生存蛋白在膀胱癌患者尿液脫落細胞中的表達及臨床相關性研究

徐蘭鋒,朱 丹,袁 潮

(1.錦州市中心醫院 輸血科,遼寧 錦州121001；2.錦州市中心醫院 檢驗科,遼寧 錦州121001)

膀胱癌是臨床中常見的泌尿系統腫瘤。70%膀胱癌為淺表性腫瘤，患者復發率較高，有20%的患者會向浸潤性腫瘤發展[1]。目前臨床中關于膀胱癌的診斷主要依靠膀胱鏡檢查和病理活檢，膀胱鏡是一種侵入性檢查，會增加患者痛苦，對患者產生的傷害性較大，可能會引發患者尿路感染[2]。尿細胞學檢查具有較高的特異性，會避免尿路感染發生。王宏磊[3]研究指出，選擇無創、敏感性和特異性較高的腫瘤標志物對膀胱癌的臨床診斷具有重要意義，已經成為臨床研究的熱點。Survivin是凋亡抑制蛋白家族重要的成員，其結構較為獨特，在細胞周期和抑制細胞凋亡過程中發揮著重要作用[4]。Survivin主要在胚胎組織以及大部分腫瘤組織中表達。李峰[5]研究顯示，Survivin在膀胱移行細胞癌患者中有表達，但是在正常組織中未見表達。但是有關Survivin在膀胱癌患者尿液脫落細胞中表達相關研究較少。本文旨在研究Survivin在膀胱癌患者尿液脫落細胞中的表達及臨床相關性。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本文選取2016年9月-2018年9月在我院就診的膀胱癌患者50例，分為膀胱癌組，男28例，女22例，年齡28-65歲，平均年齡(40.5±7.6)歲，BMI(23.43±3.54) kg/m2。選取同時期在我院就診的膀胱良性病變患者20例，分為良性組，其中包括：膀胱息肉8例，膀胱腺瘤6例，膀胱乳頭狀瘤6例，男12例，女8例，年齡25-65歲，平均年齡(41.1±7.8)歲，BMI(22.96±3.57)kg/m2。選取同一時期在我院健康體檢的志愿者20例，分為正常組，男10例，女10例，年齡22-60歲，平均年齡(40.4±7.5)歲，BMI(21.73±3.14)kg/m2。三組研究對象在性別比例、平均年齡、BMI比較中，無統計學差異，具有可比性(P>0.05)。

納入標準：膀胱癌和良性病變患者均經過病理學確診；膀胱癌患者未進行放療和化療治療。

排除標準：精神異常患者；肝、腎等重要器官損傷患者；妊娠期及哺乳期患者；伴有其他惡性腫瘤患者。本文研究及其家屬均知情，簽署知情通知書。

1.2 方法

1.2.1標本采集 尿液脫落細胞DNA提取：采集所有研究對象晨尿200 ml，用離心機以2 500 r/min的轉速分離，時間為15 min，得到沉淀物，即尿液脫落細胞。加入1 ml PBS將沉淀物懸浮，轉移到1.5 ml的離心管中，離心處理后，摒棄上清液，加入細胞裂解液，50℃孵育2 h，加入酚/氯仿抽提2次，采用酒精沉淀后提取DNA，之后加入0.3 ml的10 mM Tris以及1 mM EDTA進行溶解，在-20℃保持備用。

1.2.2實時熒光定量PCR檢測Survivin在尿液脫落細胞中的表達 將采集到的標本，置于一次性真空無抗凝劑的采血管中，使用Ficoll液分離單個核細胞。TRIzol提取細胞RNA，經過電泳檢測RNA并定量，經過逆轉錄合成cDNA。之后進行實時熒光定量PCR實驗，探針或SYBR 反應25 ul，反應條件滿足：94℃ 5 min,94℃ 45 s,60℃ 1 min,40個循環,設置標準組和空白對照。將PCR反應實驗前3-15個循環熒光信號作為熒光本底信號，調節基線，采用2-△△Ct分析尿液脫落細胞表達。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 所有研究對象一般臨床資料比較

如表1所示，正常組、良性組、膀胱癌組三組患者在平均年齡、BMI、性別比較中，無統計學差異(P>0.05)。

表1 兩組研究對象一般臨床資料比較

2.2 膀胱癌患者尿液脫落細胞中Survivin表達情況

如表2所示，膀胱癌組尿液脫落細胞中Survivin表達90.00%高于正常組和良性組，良性組尿液脫落細胞中Survivin表達40.00%高于正常組0.00%，具有統計學差異(P<0.05)。

表2 各組Survivin表達比較

2.3 Survivin表達與患者肌層浸潤相關性

如表3所示，有肌層浸潤患者Survivin表達89.29%高于無肌層浸潤患者54.55%，具有統計學差異(P<0.05)。

表3 Survivin表達與患者肌層浸潤相關性比較(%)

2.4 Survivin表達與患者T分期相關性

如表4所示，T分期≥T2期患者Survivin表達86.67%高于T分期

表4 Survivin表達與患者T分期相關性比較(%)

2.5 Survivin表達與患者不同病理分級相關性

如表5所示，病理分級G2-G3級患者Survivin表達88.89%高于病理分級G1級患者47.83%，具有統計學差異(P<0.05)。

表5 Survivin表達與患者不同病理分級相關性比較(%)

3 討論

近年來研究數據顯示，膀胱癌發病率、病死率逐年升高[6]，對患者的健康產生嚴重的危害，同時增加了患者家庭及其社會的經濟負擔，因此對膀胱癌患者做到早期診斷尤為重要。目前關于膀胱癌發病機制較為復雜，受多種因素影響。膀胱癌中大部分為膀胱移行細胞癌，膀胱癌復發、轉移以及患者的預后受癌細胞侵襲肌層、血管的影響，其中Survivin是腫瘤特異性凋亡抑制蛋白[7，8]，Mazoochi T[9]研究認為，腫瘤特異性凋亡抑制蛋白在惡性腫瘤中顯示特異性表達。

尿脫落細胞學檢測是一種無創尿液檢測，相關研究顯示，在分化差以及高病理期的膀胱癌中，經過尿脫落細胞學診斷發現陽性率較高，在分化較好的膀胱癌中，經過尿細胞學檢查檢查發現陽性率較低，因此臨床中膀胱癌尿細胞學陽性顯示膀胱癌是侵襲性癌癥以及分化較差[10,11]。Survivin是凋亡抑制蛋白家族中的新成員，Survivin過度表達會對細胞凋亡的內外途徑起抑制作用。Survivin在終末分化的成人組織中不表達，在結腸癌、肺癌等惡性腫瘤中顯示過度表達[12]。臨床中主要采用RT-PCR檢測患者尿液脫落細胞中Survivin RNA，其中敏感度為64%-94%，特異度為93%-100%，敏感度和特異度較高，可作為新型的腫瘤標記物[13]。本文研究結果顯示，膀胱癌組尿液脫落細胞中Survivin表達高于正常組和良性組，良性組尿液脫落細胞中Survivin表達高于正常組。說明Survivin在正常人中無表達，在膀胱癌尿液脫落細胞中表達水平較高。與林禎祥[14]研究結果保持一致。

研究顯示，Survivin表達在區分原發膀胱腫瘤，評估腫瘤無復發間期的長短發揮著重要作用[15,16]。長無復發間期Survivin診斷率是71.4%，短無復發間期診斷率是69.6%；是評估膀胱癌臨床復發的重要指標[17]。本文研究結果顯示，有肌層浸潤患者Survivin表達高于無肌層浸潤患者，說明Survivin表達與膀胱癌有無肌層浸潤有關。Survivin表達提升與腫瘤的組織分化有關，徐海波[18]研究指出，在不同臨床分期的膀胱癌患者中發現，Survivin在癌組織中高表達，隨患者病情發展，Survivin表達逐漸升高，尤其是在Ⅳ期，Survivin表達最高。本文研究數據顯示，T分期≥T2期患者Survivin表達高于T分期

綜上所述，Survivin在膀胱癌患者尿液脫落細胞中顯示高表達，其表達水平與患者肌層浸潤、T分期、病理分級有關，參與膀胱癌發展。