免疫膠體金診斷技術(shù)在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用

王明利 張 浩

北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院畜牧獸醫(yī)系，北京102442

免疫膠體金診斷技術(shù)與ELISA 檢測方法比較類似，起初在血清和尿液檢測中運用。樣品檢測整個過程需要5～10 min。膠體金技術(shù)是國外醫(yī)學研究人員在酶標免疫法的基礎(chǔ)上，用膠體金替代酶作標志物，抗原抗體結(jié)合的免疫學檢測方法，并利用此項技術(shù)成功研制了檢測人類艾滋病（AIDS）病毒抗體的試劑盒[1]，為人類有效檢測艾滋病（AIDS）病毒做出巨大貢獻。隨著醫(yī)學技術(shù)的深入發(fā)展，免疫膠體金技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域更加廣泛，如妊娠試驗、各種傳染病檢測。目前這項技術(shù)在獸醫(yī)臨床診斷上應(yīng)用也比較廣泛。

1 免疫膠體金診斷技術(shù)的基本原理

免疫膠體金技術(shù)（GICT）以膠體金為示蹤標志物應(yīng)用于抗原抗體的一項標記技術(shù)，為免疫學領(lǐng)域的新技術(shù)[2]。隨著納米技術(shù)的不斷發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)了膠體金，并廣泛應(yīng)用于醫(yī)學、分子學、生物學和免疫學等各個學科。膠體金指在維生素C、鞣酸等還原劑的作用下，將氯金酸（HAuCl4）聚合成特定大小的顆粒，這些顆粒在靜電作用下形成穩(wěn)定的膠體狀物質(zhì)。膠體金技術(shù)基本原理：把微孔濾膜作為載體，包被已知的抗原或抗體，滴入的待測樣品經(jīng)微孔膜的滲濾作用或毛細管虹吸作用，樣品中的抗原或抗體與微孔濾膜包被的抗體或抗原結(jié)合，再通過膠體金標記物反應(yīng)形成紅色的線或點[3]，呈陽性，無此現(xiàn)象為陰性。

2 免疫膠體金診斷技術(shù)的優(yōu)點

1）免疫膠體金診斷技術(shù)操作簡單，檢測只需要試劑盒或試紙條，無需其他設(shè)備和試劑，樣品前處理簡單或無需做前處理，樣品多樣化，血清、組織液、糞便和尿液等均可。

2）免疫膠體金診斷技術(shù)方便快捷，反應(yīng)一般只需5～10 min 出結(jié)果，而其他方法，如ELISSA 需要1～2 h，PCR 需要時間最長。因方便快速且不受場地約束，該技術(shù)適合基層和現(xiàn)場。快速特異但不影響靈敏度，試驗證明靈敏度可達到1 ng/mL 或更低水平[4]。

3）免疫膠體金診斷技術(shù)使用成本低，檢測不需要特殊設(shè)備和試劑。結(jié)果判定直觀，陰性、陽性結(jié)果顯色明顯，通過肉眼很容易判斷。

4）免疫膠體金診斷技術(shù)具有特異性；應(yīng)用范圍廣闊，在不同的檢測條件下仍可運用；可以同時檢測多個項目內(nèi)容，提高樣品的利用率，尤其樣品難以獲得的情況下，優(yōu)勢更加顯著。

5）膠體金標記物理化性質(zhì)穩(wěn)定，試劑盒或試紙條保存時間長，在4 ℃的冷藏條件下可以存放2年以上，無信號衰減現(xiàn)象。

6）由于膠體金為紅色，不需要添加著色試劑，省去酶標致癌底物，降低對試驗人員的危害及工作環(huán)境污染，安全環(huán)保，符合構(gòu)建環(huán)保型社會的要求。

3 免疫膠體金技術(shù)在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用

由于免疫膠體金技術(shù)具有以上諸多優(yōu)點，因此被廣泛應(yīng)用在獸醫(yī)臨床疾病診斷中，主要包括2 個方面的內(nèi)容：一是用于抗體的檢測，二是用于病原的檢測。

3.1 應(yīng)用免疫膠體金技術(shù)檢測抗體

在抗體檢測過程中，免疫膠體金診斷的基本原理為相應(yīng)的抗原包被在硝酸纖維素膜（NC 膜）上，用膠體金標記相應(yīng)抗原，如果檢測樣品為陽性，那么樣品中的抗體與NC 膜上的抗原或金標抗原結(jié)合發(fā)生反應(yīng)，出現(xiàn)紅色線條或點，如樣品為陰性，則沒有上述現(xiàn)象出現(xiàn)。

大量研究證明，在動物諸多疾病的抗體檢測中，應(yīng)用免疫膠體金技術(shù)符合率、靈敏度和特異性都比較好。劉志科等[5]選擇了195 份雞血清，采用膠體金試紙條進行雞白痢沙門氏菌的檢測，結(jié)果為28份陽性樣品，再用平板凝集試驗做相應(yīng)的檢測，檢測到陽性樣品27 份，兩者的陽性符合率為96.43%；同時把利用試紙條檢出的44 份雞白痢陰性樣品，用平板凝集試驗做了檢測，結(jié)果均為陰性，符合率達到100%。郭健等[6]報道，采用該方法篩查動物布魯菌病和結(jié)核病，對采集的387 份鹿血清和206 份牛血清進行檢測，與平板凝集試驗方法相比，鹿血清陽性符合率94%，陰性符合率為97%，總符合率為96%；牛血清陽性符合率100%，陰性符合率為96%，總符合率為96%，得出兩種方法符合較好的結(jié)論。李耀磊等[7]采用膠體金技術(shù)對肉豆蔻等19種藥材進行黃曲霉毒素B1測定，與液相色譜法比較整體符合率為83.7%，結(jié)論一致。可見，膠體金診斷技術(shù)在動物疾病診斷中，具有較高的符合率、靈敏度和特異性，該技術(shù)在獸醫(yī)臨床診斷上具有重要的應(yīng)用價值。

3.2 應(yīng)用免疫膠體金技術(shù)檢測病原

在病原檢測過程中，免疫膠體金診斷技術(shù)基本原理為硝酸纖維素膜（NC 膜）和膠體金分別包被抗特定病原的2 種抗體，若被檢樣品為陽性，樣品中的抗原與NC 膜上的抗體和金標抗體結(jié)合發(fā)生反應(yīng)，在NC 膜上形成可見紅色的線或點，如果樣品為陰性，沒有上述現(xiàn)象。

大量研究證明，采用膠體金標診斷技術(shù)進行動物病原檢測，檢出率較高。寧官保等[8]建立雞毒支原體病毒的膠體金免疫層析法，對山西太谷某雞場35 只病雞95 份咽分泌物的培養(yǎng)物進行了檢測，測出陽性32 份，平板凝集試驗測出陽性33 份。用膠體金技術(shù)和平板凝集試驗2 種方法對已經(jīng)確診的60 份陰性樣口進行檢測，結(jié)果全部為陰性，未檢出陽性。陽性符合率為91.43%，總符合率為96.84%。王中立等[9]研究建立犬細小病毒膠體金免疫層析法，采集犬糞便為待測樣品，數(shù)量120 份，檢測結(jié)果與血凝試驗結(jié)果比較，如果效價在1∶40 以上，試紙條檢測均為陽性，并與犬傳染性肝炎病毒（ICHV）和犬瘟熱病毒（CDV）沒有交叉反應(yīng)。試紙條存放6 個月，檢測結(jié)果的重復(fù)率為100%。王愛華等[10]利用雞減蛋綜合癥病毒膠體金免疫法檢出濃度約為1.35 g/mL 純化的雞減蛋綜合征病毒。程安春等[11]利用膠體金探針法檢測雞減蛋綜合征病毒抗原，檢出最小量為0.117 2 g/mL；采用膠體金探針法對人工感染的50 只雞進行測定，其中從咽喉部、卵巢和輸卵管峽部采集到的樣品，陽性率均為100%，糞便樣品的陽性率為92%。試驗結(jié)果顯示，檢出率較高且具備良好的特異性，在獸醫(yī)臨床上具有較高的應(yīng)用價值。

4 結(jié) 語

綜上所述，免疫膠體金診斷技術(shù)具有操作簡單、方便快捷、檢測成本低、樣品利用率高、結(jié)果易于研判、檢出率高、穩(wěn)定性和特異性強等優(yōu)點，特別適合于基層、現(xiàn)場、大批量檢測和大面積普查等，在獸醫(yī)臨床診斷中具有廣闊的應(yīng)用前景。