酶聯(lián)免疫吸附法與甲苯胺紅不加熱血清試驗法在梅毒檢驗中的應(yīng)用效果

李愛麗 黃麗芳 劉昊虹

作者單位：512000 廣東 韶關(guān)，韶關(guān)市第一人民醫(yī)院檢驗科

梅毒是臨床上常見的一種性傳播疾病，主要因蒼白螺旋體引起，可通過血液及性進行傳播，也可通過胎盤傳染給胎兒，其危害性僅次于艾滋病，目前已成為社會廣泛關(guān)注的公共衛(wèi)生問題[1]。有研究表明，早發(fā)現(xiàn)、早確診、早治療對改善預(yù)后有積極意義[2]。梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)是臨床診斷梅毒的金標準，但因其費用昂貴，難以作為常規(guī)檢查在梅毒篩查中廣泛應(yīng)用。甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST)可有效反映梅毒病程變化，但假陽性率較高，具有一定局限性。酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法是臨床檢測梅毒的常用手段，具有敏感性及特異性高的特點，但無法提示病情嚴重程度。盡管ELISA法與TRUST法檢查費用低廉，但何種方式的診斷效能更高目前臨床尚存爭議[3]。本研究選取2017年2月—2019年2月我院收治的320例疑似梅毒患者為研究對象，探討ELISA法與TRUST法在梅毒檢測中的應(yīng)用價值?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年2月—2019年2月我院收治的疑似梅毒患者320例為研究對象，排除心肝腎功能障礙、精神病史、認知障礙及無法配合檢查者。其中，男146例、女174例；年齡27～63歲，平均(45.86±3.42)歲；未婚104例、已婚216例。文化程度：小學(xué)及以下57例、初中103例、高中112例、大專及以上48例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審查通過，所有患者均知情同意，自愿參與本次研究。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 PW-960PLUS洗板機、MB-530酶標儀、微量加樣器，所有儀器均性能完好，經(jīng)過校準。ELISA試劑盒購自上?？迫A生物工程股份有限公司，TRUST試劑盒購自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，TPPA試驗試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社生產(chǎn)。

1.2.2 檢測方法 囑患者持續(xù)空腹＞8 h，抽取外周靜脈血5 mL，靜置后離心分離出血清，分別采用ELISA法與TRUST法檢測梅毒抗體，然后再采用TPPA法進行復(fù)查確診。具體操作步驟如下。ELISA法：在預(yù)包被板條孔中加入50 μL待測標本，設(shè)置空白組、陽性組及陰性組對照，于37 ℃條件下孵育1 h后于陽性、陰性對照孔內(nèi)分別加入酶標記物50 μL，混合均勻后再于相同條件下孵育0.5 h，洗板后再于各孔內(nèi)加入底物緩沖液50 μL，混合均勻后再于相同條件下孵育0.5 h，之后在每孔加入終止液50 μL，讀取酶標儀上數(shù)值。TRUST法：將50 μL血清置入卡片圈中并均勻涂抹，搖勻抗原液后利用針頭加入1滴，將卡片置于立體脫色搖床震蕩8 min后觀察結(jié)果。TPPA法：采用9孔法進行標本處理，將標本稀釋液(B液)加入Μ型反應(yīng)板，第1孔100 μL，剩余8孔25 μL，將25 μL血清加入第1孔，之后依次稀釋至2～9孔，第3孔加未致敏粒子D液25 μL，第4～9孔加致敏粒子C液25 μL，將量子反應(yīng)板震蕩30 s后于常溫下靜置2 h后觀察結(jié)果。

1.3 觀察指標 分析T P P A檢驗結(jié)果，比較ELISA法與TRUST法的陽性檢出率、診斷的敏感性、特異性、準確性、陽性預(yù)測值。a表示真陽性；b表示假陽性；c表示假陰性；d表示真陰性；敏感性=a/(a+c)，特異性=d/(b+d)，準確性=(a+d)/(a+b+c+d)，陽性預(yù)測值=a/(a+b)[4]。

1.4 統(tǒng)計方法 采用SPSS 19.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析處理，計數(shù)資料采用百分比(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E L I S A法與T P P A法結(jié)果分析 TPPA檢驗結(jié)果顯示，陽性210例，陰性110例，E L I S A法檢出陽性207例、陰性113例，陽性檢出率為98.57%(207/210)；TRUST法檢出陽性185例、陰性135例，陽性檢出率為88.10%(185/210)，ELISA法的陽性檢出率高于TRUST法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=18.52，P＜0.05)。見表1、表2。

表1 ELISA法與TPPA檢測結(jié)果分析(例)

表2 TRUST法與TPPA檢測結(jié)果分析(例)

2.2 E L I S A法與T R U S T法的診斷效能 ELISA法在梅毒檢驗中的敏感性為96.19%，特異性為95.45%，準確性為95.94%，陽性預(yù)測值為97.58%；TRUST法在梅毒檢驗中的敏感性為79.52%，特異性為83.64%，準確性為80.94%，陽性預(yù)測值為90.27%；兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表3。

3 討論

近年來，隨著人們思想意識及性觀念的轉(zhuǎn)變，使得梅毒感染的發(fā)生率逐年增長，目前已成為世界廣泛關(guān)注的社會問題，及時篩查及檢驗梅毒顯得尤為重要?，F(xiàn)階段，臨床應(yīng)用TPPA對梅毒特異性抗體檢查具有高度敏感性及特異性，但因其成本極高而難以在梅毒篩查中普及，尤其是不利于基層醫(yī)院的推廣[5]。ELISA法與TRUST法成本低廉，操作簡單，有效性高，便于推廣。TRUST法主要用于檢測抗心磷脂抗體，在1～2期梅毒中檢出率＞96%，但在3期及潛伏期的檢出率僅為60%～80%，且易受瘧疾、免疫系統(tǒng)疾病的影響，漏診率較高[6]。ELISA法是IgM與IgG的混合抗體，利用基因重組梅毒螺旋體的特異性抗原TP47及TP17包被酶標孔板檢測血清中的特異性抗體，是目前篩查及檢測梅毒的有效方法，敏感性及特異性均較高，且不受瘧疾、免疫系統(tǒng)等疾病的影響，但僅可表示曾經(jīng)感染或現(xiàn)存感染，無法評判梅毒疾病活動情況。因此，必要時還需進行TPPA復(fù)檢[7]。

表3 ELISA法與TRUST法的診斷效能比較[例(%)]

本研究結(jié)果表明，ELISA法的陽性檢出率高于TRUST法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，ELISA法在梅毒檢驗中的敏感性為96.19%，特異性為95.45%，準確性為95.94%，陽性預(yù)測值為97.58%，TRUST法在梅毒檢驗中的敏感性為79.52%，特異性為83.64%，準確性為80.94%，陽性預(yù)測值為90.27%，兩組比較存在統(tǒng)計學(xué)差異。由此可見，ELISA法檢測梅毒特異性抗體的效果優(yōu)于TRUST法，與TPPA檢驗結(jié)果相當，且費用較低。

綜上所述，與TRUST法相比，ELISA法的陽性檢出率及診斷效能更高，與TPPA檢驗結(jié)果相當，值得在基層醫(yī)院梅毒檢驗中應(yīng)用推廣。