一例病毒性腹瀉的診斷與防治

李 凡，趙坤坤，劉守川

（洛陽中科基因檢測診斷中心有限公司，河南 洛陽 471000）

豬流行性腹瀉（Porcine epidemic dianthea,PED）是由PEDV引起的一種急性、高度接觸性腸道傳染病[1]，以腹瀉和脫水為典型癥狀。一年四季均可發病，冬、春季節多發。不同日齡、性別和品種的豬均可感染，其中哺乳仔豬的發病率和死亡率最高，成年豬癥狀較輕。臨床上引起仔豬腹瀉的原因有很多，病毒病、細菌病、寄生蟲病、營養性以及中毒等因素均可導致豬腹瀉的發生[2]，其中病毒病的病原主要包括豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬輪狀病毒（PoRV）和δ冠狀病毒（PDCoV）。由于PEDV的臨床癥狀與其它病毒性腹瀉類似，臨床和病理變化診斷不能有效地區分，因此需要借助實驗室診斷技術進行確診，以進行針對性地治療和防控。

1 發病情況

2018年3月初，河南省安陽市林州市某規模化豬場（存欄母豬120頭左右）部分欄舍暴發仔豬腹瀉，7日齡仔豬出現嘔吐、水樣腹瀉和脫水癥狀，排出腥臭味灰色或黃色帶有氣泡的糞便，夾有大量未消化的凝乳塊，精神沉郁，且死亡率高于80%。養殖戶使用抗生素進行治療，未見好轉。該豬場保育豬和肥育豬等豬群未出現明顯臨床癥狀，表明該豬場未發生豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病和豬圓環病毒病等繁殖障礙性傳染病。

2 臨床癥狀與病理變化

2.1 臨床癥狀

經過臨床觀察，腹瀉豬為仔豬，臨床表現為：病豬消瘦，精神沉郁，眼窩下陷，拉灰色或黃色水便，腥臭；腹瀉前后嘔吐，嘔吐物為未消化的凝乳塊。病豬腹瀉3～4 d后死亡，嚴重時整窩死亡。

2.2 病理變化

對死亡和瀕死的仔豬進行剖檢，表現為卡他性胃腸炎。胃腺區黏膜出血，胃內充滿黃色或灰色液體，含有泡沫和未消化的凝乳塊。小腸膨脹，腸壁變薄，呈半透明狀，腸壁充血。腸系膜充血，腸系膜淋巴結水腫。其它實質性器官無明顯病變。

鑒于豬群的發病特點、臨床癥狀與病理變化，筆者初步判斷該豬場的腹瀉可能是由豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬輪狀病毒等腹瀉性病毒引起的。筆者將腹瀉樣品送至洛陽中科基因檢測診斷中心有限公司進行病原診斷，以確診發病原因。

3 實驗室診斷

將3頭發病仔豬進行無菌剖檢，取病變小腸剪碎后放入無菌試管內，加適量無菌水充分研磨，4℃3 000 r/min離心3 min，取上清液按照全自動核酸提取儀說明書進行核酸提取，采用RT-PCR技術分別檢測PEDV、TGEV、PoRV和PDCoV，結果樣品編號為180366的3份樣品均為PEDV陽性（圖1，A），TGEV、PoRV和PDCoV均為陰性。

將180366-1的小腸樣品進行免疫組化試驗，結果為小腸的細胞胞質內呈棕黃色著染（圖2），為PEDV陽性，TGEV和PoRV均為陰性。該結果進一步證明了是PEDV導致的仔豬腹瀉。

筆者將編號180366-1的S基因部分序列進行擴增和測序，并對測序結果進行序列核苷酸同源性分析和遺傳進化分析，以確定PEDV毒株是否為流行株。結果表明，該樣品在532 bp處有特異性擴增條帶（圖1，B），與預期相符。該毒株與參考毒株序列（表1）的同源性為82.7%～98.2%（圖3），與XX的同源性最高，為98.2%；與CV777的同源性僅為82.7%。根據S基因構建的進化樹分為2個基因群，第一個基因群又分為3個基因亞群，第二個基因群又分為2個基因亞群（圖4）。180366-1屬于第1個基因群的第2亞群，為流行株，與HeN-NY-2016最相似。

表1 PEDV參考毒株信息

4 治療與防控

4.1 隔離、消毒

將患病豬群與其它健康豬群隔離，專人飼養，并對病豬進行治療，若無法治愈，則進行豬群撲殺并無害化處理。在全場范圍內用消毒劑進行消毒和衛生清理，并且定期更換不同機制消毒劑，對地面、圈舍、用具、車輛等物品進行消毒。

4.2 緊急注射疫苗

該豬場免疫的是TGEV-PEDV二聯疫苗，其中PEDV疫苗株為CV777毒株，而該豬場暴發的是流行株，二聯疫苗對豬群不能提供有效的保護，若豬群繼發其它疾病，則會使得免疫效果更差。另外，豬群在后期有可能還會再次發生PEDV引起的腹瀉。所以，我們選用武漢科前生物股份有限公司的產品—“科瀉寧”對豬群進行緊急疫苗接種，它是豬傳染性胃腸炎和豬流行腹瀉二聯苗，PEDV疫苗株來源為AJ1102株，是基于PEDV流行株研發的疫苗，對PEDV流行株具有較好的防控效果。

4.3 防控措施

做好豬場的生物安全防控，嚴格控制人員進出[3]。改善豬場衛生，保持地面干燥，定期進行通風換氣，及時做好仔豬的保溫等工作。飼料和飲水要確認無PEDV污染后才能進行飼喂，飲水中可適量添加電解質多維，保證飼料營養豐富，提高生豬免疫力和抵抗力。

通過以上免疫和防控措施，9 d后，豬場內的腹瀉疫情得到了有效控制，仔豬的發病率和死亡率明顯降低。保育豬有少量發病且無死亡，其它豬群并未發病。

5 小結

腹瀉是養豬生產中常見的疾病之一，可造成哺乳仔豬大量死亡，各日齡豬均可發病。臨床上有多種原因可引起豬腹瀉，而豬流行性腹瀉等病毒病是引起腹瀉的重要病原之一。自2010年底，PED在我國大規模暴發，一直未能得到有效控制，給我國養豬業造成了嚴重的危害[4-5]。PEDV病毒株，通常可分為疫苗株、經典株和流行株，雖然豬場大多已經免疫了TGEV-PEDV（CV777源）二聯疫苗，但豬場仍會暴發PEDV引起的腹瀉，并多為流行株引起的，說明二聯疫苗不能為現有的流行毒株提供有效的保護，原因是流行株與CV777疫苗株相比，發生了大量的基因突變[6]，同源性較低，免疫后不能產生保護性的抗體。所以，豬場可以選擇基于PEDV流行株研發的滅活苗或弱毒苗進行免疫，定期對水樣和飼料等樣品進行病原監測，在發生腹瀉等癥狀后，需及時將病料送至實驗室進行檢測和診斷，確定造成腹瀉的原因，并對癥治療，防止繼發感染。