表明，PSA和C18對嘧菌酯沒有吸附，GCB對嘧菌酯的吸附在10%以內。PSA對樣品中有機酸、糖類、色素和金屬離子等吸附作用明顯；C18對富含脂肪和醇類物質的樣品有很好的吸附效果；GCB去除色素效果好。因葡萄樣品中糖類和有機酸含量高，綜合結果分析，最終選定PSA作為葡萄的凈化劑。該方法操作簡單，去除糖類和有機酸效果好，回收率高，耗時短，適用于大批量葡萄樣品的檢測。

2.3 嘧菌酯的線性范圍

將嘧菌酯標準溶液（50 mg/L）用乙腈稀釋配得0.02、0.10、0.50、2.50、5.00 mg/L的系列標準溶液。按1.4色譜和質譜條件測定，橫坐標為標準溶液濃度，縱坐標為定量離子對峰面積，每個質量濃度進樣3次，根據試驗結果繪制工作曲線。在0.02～5.00 mg/L范圍內，嘧菌酯在乙腈中線性關系良好，曲線方程為y=10 545x＋1 509，相關系數為0.994 9。

2.4 嘧菌酯的添加回收試驗和精密度

葡萄中嘧菌酯的添加回收率及變異系數見表1。嘧菌酯在葡萄中添加回收率為98%～107%，變異系數為0.5%～1.0%，結果滿足農藥殘留的分析要求。目標峰無雜質干擾，峰形好（圖1）。

表1 葡萄中嘧菌酯的添加回收率及變異系數

圖1 嘧菌酯在葡萄中的添加色譜圖（添加水平0.5 mg/kg）

2.5 方法定量限

以最低添加水平作為方法的定量限，嘧菌酯在葡萄中的定量限為0.02 mg/kg。

3 結 論

本文參照QuEChERS方法，建立了嘧菌酯在葡萄中的殘留分析檢測方法，試驗樣品用水和乙腈提取，以PSA為凈化劑，高效液相色譜-串聯質譜儀快速檢測。該方法通用性強，樣品處理快速、簡單、重現性較好，嘧菌酯在葡萄中的定量限、準確度和精密度均滿足農藥殘留分析要求。