不同菌肥種類和施用量對連作地黃產量及品質的影響

王鑫源 董誠明 李曼 齊大明

摘要：為探明不同菌肥對地黃連作障礙的作用，設計不同菌肥、不同施用量對地黃產量以及浸出物、梓醇、毛蕊花糖苷、地黃苷A、地黃苷D和益母草苷含量的影響，并采用多指標綜合加權評分法優選最佳菌肥種類及施肥量。結果表明，處理NF-3（農大肥業菌肥180 g/m2）提高連作地黃產量的效果最佳;處理JH-3（聚核辛士力180 g/m2）提高連作地黃品質的效果最佳。說明施用復合生物菌肥能有效提高連作地黃產量與品質。

關鍵詞：菌肥;地黃;連作;產量;品質

中圖分類號：S567.23+9.06?文獻標志碼：A?文章編號：1002-1302（2020）21-0171-06

地黃為玄參科植物地黃（Rehmannia glutinosa Libosch.）的新鮮或干燥塊根[1]，屬大宗常用中藥材，在我國河南、山東、山西等地有大面積種植，以河南武陟、溫縣等地所產較佳[2-3]。 連作障礙是地黃種植過程中的常見問題。目前有關施用菌肥緩解連作障礙的研究，大都是關于單一菌肥的影響效果[4-5]，并未有系統地比較施用不同菌肥對連作種植的影響。為此，本試驗探究不同菌肥在不同施肥水平下對連作地黃產量及品質的影響，以期篩選出適宜的菌肥品種及施用量，為緩解地黃連作障礙提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料來源于河南省武陟縣地黃規范化種植基地，經河南中醫藥大學董誠明教授鑒定為地黃，品種為金九。2018年4月種植于河南省武陟縣駕部連作2年地黃試驗田。

1.2 試驗設計

試驗在河南省武陟縣駕部科研試驗田進行。以菌肥種類（表1）、施肥量為考察因素，根據菌肥使用說明給出施用量范圍，設計高、中、低共3個施肥水平。以不施用菌肥連作地黃小區為對照（CK）;以不施菌肥正茬地黃小區為對照（ZC），具體試驗設計見表2。分別在6月20日、7月20日、8月20日各施肥1次，每個處理3次重復，其他管理措施同大田常規管理。

1.3 測定方法

1.3.1 產量測定 于2018年11月26日采收地黃，對各個試驗處理小區的地黃塊根進行稱質量，以鮮質量為記錄數據。

1.3.2 浸出物含量的測定 依據2015版《中國藥典》中地黃的方法測定水溶性浸出物含量。

1.3.3 梓醇、地黃苷A等指標含量的測定

1.3.3.1 儀器與試劑 儀器：M8431AA型 Agilent型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）;FA2204N 型電子天平（上海民橋精密科學儀器有限公司）;SIMPLICITY超純水系統（鄭州中譜儀器設備有限公司）;KQ-500DV 型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。試劑：梓醇、毛蕊花糖苷標準品（中國食品藥品檢定研究院）;地黃苷D（批號為wkq19011809）、益母草苷標準品（批號為wkq19012206）（四川維克奇生物科技有限公司，含有量>98%）;地黃苷A標準品（批號為DST181019-106，成都德思特生物科技有限公司，含有量>98%）;乙腈、磷酸均為色譜純（美國Thermo Fisher 公司）;其他試劑均為分析純。

1.3.3.2 方法 （1）色譜條件。ZORBAX SB-C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相乙腈（A）-水（B，含0.2%磷酸），梯度洗脫（0～5 min，1.3%～1.5%A;5～6 min，1.5%～3%A;6～14 min，3%A;14～15 min，3%～4%A;15～20 min，4%A;20～25 min，4%～20%A;25～40 min，20%A）;柱溫 35 ℃;體積流量為1 mL/min;檢測波長：0～20 min，203 nm;21～35 min，334 nm;進樣量20 μL。色譜圖見圖1、圖2、圖3和圖4。（2）對照品溶液制備。精確稱取梓醇、地黃苷D、地黃苷A、益母草苷、毛蕊花糖苷對照品各1 mg，置于5 mL量瓶中，超純水溶解定容至刻度，即得質量濃度分別為0.2 mg/mL的混合對照品溶液。（3）供試品溶液制備。精確稱取地黃樣品粉末0.8 g，置具塞錐形瓶中，精確加入 50 mL 甲醇，稱質量，超聲提取1 h，冷卻至室溫，用甲醇補足減失的質量，搖勻，過濾，精確量取續濾液20 mL，濃縮近干，將殘余物溶于超純水中，轉移至10 mL容量瓶中，超純水定容至刻度線，0.22 μL微孔濾膜過濾，即得。（4）線性范圍考察。精確稱取梓醇、地黃苷D、地黃苷A、益母草苷、毛蕊花糖苷對照品適量，按上述對照品溶液制備方法配制成 2 400、200、300、200、300 μg/mL的混標溶液，記為溶液1，依次稀釋1.25、2、4、10、20、40倍，記為混標溶液2、溶液3、溶液4、溶液5、溶液6、溶液7，在色譜條件下進行。以質量濃度為橫坐標（x），峰面積為縱坐標（y）進行回歸，結果見表3，可知各成分在各自范圍內線性關系良好。（5）精密度試驗。精確吸取對照品溶液20 μL，連續進樣6次，測得梓醇、地黃苷A、地黃苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷峰面積相對標準差（RSD）分別為0.62%、1.75%、1.46%、1.74%、0.20%，表明儀器精密度良好。（6）重復性試驗。取同一批樣品6份，每份約0.8 g，按上述對照品溶液制備方法制備供試品溶液，過濾，精確吸取20 μL測定，測得梓醇、地黃苷A、地黃苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷含有量RSD分別為1.88%、1.27%、1.49%、0.68%、1.73%。 表示該方法重復性良好。（7）穩定性試驗。精確吸取同一供試品溶液，于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、24 h測定峰面積，測得梓醇、地黃苷A、地黃苷D、益母草苷、毛蕊花糖RSD分別為1.47%、0.31%、1.31%、1.61%、0.88%，這表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。（8）加樣回收率試驗。精確稱取6份含量已知的樣品，每份0.2 g，加入梓醇、地黃苷 D、地黃苷 A、益母草苷、毛蕊花糖苷對照品6.51、0.12、0.37、0.72、0.32 mg。按上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液（所有試劑的一半）。在色譜條件下測定，計算回收率。結果梓醇、地黃苷 D、地黃苷 A、益母草苷、毛蕊花糖苷加樣回收率分別為101.78%、96.14%、97.69%、102.57%，RSD分別為0.96%、1.23%、1.35%、0.58%、1.03%。（9）樣品含有量測定。取不同處理樣品，按上述對照品溶液制備方法制備供試品溶液，過濾，精確吸取20 μL，在色譜條件下測定，計算含量，結果見表5。

1.4 綜合評價

采用多指標綜合加權評分法評價菌肥種類、施肥量對地黃水溶性浸出物含量（a）、梓醇含量（b）、毛蕊花糖苷含量（c）、地黃苷A含量（d）、地黃苷D含量（e）、益母草苷含量（f）的影響，分別賦予其不同的主觀權重，即0.25、0.30、0.10、0.15、0.15、0.05，再按以下公式計算綜合加權評分值（D）[6]。

2 結果與分析

2.1 不同菌肥處理對地黃產量的影響

由表4可見，施用7種不同菌肥對連作2年的地黃產量均能產生顯著影響，但不同菌肥、不同施用量對地黃影響的程度不同。施肥處理地黃產量與對照均存在顯著差異，以處理NF-3產量最高，為1 721.015 kg/667 m2，較對照提高77.24%;其次為處理JH-2，為1 445.655 kg/667 m2，較對照提高了48.89%。施肥處理地黃產量與正茬地黃產量對照相比，處理NF-3產量達到正茬地黃產量的68.11%;處理JH-2產量達到正茬地黃產量的57.21%。各菌肥不同施用量中CX-3、HM-3、JH-2、KC-3、NF-3、VG-3、ZD-1分別為產量最高的處理。由此可知，復合生物菌肥對連作地黃產量的提高效果較顯著，其中農大肥業菌肥180 g/m2對連作2年地黃產量的提高效果最為顯著。

2.2 不同菌肥處理對地黃品質的影響

由表5可知，連作2年地黃小區中處理NF-3浸出物含量最高，為89.930%，較對照提高2.34%;ZD-1地黃苷D含量最高，為0.022 8%，較對照顯著提高21.93%;梓醇和地黃苷A的含量均以處理JH-3含量最高，分別為5.994 1%、0.019 2%，較對照提高30.80%、18.52%;毛蕊花糖苷和益母草苷的含量均以HM-1處理最高，分別為0.047 1%、0.045 8%，較對照分別顯著提高151.87%、11.17%。地黃種植小區中處理HM-1、HM-3、JH-3、KC-2、NF-3、VG-3、ZD-1、ZC毛蕊花糖苷含量達到2015版《中國藥典》的標準，說明合理施用菌肥能有效改善連作地黃的品質。

2.3 綜合加權評分法評價

由表6可知，處理JH-3得分最高，為93.49分;其次為處理ZD-1，為92.25分;處理CX-2得分最低，為77.56分。綜合評分結果表明，菌肥聚核辛士力180 g/m2對連作2年地黃品質的提高效果最顯著，聚核辛士力為復合生物菌肥。

3 討論與結論

由本試驗結果可知，在對連作地黃產量的影響中，施用菌肥的21項處理除CX-1、CX-2、HM-2、ZD-3外，其余處理產量均高于對照，但所有連作地黃處理小區的產量均低于正茬種植地黃小區，值得注意的是處理NF-3的產量達到正茬種植的68.11%，表明施用農大肥業菌肥180 g/m2有利于連作地黃產量的提高。

連作地黃小區中只有部分處理毛蕊花糖苷含量達到2015版《中國藥典》的標準，其中處理 HM-1 毛蕊花糖苷含量最高，為0.047 1%，達到正茬種植的88.53%。但正茬地黃的浸出物、梓醇、地黃苷A、地黃苷D、益母草苷含量均不為最高處理，說明合理施用菌肥對提高連作地黃品質的影響較顯著，這與許園園等的研究結果[7-8]相符。

總之，處理NF-3為提高連作地黃產量的最佳處理，其對提高連作地黃品質的影響不顯著;處理JH-3為提高連作地黃品質的最佳處理，其對提高連作地黃產量的影響不顯著。聚核辛士力、農大肥業菌肥均為復合生物菌肥，說明復合生物菌肥有利于連作地黃產量和品質的提高。不同種類菌肥混合施加不同水平對連作地黃產量和品質的試驗效果，有待進一步研究。

參考文獻：

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