麥洼牦牛細管凍精生產技術要點

楊舒慧，李強，羅志昊，李芬，曹偉，李小偉

（1.四川省畜牧總站，四川 成都 610041；2.四川省龍日種畜場，四川 紅原 624400；3.成都匯豐動物育種有限公司，四川 成都 610011）

2015～2018年，四川省畜牧總站和四川省龍日種畜場以麥洼牦牛為試驗對象，解決了牦牛集中飼養、調教及采精、原精處理、遠距離運輸及分裝冷凍等方面的技術難點。本文對麥洼牦牛細管凍精生產要點進行了梳理和提煉，以期對牦牛細管凍精規?；a提供參考。

1 牦牛飼養及訓練

牦牛體型大、野性高，發情期的種公牛具有很強的攻擊性，因此需要進行采精前訓練。訓練對象為采精種公牛、臺牛，時間約半年，馴化的目的是為增進采精員與牦牛的親近度，減少牦牛人工采精的應激，同時讓采精員熟悉牦牛的生理反應。

1.1 選擇種公牛、臺牛、采精員

1.1.1 選擇種公牛 選擇4～5歲健康無病、體質健壯的特級麥洼牦牛種公牛作為采精種公牛，對其編號建檔，穿鼻戴環并開始訓練。

1.1.2 選擇臺牛 選用適宜采精種公牛交配體的身體健康、性情溫順、發情旺盛、體形適當的母牛作臺牛。

1.1.3 選擇采精員 選擇膽大心細、靈敏謹慎，有耐心的飼養員作為采精員，兩人一組，每組負責6頭種公牛的馴化及采精。

1.2 牦牛訓練 采精牛訓練的主要目的是為避免牦牛發生應激導致無法采精，甚至攻擊采精人員造成人員受傷。馴化主要包括兩個階段：消除警惕階段和建立親密關系階段。

1.2.1 消除警惕階段 采精人員每天早晚定時定點，到牛舍進入采精種公牛視線，前期僅小幅度活動，讓牦牛適應采精員的存在。后期逐步增大活動幅度及頻率，逐步縮小牦牛與采精員接近的極限距離直至采精員可觸摸牦牛為止。期間發現警惕性極高無法接近的牦牛應及時淘汰。

1.2.2 建立親密關系階段 采精員手盛食鹽誘導公牛舔舐，舔舐中觸摸牦牛額頭，注意避開眼睛鼻子等敏感部位，每日2～3次。這一步驟的目的是為讓牦牛適應采精員進行直接身體接觸。待牦牛完全適應觸摸后，逐步減少食鹽的使用，增加觸摸力度與范圍，確保實際碰觸到牦牛肌肉，使肌肉適度受壓。觸摸需從低敏感部位向高敏感部位緩慢過渡，順序應為頭、角、耳、頸、背、睪丸、陰莖。淘汰有反抗甚至攻擊行為的牦牛淘汰。

1.3 牦牛飼養 牦牛訓練通常持續半年左右，且牦牛暖季發情，因此必須在前一年冷季完成選牛工作，所選牛只要經歷冷季到暖季的疾病高發期，因此要做好冷季補飼及暖季驅蟲、防疫工作。

2 鮮精采集

牦牛以天然草場放牧為主，采精工作通常選擇在6～9月開展。

2.1 采精前的準備

2.1.1 環境 選擇地面平整、干凈無風的草場或圈舍作為采精點。采精前清掃地面，安裝保定架、實驗臺。

2.1.2 人員 每次采精至少需要采精員2 人、記錄員1人、助手4～6人。采精員負責輪流采精及鮮精現場保存稀釋，記錄員負責記錄采精牦牛個體信息、精液信息，助手負責驅趕、牽引及保定臺牛和采精牛，一旦牦牛出現攻擊行為，助手負責引導驅趕牦牛。采精員須雙手消毒并戴一次性醫用橡膠手套，助手須穿戴工作服及線手套。

2.1.3 臺牛 檢查臺牛發情狀況，可提前72 h 注射孕馬血清進行發情控制。發情狀況良好的臺牛通過角樁法保定，清洗并消毒臺牛后軀，重點為肛門、會陰、尾根。

2.1.4 采精器械、用具及藥品 采精器械及用具主要有：特制牦牛用假陰道、假陰道遮光布套、集精杯、錐形瓶、量筒、水浴鍋、溫度計、保鮮膜、記號筆、一次性醫用橡膠手套等。

藥品：75%酒精、凡士林、0.1%高錳酸鉀溶液。

集精杯、錐形瓶、量筒使用前高溫干燥消毒，溫度計要清洗干燥并用紫外線消毒。假陰道內壁溫度和壓力的掌握也是能否順利采精的關鍵，假陰道使用前用75%的酒精做內外消毒，調節內壁壓力至與臺牛陰道內壁壓力接近，預熱至42～45 ℃，使用后拆卸清洗并用雙蒸水浸泡30 min后晾干。

2.1.5 采精牛 保定采精種公牛，其清潔消毒體表。清洗公牛下腹部，清理包皮腔內積尿和其他殘留物，用0.1%高錳酸鉀溶液洗凈其包皮并擦干。

2.2 鮮精采集 牦牛采精是通過在公牦牛進行爬跨行為時用特制假陰道代替臺牛陰道進行精液采集。采精時采精員須在采精種公牛爬跨時，迅速準確溫柔地將陰莖導入假陰道內采精，手持假陰道保持適宜位置至采精種公牛射精。uuvb在采集到精液的集精杯上做好牛號標記。

3 原精的稀釋及運輸

3.1 精液品質的檢查 對采集的新鮮精液現場進行精液計量和質量檢查。記錄牛號、原精量、活力、顏色及性狀信息。氣味異常、帶膿液或血的精液廢棄。

3.2 精液稀釋 通過目測法判定精液的活力和密度，活力在0.5以上的精液根據密度進行5～10倍稀釋。稀釋液須現配現用，將法國Optidyl稀釋原液用雙蒸水以1∶2.5 比例配置成稀釋液，配置時須將稀釋原液和雙蒸水預熱至34 ℃，并在34 ℃環境下恒溫配置并保存。稀釋時使用一次性無菌帶蓋白色儲存容器，標記好牛號，在34 ℃恒溫條件下稀釋后，放置陰涼避光處自然冷卻至室溫。

3.3 運輸 長時間的運輸必須要保證稀釋液有足夠的營養物質供精子代謝所需，避免精液活力降低。稀釋冷卻后的精液，立即用棉布包裹避光并放入車載冰箱恒溫運輸，運輸過程不超過10 h。

4 精液二次稀釋、分裝和冷凍

4.1 二次稀釋 運輸到實驗室的精液經過顯微鏡檢測后，根據活力和密度進行二次稀釋，將活力在0.5以上的精液進行分裝和冷凍。

4.2 精液分裝 使用Is4四頭一體精液灌裝機進行分裝。分裝前，提前3 h將細管放入4 ℃平衡柜進行降溫。分裝時，注意不同牛號的精液避免混裝。

4.3 精液的平衡 分裝好的精液細管需均勻平鋪在特制的冷凍架上，量大時將冷凍架進行疊放，放入4 ℃平衡柜進行緩慢降溫，降溫過程需要2.5 h。平衡過程中應做好電源供應，切忌斷電造成精液溫度回升。

4.4 冷凍 平衡結束后迅速將放有精液細管的冷凍架移入法國IMV 冷凍儀進行冷凍。冷凍時間為20 min。冷凍完成后，將精液細管快速裝入棉布袋，貼上記錄精液牛號及數量的標簽，直接放置在-196 ℃液氮中。

4.5 冷凍精液品質檢查 冷凍后的精液需在37 ℃水浴鍋中解凍后進行活力檢查，將活力在0.35以下的冷凍精液廢棄。