宮頸上皮內瘤變Ⅲ級與宮頸癌患者及其配偶人乳頭狀瘤病毒16型和18型感染情況▲

許娟秀 吳海根

(江西省婦幼保健院腫瘤科，南昌市 330006，電子郵箱：juanxiu_xjx@163.com)

宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)，或稱為宮頸非典型增生，其特征是子宮頸表面細胞的異常生長并具有癌前轉化的潛力，可致宮頸癌[1-2]，其最常發生于宮頸鱗狀柱狀細胞交界處[3]。人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染與CIN發生有關，HPV感染是宮頸惡性腫瘤的重要致病因素[4]。研究發現，HPV16型或HPV18型感染引起CIN的快速進展[5]，如果不及時治療有小部分患者會發展為宮頸癌[6]。

目前，我國宮頸癌的發生率已上升為世界第二位[7]。HPV感染是宮頸惡性腫瘤的重要致病因素，預防HPV感染具有重要意義。研究表明，有99.7%的宮頸癌組織存在HPV DNA，而且HPV16型、18型是引起宮頸癌最常見的高危類型[8]。有研究證實，男性陰莖感染HPV可增加配偶患宮頸癌的概率[9-10]。因此，男性HPV感染在宮頸癌發生和發展中的作用不可忽視。本研究通過分析CINⅢ級和宮頸癌患者及其配偶HPV16、HPV18型的感染特點，以期為宮頸癌的預防及男性HPV疫苗接種提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入2017年1月至2018年1月于江西省婦幼保健院腫瘤科確診的CINⅢ級或宮頸癌患者及其配偶各100例。納入標準：(1)CIN組：CINⅢ級患者均為行宮頸錐切術或宮頸電熱圈環切術后患者，并經病理檢查證實為CINⅢ級。(2)宮頸癌組：宮頸癌患者為宮頸活檢或宮頸癌術后經病理檢查證實。排除標準：婚前有初次性生活，夫妻二人的性伴侶數>1個；離異、丈夫死亡或丈夫外出且近1年無性生活史。CINⅢ級患者59例，宮頸癌患者41例，年齡(34.1±5.9)歲；男性配偶100例，年齡(37.2±8.2)歲。本研究經江西省婦幼保健院醫學倫理委員會批準，所有研究對象均知情同意。

1.2 主要試劑和儀器 病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒[天根生化科技(北京)有限公司，批號：20160083]；HPV16型、HPV18型核酸測定試劑盒(PCR-熒光探針法，北京華大吉比愛生物技術有限公司，批號：20133400984、20173401097)；CFX96熒光定量PCR儀(美國Bio-Rad公司)。

1.3 樣本采集與保存 (1)采集CINⅢ級或宮頸癌患者的宮頸脫落細胞。檢查前3 d禁止陰道沖洗及使用陰道內藥物，檢查前1 d禁止同房，避免在月經期檢查。由婦科醫生采用專用采樣刷置于宮頸口及宮頸管內均勻用力旋轉5圈，采樣后將采樣刷放入專用細胞保存液的取樣管中，-20℃保存，在1～2周內檢測HPV16型、HPV18型 DNA。(2)采集患者配偶的尿道口脫落細胞樣本。檢查前1 d禁止同房及前列腺按摩，由泌尿外科醫生采用專用采樣刷進行采樣，將采樣刷置入尿道口均勻用力旋轉5圈，采樣后將采樣刷放入專用細胞保存液的取樣管中，-20℃保存，在1～2周內檢測HPV16型、HPV18型DNA。

1.4 HPV DNA提取 取細胞保存液0.5 mL，12 000 r/min離心1 min，保留沉淀；使用病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒提取DNA，操作過程嚴格參照試劑盒說明書。測定光密度值(optical density,OD)確定DNA的質量，當OD260/OD280為1.8～2.0時，表示DNA質量滿足檢測要求。

1.5 PCR擴增 將上述提取的DNA作為模板進行擴增；采用HPV16型、HPV18型核酸測定試劑盒進行，PCR反應體系為40 μL，包含PCR HPV16/18反應混合液35.6 μL、Taq酶0.4 μL、DNA樣本4 μL。應用CFX96熒光定量PCR儀進行擴增反應，反應程序為94℃ 2 min、93℃ 10 s、62℃ 31 s，循環40次。通道設置為FAM和VIC。結果判讀：FAM檢測通道Ct值≤38，且擴增曲線呈典型的“S”形，則結果判斷為HPV16型陽性，否則為陰性；VIC檢測通道Ct值≤38，且擴增曲線呈典型的“S”形，則結果判斷為HPV18型陽性，否則為陰性；如果FAM和VIC通道Ct值均≤38，且擴增曲線均呈“S”形，則結果判斷為HPV16型和HPV18型雙重感染陽性。統計夫妻感染情況時，HPV16型陽性指且夫妻雙方同時HPV16型陽性但不包含雙重感染，HPV18型陽性指夫妻雙方同時檢出HPV18型陽性但不包含雙重感染，雙重感染陽性指夫妻雙方同時檢出雙重感染陽性，共同感染指夫妻雙方同時感染同一亞型HPV。

1.6 統計學分析 采用EpiData 3.1軟件進行雙人雙錄入相關資料，經過一致性檢驗后導出為SPSS數據文件。采用SPSS 18.0軟件進行統計分析。計數資料以例數或百分比表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 HPV16型、HPV18型感染的總體分布情況 200例樣本中，檢出HPV陽性123例，其中HPV16型陽性91例，HPV18型陽性59例，雙重感染陽性27例，HPV16型陽性率高于HPV18型陽性率(χ2=10.923，P=0.001)。100例男性配偶中，HPV陽性56例(56.0%)，其中HPV16型陽性41例(41.0%)，HPV18型陽性20例(20.0%)；100例女性患者中，HPV陽性67例(67.0%)，其中HPV16型陽性50例(50.0%)，HPV18型陽性39例(39.0%)。見表1。

宮頸癌組女性HPV16型和HPV18型陽性率均高于CIN組女性(χ2=9.301，P=0.002；χ2=21.061，P<0.001)。宮頸癌組配偶(男性)HPV16型陽性率高于CIN組配偶(男性)(χ2=11.461，P<0.001)，而兩組男性HPV18型陽性率比較，差異無統計學意義(χ2=3.731，P=0.053)。見表1。

表1 宮頸癌或CINⅢ級患者及其配偶HPV16型、HPV18型感染的分布(n)

2.2 夫妻間HPV16型和HPV18型感染情況 100對夫妻中，HPV16型陽性36對(36.0%)，HPV18型陽性12對(12.0%)，雙重感染陽性3對(3.0%)，HPV16型陽性率高于HPV18型陽性率(χ2=15.790，P<0.001)。41對宮頸癌組夫妻中，HPV16型陽性22對(53.7%)，HPV18型陽性10對(24.4%)，雙重感染陽性2對(4.9%)；余7對夫妻中，3對僅女性感染，4對雙方均未感染；共同感染率為82.9%(34/41)。59對CIN組夫妻中，HPV16型陽性14對(23.7%)，HPV18型陽性2對(3.4%)，雙重感染陽性1對(1.7%)；余42對夫妻中，13對僅女性感染，5對僅男性感染，24對雙方均未感染；共同感染率為28.8%(17/59)。

宮頸癌組夫妻HPV16型、HPV18型陽性率和共同感染率均高于CIN組夫妻(χ2=9.405，P=0.002；χ2=10.103，P=0.002；χ2=28.345，P<0.001)；兩組夫妻雙重感染陽性率差異無統計學意義(χ2=0.104，P=0.748)。

3 討 論

HPV的核酸是環狀DNA，人類是其唯一宿主，其主要感染人體特異部位皮膚黏膜的鱗狀上皮，因此HPV感染有較高特異性。CIN是一種典型的宮頸癌前病變。目前已確認高危型HPV的持續感染是導致CIN進展的重要原因[11]，控制HPV的感染是預防CIN的關鍵途徑。研究發現，HPV可以通過性生活在夫妻間傳播，宮頸癌患者的配偶感染HPV的危險性更大[10]；而男性陰莖感染HPV，又可明顯增加配偶罹患宮頸癌的危險性[12]，因此男性在婦女宮頸癌發生和發展中的作用不可忽視。

本研究探討CINⅢ級和宮頸癌患者及其配偶高危型HPV(16型和18型)的感染情況。結果顯示，200例樣本中，總體上HPV16型陽性率高于HPV18型陽性率，其中宮頸癌組女性HPV16型和HPV18型陽性率均高于CIN組女性，宮頸癌組男性HPV16型陽性率高于CIN組男性(均P<0.05)，表明在CINⅢ級和宮頸癌患者及其配偶中以HPV16型感染為主，且宮頸癌組患者及其配偶的HPV16型陽性率更高；在100對夫妻中，總體上HPV16型陽性率高于HPV18型陽性率，其中宮頸癌夫妻的HPV16型陽性率、HPV18型陽性率及共同感染率均高于CIN夫妻(均P<0.05)，表明夫妻間仍以HPV16型感染為主，且宮頸癌夫妻HPV16型的陽性率也更高。上述研究結果的原因可能與宮頸癌是由CIN進展而來，而CIN是因感染HPV有關。但本研究未發現宮頸癌夫妻與CIN夫妻的雙重感染陽性率存在差異，可能與本研究樣本量較小有關，未來需要擴充樣本量進一步研究。劉學偉等[13]對120例高危型HPV陽性女性患者及其配偶進行病毒檢測，發現19對共同感染夫妻對中HPV16型和HPV18型的陽性率分別為57.9%、15.8%；呂金明等[14]對100例高危型HPV陽性女性患者及其配偶進行病毒檢測，發現20對共同感染的夫妻中HPV16型和HPV18型的陽性率分別為45.0%、0%；但本研究中，共同感染夫妻對的HPV16型和HPV18型陽性率分別為76.5%(39/51)和29.4%(15/51)，均高于上述研究。研究間的結果差異或與研究對象不同有關，但這表明CINⅢ級及宮頸癌女性患者與其配偶感染同型HPV的機會更高。結合本研究結果，我們可以推測，與HPV18型相比HPV16型的致病力更強，由HPV16型感染引起的CIN或許更易向宮頸癌發展。本研究結果表明，CINⅢ級及宮頸癌患者與其配偶感染同型HPV的機會更高，而在兩性關系中，男性在性行為方面通常更主動，再加上HPV可通過性行為在兩性間傳播，因而在防治HPV感染方面，不能僅關注女性HPV感染情況，同時也要檢測男性配偶的HPV感染情況，這樣才能減少HPV在兩性間的傳播，從源頭上降低宮頸癌的發病率。

綜上所述，CINⅢ級和宮頸癌患者及其配偶以HPV16型感染為主，且宮頸癌患者及其配偶的HPV16型陽性率均高于CIN者，提示由HPV16型感染引起的CIN或許更易向宮頸癌發展，男性配偶在宮頸癌防治中有重要作用。