慢性乙型肝炎外周血漿樣樹突狀細胞與免疫應答的關系及干預分析

馬春明 張鎖才 史羅明 吳劍明 周根法 鄭劍

慢性乙型肝炎(以下簡稱“乙肝”)是全球性感染疾病，患者多存在肝纖維化，是乙肝患者疾病進展的重要環節。研究指出[1]，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)特異性免疫應答有賴于抗原提呈細胞功能，而樹突狀細胞(dendritic cell，DC)為功能最強的抗原提呈細胞。DC前體受到炎癥因子、巨噬細胞等趨化因子的作用遷移至實體器官，經吞噬、受體介導等途徑攝取抗原，在黏附分子、協調刺激分子及其受體的作用下誘導特異性T細胞免疫應答。近年研究發現[2]，外周血DC也參與肝纖維化過程，與肝纖維化患者的免疫應答存在一定相關性，但仍缺乏大樣本驗證，而有關抗病毒治療對外周血DC影響的分析也較為缺乏。本研究回顧性分析104例乙肝患者的外周血DC與免疫應答的相關性及不同抗病毒方案對外周血DC的影響，現報道如下。

資料與方法

一、一般資料

本研究為回顧性分析，病例資料來源于本院2014年4月—2017年12月收治的104例乙肝患者，其中男58例、女46例；年齡29～53歲，平均(43.18±6.31)歲；體質量指數19～25 kg/m2，平均(22.41±2.04)kg/m2；HBV DNA在3.2～5.4 lg IU/mL，平均(4.32±0.74)lg IU/mL。

納入標準：①符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》[3]中診斷標準，經肝穿刺組織病理活檢確診，肝纖維化分級為S1～S3級；②年齡18～55歲；③HBeAg陽性；④血清免疫學檢查證實無其他肝炎病毒感染；⑤入組前半年內無抗病毒與免疫調節治療史；⑥臨床資料完善。排除標準：①伴脂肪肝、酒精性肝炎、自身免疫性肝炎者；②伴心、腦、腎、肺等基礎疾病或其他免疫功能疾病者；③伴結核、梅毒、艾滋病等其他感染疾病者；④靜脈藥癮者；⑤伴上消化道出血、惡性腫瘤者。

二、方法

所有患者均于治療前采用流式細胞術進行外周血DC亞群檢測，并采用抗病毒治療，治療藥物包括恩替卡韋、拉米夫定、阿德福韋酯，總療程均為48周，治療完成后再次檢測外周血DC亞群及HBeAg特異性T細胞免疫反應，設立實驗孔與陰性對照孔，免疫應答判定標準：實驗孔斑點形成細胞>2倍陰性對照孔。分析外周血DC與免疫應答的相關性及不同抗病毒方案治療前后的外周血DC。

三、統計學方法

結 果

一、外周血DC與免疫應答的相關性分析

104例患者治療48周后，共75例(72.12%)患者出現HBeAg特異性T細胞免疫應答。免疫應答患者的外周血DC1與DC2數量均顯著高于非免疫應答患者(P<0.05)，免疫應答與外周血DC1、DC2(r=0.568，0.577，P=0.011，0.019)顯著相關(P<0.05)。肝纖維化分級從S1至S3，外周血DC1、DC2數量均逐漸下降，存在顯著相關性(r=0.610，0.528，P=0.008，0.027)。見表1。

二、不同治療方案患者的外周血DC變化

104例患者中，恩替卡韋治療37例、拉米夫定治療38例、阿德福韋酯治療29例。3組治療后外周血DC1數量與DC2數量均較治療前顯著升高(P<0.05)。恩替卡韋組治療后的外周血DC1、DC2數量顯著高于拉米夫定組與阿德福韋酯組(P<0.05)。見表2。

討 論

人體感染HBV后的預后與多種因素有關，如HBV數量、肝細胞受損程度、宿主免疫應答等(細胞免疫與體液免疫)。DC是功能最強的抗原呈遞細胞，可激活機體免疫。

本研究中結果顯示，外周血DC與肝纖維化之間存在明顯相關性，患者肝纖維化分級越高，外周血DC1與DC2均更低。有專家認為[4]，HBV可直接感染DC并誘導其凋亡加速或成熟障礙，使外周血DC1與DC2減少。而HBV造成的肝細胞損傷是引起乙肝患者發生肝纖維化的主要原因，隨著乙肝病情加重，肝纖維化分級升高，DC1與DC2減少。另外，產生免疫應答的患者外周血DC1與DC2相對更高，提示外周血DC與免疫應答明顯相關。研究發現[5]，HBV感染會阻斷非成熟DC向成熟DC的轉化過程，使DC上CD4、CD86等表面分子表達下調，無法有效識別、加工抗原及激活HBV特異性T淋巴細胞。林芳[6]的研究發現，HBeAg可刺激乙肝患者產生特異性T細胞應答，抗病毒療效越差，患者HBeAg特異性T細胞應答率越低。故對于HBeAg陽性者，外周血DC越低，對HBeAg的識別與加工能力越弱，越難以激活免疫應答。

表1 免疫應答患者與非免疫應答患者不同纖維化分期的DC比較

注：與非免疫應答患者比較，*P<0.05

表2 不同治療方案患者的DC變化

注：與治療前比較，*P<0.05；與拉米夫定組比較，①P<0.05；與阿德福韋酯組比較，②P<0.05

抗病毒是目前乙肝的主要治療方案，常用藥物包括恩替卡韋、拉米夫定、阿德福韋酯等，可有效抑制HBV存活、延緩肝纖維化進展。已有證據表明[7]，上述3種藥物中恩替卡韋的抗病毒作用最強。本研究中，恩替卡韋組患者經治療后的外周血CD1與CD2也較其他2組更高，進一步證實外周血CD1可在一定程度上反映乙肝病情。馮曉霞等[8]的研究認為，恩替卡韋對肝纖維化的延緩作用強于拉米夫定與阿德福韋酯，與本研究結論相符。

綜上，外周血DC與免疫應答之間存在明顯相關性，乙肝患者外周血DC越低，免疫應答率越低。核苷酸類似物抗病毒治療可抑制肝纖維化、提高外周血DC，且恩替卡韋的作用強于拉米夫定與阿德福韋酯。