豬繁殖與呼吸綜合征和弓形蟲病混合感染的診斷與防治

郎利敏，王克領，張立憲，游 一，徐引弟，焦文強，朱文豪

（河南省農業科學院畜牧獸醫研究所，河南 鄭州 450002）

豬繁殖與呼吸綜合征，又稱豬藍耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種豬烈性傳染病，各種年齡的豬均可感染，主要表現為母豬高燒、繁殖障礙，產死胎、木乃伊胎和弱仔等，仔豬、保育豬、肥育豬主要表現為高熱、氣喘、呼吸困難等呼吸道病癥狀，死亡率可達100%[1]，是嚴重威脅我國養豬業健康發展的重要疾病之一。

弓形蟲病又稱為弓漿蟲病或弓形體病，是由剛第弓形蟲（Toxoplasmagondii）引起的一種人畜共患原蟲病，豬發病以高熱稽留、呼吸困難、妊娠母豬流產、死胎等為特征。可通過口、鼻、眼、呼吸道、消化道及皮膚等多種途徑侵入豬體。只有磺胺類藥物對其有良好的治療效果，其他藥物無效[2]。近些年，豬弓形蟲病的發病呈現上升趨勢，嚴重危害了養豬業的發展。

2018年8月，河南開封某豬場肥育豬群發生一例疑似豬繁殖與呼吸綜合征和弓形蟲病混合感染疫情，為確診病因，進行了實驗室剖檢病變觀察、RT-PCR檢測、弓形蟲間接血凝抗體檢測，確診該病例為豬繁殖與呼吸綜合征病毒和弓形蟲混合感染，通過采取改善飼養管理、使用有效藥物等措施，及時控制了疫情，現報道如下。

1 發病情況

開封某發病豬場存欄40 kg左右肥育豬300頭，7月底豬群開始出現發燒、減食，病豬呼吸困難，皮膚發紅，有的急性死亡，發病前期使用替米考星和氟苯尼考進行治療，連續用藥7 d，期間發病、死亡豬不斷增加，疫情無法控制，遂來河南省農業科學院動物疫病診斷中心就診。

2 臨床癥狀

病豬高熱，體溫41.5～42.0℃，精神沉郁，采食量下降或廢絕，呼吸困難，呈明顯的腹式呼吸，眼結膜潮紅，發病初期頭部、四肢、腹下出現紫紅色出血斑，后期全身紫紅色，個別豬有神經癥狀、后肢癱瘓、無法站立，有的急性死亡。

3 剖檢病變

剖檢病死豬3頭，全身淋巴結腫大、出血，切面有灰白色干酪樣壞死灶；肺臟紫紅色，出血、腫脹、實變，肺間質增寬，充滿黃色膠凍樣水腫液；胸腔、心包腔有淡黃色、清亮滲出液；心外膜有針尖大出血點，喉頭黏膜、膀胱黏膜有出血點；肝臟腫大，質硬，暗紅色，上有少量灰白色、灰黃色粟粒大小壞死灶；脾臟腫大、出血，邊緣有少量梗死灶；胃底黏膜彌漫性出血，有的豬有潰瘍灶。

4 實驗室診斷

4.1 病料

發病豬場送檢病豬3頭、血清20頭份。

4.2 主要試劑

RNA提取試劑盒、DL 2 000 Marker、瓊脂糖、Taq酶、MLV反轉錄酶以及RNA酶抑制劑，購自于寶生物工程（大連）有限公司。豬繁殖與呼吸綜合征病毒特異性引物由上海生工公司合成。弓形蟲間接血凝診斷抗原、標準陰、陽性對照血清，購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

4.3 病毒RT-PCR檢測

無菌操作采集病豬的肺臟、脾臟、淋巴結等組織約1 g，剪碎，加1mL無菌PBS液，研磨之后將研磨管中的液體倒入1.5 mL EP管，-70℃反復凍融3次，12 000 r/min離心3min，取100μL上清液用于RNA的提取。

4.3.1 引物合成 參考GenBank中已發表的PRRSV毒株ORF5序列的保守區序列，應用Premier5.0軟件設計引物，ORF5-F:5'-CCATTCTGGTGG CAATTTGA-3'，ORF5-R:5'-GGCATATATCATCACT GGCG-3'。預期擴增目的片段436 bp。

4.3.2 病毒RNA提取及PCR擴增 按照RNA提取試劑盒操作說明提取病毒總RNA，提取后的RNA隨即進行反轉錄反應。反轉錄體系如下：2×buffer 2 μL，dNTP 2μL，隨機引物0.3μL，RNA酶抑制劑0.3μL，MLV反轉錄酶0.5μL，RNA 4.9μL，共10 μL。混合均勻后置于42℃水浴1 h，然后放置70℃水浴滅活10min后放4℃冰箱冷卻15min后配制PCR反應體系：2×PCR buffer 2.5μL，dNTP 4μL，上、下游引物各1μL，TaqDNA聚合酶0.5μL，cDNA 5μL，滅菌雙蒸水補足25μL。反應體系如下：95℃預變性5 min，94℃變性30 s，56℃退火45 s，72℃延伸1min，35個循環后72℃延伸10min。PRRSV預期大小片段為436 bp，反應結束后取10μL PCR產物于1%瓊脂糖凝膠進行電泳，在凝膠成像系統上觀察擴增的目的片段[3-6]。

4.4 弓形蟲檢測

無菌操作取病豬的肝、脾、肺門淋巴結等涂片，干燥固定，經姬姆薩氏法染色后，低倍鏡觀察。采集病豬血清12頭份、同群健康豬血清8頭份，使用中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產的弓形蟲抗體間接血凝檢測試劑，按說明書方法進行弓形蟲抗體檢測。

5 結果與分析

5.1 PRRSV的RT-PCR檢測結果

從送檢3頭病豬的肺臟、脾臟、淋巴結的混合病料中擴增出了長度約436 bp的目的片段，與預期的結果一致，表明所檢測的病料為PRRSV陽性。

5.2 弓形蟲檢測結果

無菌操作取病豬的肝、脾、肺門淋巴結等涂片，干燥固定，經姬姆薩氏法染色后，低倍鏡下觀察，發現少量半月形的弓形蟲滋養體，胞漿呈淺藍色，核呈深藍紫色，偏于蟲體一端，核與尖端之間有顆粒。

檢測病豬血清12頭份，弓形蟲抗體呈陽性10頭，陽性率83%，同群健康豬血清8頭份，弓形蟲抗體呈陽性1頭，陽性率12.5%，結果表明，該豬群有弓形蟲感染。

6 綜合防制措施

綜合發病情況、臨床癥狀、剖檢變化和實驗室檢測結果，確診該起疫情為豬繁殖與呼吸綜合征病毒和弓形蟲混合感染，針對該結果采取了相應的綜合防制措施。

將病豬隔離、單獨飼養，部分病程較長、病情嚴重的豬淘汰并實行嚴格的無害化處理。清除糞污，采用3%燒堿水溶液對全場地面及用具進行徹底消毒，杜絕貓在豬場活動，做好豬場、豬舍、外來人員和車輛的清潔衛生和日常消毒工作，加強通風、降溫，減少應激，提高豬群抵抗力。

全群飼料中加入20%替米考星預混劑1 kg/t飼料、磺胺氯達嗪1 kg/t飼料，扶正解毒散1 kg/t飼料，混勻，連用7～10 d，停藥；飲水中添加優質電解質多維1 kg/t、葡萄糖5 kg/t，自由飲用，連用15 d。

病豬注射磺胺間甲氧嘧啶鈉注射液，首次量加倍，1次/d，連續注射4 d。采用上述措施3 d后，部分病豬精神、食欲等有所好轉，豬群中新發病例明顯減少；1周后豬群基本正常，10 d后豬群全部恢復正常，期間有9頭嚴重病豬治療無效，死亡，其他豬全部恢復健康。

7 小結與體會

（1）豬繁殖與呼吸綜合征和弓形蟲病都是豬場的常見病，相關病例報道很多，但有關兩者混合感染的報道較為少見。本病例通過采用臨床剖檢、實驗室檢測、使用對弓形蟲有效的磺胺類藥物、對繁殖與呼吸綜合征有效的藥物，配合使用抗病毒、提高機體免疫功能的中藥等措施，很快控制了疫情，取得了良好的治療效果，說明對本次疫情診斷正確、治療措施得當。

（2）豬繁殖與呼吸綜合征是豬的一種病毒性傳染病，各日齡的豬均易感，由于PRRSV以具有重要免疫功能的肺泡巨噬細胞為靶細胞，破壞宿主免疫功能，造成帶毒豬免疫抑制，從而易混合或繼發感染其他疫病[7]。弓形蟲病的分布十分廣泛，在豬群中的感染也很常見。貓（以及其他貓科動物）是唯一的終未宿主，在弓形蟲傳播中起重要作用，豬通過食入了被弓形蟲卵囊污染的飼料或飲水而引起感染發病[8]。據場主反映，近期豬場內有野貓活動，因此，此次發病的主要原因可能是帶弓形蟲卵囊的野貓糞便污染了飼料或飲水，而同時加上7、8月份圈舍內氣溫高，豬舍通風不良，濕度大，存在各種不良應激因素，導致豬弓形蟲病與豬繁殖與呼吸綜合征混合感染。

（3）對于藍耳病的防治，目前沒有特效藥物，疫苗免疫作用有限，只能通過改善和加強飼養管理，減少各種不良應激因素，提高機體自身的抵抗力，來減少該病的發生。

（4）弓形蟲病存在發病快、死亡率高等特點，目前臨床上治療弓形蟲病最有效的方法是使用磺胺類藥物，其他抗菌藥無效，如果早期診斷、早期治療均能收到良好的效果，如較遲用藥，雖可使豬不表現臨床癥狀，但蟲體已進入臟器組織中形成包囊，使患豬成為帶蟲者并成為傳染源，有可能使豬場再次發生弓形蟲病[9-10]。治療時應注意：用藥劑量要足，應按照藥物說明書治療量使用，首次劑量要加倍；治療療程要夠，治療弓形蟲病一個療程需要7～10 d，才能取得良好的效果。同時要做到連續用藥，不能病情好轉就停藥，否則易復發，且復發后再治療會十分困難。

（5）弓形蟲病和藍耳病、鏈球菌病、豬肺疫等都表現出高熱、呼吸困難、肺臟出血等，在臨床癥狀、剖檢病理變化等方面十分相似之處，生產中經常出現誤診，不能及時采取有針對性的措施而貽誤病情，造成較大的傷亡。因此、豬場出現疫情時，應及時到專業機構進行實驗室檢測，盡早確定發病原因，采取相關措施，減少發病和死亡。