免疫組化檢測P16和Ki-67水平在宮頸上皮內病變診斷中的應用價值分析

李 菲 河南省開封市婦幼保健院病理科 475000

宮頸癌是目前世界上較常見的女性惡性腫瘤，每年新發病人數達50萬，死亡人數也在逐年增加，是女性癌癥死亡的主要原因[1]。在我國，宮頸癌發病率每年逐漸上升，并有年輕化發展的趨勢，嚴重影響女性的身心健康[2]。宮頸癌發生的主要危險因素是HPV感染，特別是高危型HPV感染如HPV16型和HPV18型，而其他型別感染主要引起宮頸上皮內病變和下生殖道濕疣[3]。宮頸癌患者往往在疾病早期會出現宮頸上皮內病變。因此對于宮頸上皮病變的診斷評估十分重要。本次文便采用免疫組化檢測P16和Ki-67的陽性表達情況對宮頸上皮內病變診斷進行評估，探討其臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取2016年1月—2017年10月在我院進行宮頸活檢的120例標本，根據宮頸上皮內瘤變分級標準分級及病理活檢確診，其中低級別宮頸上皮內瘤變(LSIL),即CIN Ⅰ期48例，中重度宮頸上皮內瘤變(HSIL),包括CINⅡ期32例，CIN Ⅲ期40例。納入標準：(1)病理診斷按照WHO標準確診。(2)所有患者均行TCT、HPV型別檢測并經陰道鏡下行宮頸組織活檢且病理診斷；(3)既往無宮頸癌和CIN病史；(4)既往無陰道鏡活檢史及宮頸物理、化學治療或手術史；(5)非妊娠期婦女；(6)無自身免疫性疾病、肝腎慢性疾病及其他慢性疾病；(7)所有患者均簽署“知情同意書”，同意隨訪。

1.2 方法 標本常規石蠟包埋后切片，每個病例取3張石蠟切片。上述病理切片均經病理主任醫師認定。隨后進行HE染色及免疫組化SP檢測，免疫組化使用：即用型Ki-67抗原兔抗人單克隆抗體，購自福建邁新生物技術開發有限公司(克隆號：SP6)；鼠抗P16蛋白抗體，購自福建邁新生物技術開發有限公司。

1.3 判定標準 根據已有的陽性標本及磷酸緩沖液代替一抗分別作為陽性及陰性標準，P16染色定位于細胞核和細胞質，P16染色結果根據陽性細胞在垂直平面上的定量評判：染色陽性細胞小于10%為陰性，10%～30%為(1+)，30%～50%為(2+)，大于50%為(3+)，并計算其陽性符合率。Ki-67染色定位于細胞核。Ki-67染色結果判讀依陽性細胞數判定：陽性細胞僅位于基底層判為陰性，基底層以上則為陽性，陽性細胞數占11%～30%為(1+)，31%～50%為(2+)，大于50%為(3+)。

1.4 統計學方法 患者數據資料均用Excel進行統計整理，所有數據均采用SPSS19.0軟件分析。分類變量數據用χ2檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 P16和Ki-67在各期患者中的陽性表達情況 P16在CIN各期的陽性率分別為50.0%，81.3%，100%，Ki-67在各期2+及以上的陽性率分別為31.2%，43.8%，80%。P16及Ki-67陽性率均隨著CIN等級增高而增加，組間差異具有統計學意義(P<0.05),見表1。

2.2 P16陽性表達與CIN分級符合率 P16與CIN分級符合率分別為87.5%，87.5%，95.0%，組間無統計學差異(P>0.05)。見表2。

3 討論

作為生殖系統的一大惡性腫瘤，宮頸癌已經嚴重危害到女性的健康問題。其發病原因主要是高危型人乳頭瘤病毒所導致的宮頸鱗狀上皮異常增生[4]。疾病早期可無特異性的臨床表現，不易被發現。做好疾病的早期篩查，及早發現并準確的診斷宮頸上皮病變,及時治療高級別病變是預防宮頸癌最有效的措施[5]。所以，尋找更好的方法預測宮頸上皮病變的結局和判斷早期宮頸癌的預后十分重要。為了更準確地診斷宮頸上皮病變及分級,一些輔助診斷的指標也開始應用在臨床中。P16便是一種新抗癌基因，直接參與細胞周期的調控，負調節細胞增殖及分裂，可以反饋機體細胞的異常增生情況[6]，研究發現宮頸癌和CIN中P16的高表達與HPV感染有關[7]，可將P16作為宮頸癌癌前篩查的指標，其在中重度宮頸上皮內瘤變的診斷中更具有臨床意義[8]。而Ki-67發現較P16更早，是一種增殖細胞相關的核抗與有絲分裂密切相關，但確切機制尚不清楚，檢測Ki67可作為細胞增殖的依據，陽性說明癌細胞增殖活躍[9]。在宮頸疾病中有研究顯示，Ki-67的表達在不同組織中存在顯著的差異，從CINⅠ到 CINⅢ組織中Ki-67陽性率逐漸增高。

表1 P16和Ki-67在不同組織中的陽性表達情況[n(%)]

表2 P16與CIN分級符合率

本文中P16在CIN不同組織中均表達為陽性，且存在明顯的等級相關性，組間有明顯差異(P<0.05), 且各組分級符合率接近于90%，說明P16有助于我們判斷組織病理診斷的一致性。而Ki-67同樣與CIN存在等級相關性，其陽性程度隨等級升高而增大，但其特異程度不如P16，故Ki-67對于臨床CIN的分級有輔助診斷作用。

綜上所述，免疫組化檢測P16和Ki-67水平在宮頸上皮內病變診斷中有著重要的臨床應用價值，可提高CIN分級的準確性，作為宮頸癌癌前病變的早期篩查手段。