三磷酸腺苷生物熒光法和細菌培養法監測中度危險醫療用品安全性研究

趙慶蘭 鄧 燕* 魏紅艷 崔 雁

2015年原國家衛生部發布的《醫療機構消毒技術規范》[1]中要求，根據醫療器械污染后使用所致感染的危險性大小及在患者使用之間的消毒或滅菌要求，將醫療器械分為高度、中度和低度三類危險性物品。其中，直接或間接接觸人體黏膜的中度危險性物品在臨床診療工作中被廣泛使用，中度危險性物品的安全性直接影響臨床診療效果，影響醫院感染的發生。按照2009年原國家衛生部發布的《消毒供應中心管理規范》[2]中要求，醫療機構消毒供應中心進行集中管理，取消了使用科室自行清洗、消毒、包裝中度危險醫療用品，保證了物品的清洗、消毒、包裝質量和安全。規范清洗、消毒后，中度危險醫療用品使用前均由各科室自行保存，保存期間外環境及人為的很多因素都可能影響物品質量和安全。

保證醫療用品的安全使用是醫院感染管理的重要環節之一，常規的物品消毒效果微生物檢測方法要求高，影響因素多，等待時間長，不利于感染預防和控制[3-4]。在日常常規檢測和緊急狀態下，快速的檢測方式能夠及時發現、解決問題和隱患。本研究旨在對規范清洗、消毒后分別包裝在粘貼式醫用塑料包裝袋、未經漂白處理的白平紋棉布雙層布袋和聚乙烯塑料袋三種包裝材料進行三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)生物熒光法和細菌培養法監測效果分析，評估存放中的中度危險醫療用品的安全性。

1 材料和方法

1.1 儀器設備與材料

(1)儀器設備：采用Biotech BT-112D型生物熒光快速檢測儀和BioThema266-112型ATP生物熒光檢試劑盒(瑞典BioThema公司)；ATP試劑(美國HYgiena公司)；UltraSnap一體化試劑棒(美國Hygiena公司)。

(2)檢測材料：細菌培養檢測材料包括酒精燈、有相應中和劑的培養試管、無菌采樣棉簽、生理鹽水、手術剪刀或無菌手套、膠布和采樣專用容器。

(3)中度危險醫療用品：不同的高效消毒物品，其中包括負壓瓶、氧氣濕化瓶、呼吸機管路、濕化罐、呼吸氣囊、面罩、簡易呼吸器和霧化管8種，各37件。

1.2 檢測方法

(1)存放方法：已閉合和密封包裝方式，以包為單位直接自然存放在消毒供應中心無菌存放間無菌架和臨床科室治療室無菌物品柜中。

(2)存放環境：消毒供應中心無菌存放間、臨床科室治療室，環境相對濕度為30%～70%，室溫為0～30 ℃。

(3)ATP生物熒光檢測采樣方法[5]：①采樣棒的棉簽滴加采樣液；②在采樣表面來回涂擦，＞100 cm2的采100 cm2，＜100 cm2的全采；③將采樣棒放入含反應液的檢測管；④將檢測管插入檢測儀的檢測孔；⑤第1次讀數(粗值)；⑥取出采樣棒，將標準品放入檢測管；⑦第2次讀數(標準值)；⑧設備自動計算給出最終結果。

(4)細菌培養檢測采樣方法：用戴無菌手套的手從包裝袋內拿出待檢測物品，用無菌生理鹽水充分濕潤后的無菌棉簽在待檢測物品內部橫豎來回涂擦，并隨之轉動棉拭子。棄去手接觸部分棉簽，將剩余棉簽投入10 ml含相應中和劑的無菌洗脫液的試管內，立即送微生物室。

(5)兩種方法采樣時間：清洗消毒合格后包裝，在使用前的0 d、7 d、14 d、1個月、3個月、6個月、9個月和12個月8個時間段進行采樣和檢測。

(6)ATP檢測判斷標準：ATP生物熒光檢測儀評價標準參照生產廠家提供的說明書，中國CDC消毒檢測中心權威驗證：ATP生物熒光快速檢測相對光單位(relative light unit，RLU)值，RLU≤2000為合格。ATP值的RLU上升為器械、器具和物品清洗不合格，下降為器械、器具和物品清洗合格。

(7)細菌培養檢測判斷標準：參照國家標準《醫院消毒衛生標準》(GB15982-1995)中接觸黏膜的醫療用品，細菌菌落總數應≤20 cfu/g或100 cm2，不得檢出致病微生物為合格。

1.3 統計學方法

采用SPSS16.0統計學軟件包對數據進行統計分析。計數資料用頻數及百分比(%)表示，采用卡方檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ATP熒光檢測合格情況比較

對存放中的中度危險醫療用品存放0 d、7 d、14 d、1個月、3個月、6個月、9個月和12個月的8個時間段，3種包裝方式進行ATP檢測合格情況比較，ATP值合格率及穩定性比較中，醫用塑料自封袋中的物品ATP值合格率為96%，8個時間段檢測均穩定在86%～100%之間；棉布雙層布袋中物品ATP值合格率平均為66%，穩定情況為89%～45%，由高到低不斷下降；聚乙烯塑料袋中的物品ATP值合格率平均為77%，穩定情況為86%～45%，由高到低不斷下降。棉布雙層布袋與聚乙烯塑料袋差異無統計學意義；醫用塑料自封袋與棉布雙層布袋和聚乙烯塑料袋存放1個月、3個月、6個月、9個月和12個月的ATP檢測比較，差異均有統計學意義(x2=15.152，x2=19.161，x2=24.796，x2=21.691，x2=28.100；P＜0.05)，見表1。

表1 ATP檢測結果合格率比較(%)

表2 ATP檢測值升降情況比較(RLU≤2000)

表3 微生物檢測合格率比較(%)

2.2 ATP檢測數值升降情況比較

對存放中的中度危險醫療用品存放0 d、7 d、14 d、1個月、3個月、6個月、9個月和12個月的8個時間段，3種包裝方式ATP檢測數值高低及與合格數值(RLU≤2000)比較。醫用塑料自封袋中的物品ATP值持續下降，1年內均保持在正常范圍內；棉布中的物品ATP值有升有降，存放1個月時ATP值超出正常范圍；聚乙烯塑料袋中物品ATP值逐漸下降，但從0 d至1年8個時間段ATP值一直都在不合格范圍內。全部物品0 d比較差異無統計學意義(F=1.618，P＞0.05)；7 d，14 d、1個月、3個月、6個月、9個月和12個月比較差異有統計學意義(F=3.142，F=3.900，F=9.556，F=7.705，F=10.596，F=10.282，F=14.204，P＜0.05)，見表2。

2.3 微生物檢測法檢測合格情況比較

對存放中的中度危險醫療用品存放0 d、7 d、14 d、1個月、3個月、6個月、9個月和12個月8個時間段，3種包裝方式細菌培養檢測結果合格情況比較。8個時間段，醫用塑料自封袋中，聚乙烯塑料袋中物品微生物檢測合格率均為100%，全程均未檢出有害細菌；棉布中物品合格率為98%，存放3個月時檢測出干燥棒狀桿菌1個，存放6個月時檢出四聯球菌2個。3種包裝方式細菌培養檢測合格率比較差異無統計學意義，見表3。

3 討論

3.1 ATP生物熒光檢測技術監測效果

ATP檢測是一種快速檢驗方法，檢測敏感性相當高，數秒鐘內便可得到線性、可重復性及可再現性的結果，1 min左右即可得到實時檢測結果[6-7]。ATP生物熒光檢測可以在任何時間，任何地點使用，操作簡單，容易掌握，并可提供快速的檢測結果，使清洗消毒過程符合藥品新版良好生產規范(good manufacturing practice，GMP)和危害分析臨界控制點(hazard analysis critical control point，HACCP)的規范[8]。使用ATP熒光快檢系統檢測到的熒光值，其時效性和監測效果均優于目測或細菌平皿計數的效果[9]。本研究顯示，ATP檢測比常用消毒效果檢測方法更敏感，更快捷，通過8個時間段ATP值表現為有升有降或者持續下降，ATP熒光檢測技術可以檢測不同包裝方式存放時間的物品受污染程度及差異性，可以幫助改善產品清洗消毒質量和保存期限、提供實時趨勢分析數據及質量監測的數據。

3.2 細菌檢測技術檢測效果

細菌培養檢測方法是一種用人工方法使細菌生長繁殖的技術[10]。細菌培養檢測是一個復雜的技術。專業技術性強，操作要求高，必需是專業人員才能完成，培養結果至少需要2 d，常規平皿計數法檢測細菌總數，細菌在LB培養基上培養成肉眼可見的細菌菌落。由于樣品稀釋不均等原因，一個菌落往往由兩個或多個細菌細胞構成，而且LB培養基只適合需氧或半需氧細菌的生長，細菌培養結果與ATP檢測相比較慢，但是細菌培養檢測方法能夠檢出此類細菌的數量，所得結果難以反映實際衛生狀況。

3.3 ATP熒光檢測法聯合微生物計數法監測效果

ATP測試是一個直接的，客觀的方法，可用于檢測表面的產品殘留物，采用ATP熒光快檢法可檢測到各種來源的ATP，污染(有機物或微生物)并非均勻地分布在產品接觸表面，無法區分不同來源的ATP。因此，在檢測表面污染時，ATP測試不應被視為是絕對精確的檢測[11]。ATP檢測是在評估衛生狀態及潛在風險時的復雜且敏感指標，因此ATP檢測方法并不能成為直接替代傳統細菌培養的檢測方式，只有結合實驗室微生物計數法對微生物污染情況進行綜合判定，方能客觀反映中度危險醫療用品實際衛生狀況。

4 結論

ATP的衛生監測和微生物計數兩種方法均可檢測不同的被分析物，且兩種方法均具有變異性的生物測試性能。有數據顯示，這兩種方法有80%～90%的一致性，而其他數據為67%，是因為產品殘留物未被微生物檢測法檢測到[12]。ATP測試是一個直接的，客觀的方法，可用于檢測表面的產品殘留物，而此測試方法并不能直接替代傳統細菌培養的檢測方式。目前，實驗室微生物計數法合格判定標準與ATP檢測合格標準一致性和等效性尚未被權威機構認定[13]。因此，實際工作中醫療機構可以利用ATP熒光檢測法快速、簡單及有效的特點，結合實驗室微生物計數法對微生物污染情況進行綜合判定，以提高中度危險醫療用品感染監測效率與效果。