養(yǎng)肝茶抗氧化能力測定

馮娟

摘 ?要：為研究養(yǎng)肝茶抗氧化作用，采用NaN02-A1（N03）3-NaOH比色法測定了4種市售養(yǎng)肝茶的總黃酮含量，并以（DPPH）、鐵離子還原能力2種體外抗氧化活性方法測定了市售4種養(yǎng)肝茶的抗氧化活性。結(jié)果表明，1#某黃罐養(yǎng)肝茶總黃酮含量最高，達(dá)到44.4 mL到100mL，其對DPPH自由基清除能力和鐵離子還原能力也最強(qiáng)，通過總黃酮含量與抗氧化活性比較發(fā)現(xiàn)，其抗氧化活性與總黃酮含量成良好的線性正相關(guān)。養(yǎng)肝茶抗氧化活性強(qiáng)表明其具有較好的預(yù)防上火的作用，總黃酮含量可作為養(yǎng)肝茶預(yù)防上火作用的評價指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：養(yǎng)肝茶;總黃酮;抗氧化能力;還原能力

1引言

目前市場養(yǎng)肝茶品種很多，但對其抗氧化活性研究較少，特別是對目前市場占有率較大的罐裝養(yǎng)肝茶抗氧化活性研究未見有報道。本文通過DPPH法、鐵離子還原能力法對市場4個品牌罐裝養(yǎng)肝茶抗氧化活性進(jìn)行研究，從而對養(yǎng)肝茶預(yù)防上火作用預(yù)測提供依據(jù)，同時為養(yǎng)肝茶產(chǎn)品的開發(fā)提供依據(jù)。

2實驗研究

2.1材料與方法

2.1.1材料與試劑

某黃罐養(yǎng)肝茶、某金罐養(yǎng)肝茶、某紅罐養(yǎng)肝茶、某大罐養(yǎng)肝茶：市售。

三氯乙酸、三氯化鐵、鐵氰化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、無水乙醇、甲醇：天津市寧平化學(xué)制品有限公司

DPPH：美國Sigma公司;

蘆丁、Vc：中國食品藥品檢定研究院。

2.1.2儀器與設(shè)備

Lambda 35紫外可見分光光度計：PerkinElmer公司。

2.1.3方法

總黃酮含量測定黃酮類化合物檢測方法：

參照《中國藥典》2015版中總黃酮測定及張雪等方法，通過方法學(xué)驗證，確定如下NaN02-A1（N03）3-NaOH比色法測定養(yǎng)肝茶中總黃酮含量方法。

2.2清除DPPH自由基能力的測定

參照KUMARAN等方法，經(jīng)過預(yù)實驗，分別取0.5，1，2，3，4，5 mL養(yǎng)肝茶樣品于25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻備用。取上述配好樣品0.5 mL及1 x 10 mol/L DPPH溶液3.5 mL加人同一具塞試管中搖勻，在室溫下密閉靜置30min，用純?nèi)軇┳鲄⒈龋梅止夤舛扔嫓y定其在517 nm波長處的吸光度。

2.3還原能力測定

參照呂樹祥等方法，經(jīng)過預(yù)實驗，分別取1，2，3，4，5，6 mL養(yǎng)肝茶樣品于25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻備用。在2.5 mL pH6.6的磷酸鹽緩沖液中加人上述稀釋后的不同濃度養(yǎng)肝茶溶液2.5 mL，1 g/100 mL的鐵氰化鉀溶液2.5 mL，混合物在50℃恒溫20 min后，再加人2.5 mL 10 g/100 mL的三氯乙酸溶液，然后以3000 r/min離心分離10 min，取上層清液5 mL加蒸餾水5 mL和0.1 g/100 mL FeCl3溶液1 mL，在波長700 nm處測定吸光度，吸光度越高，還原能力越強(qiáng)。

2.4統(tǒng)計學(xué)分析

采用SAS8.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，每組實驗中每種養(yǎng)肝茶樣品平行測定3次，采用單因素方差分析不同組之間數(shù)據(jù)差異性（P<0.05）。

3結(jié)果與分析

3.1養(yǎng)肝茶總黃酮含量測定

以吸光度為橫坐標(biāo)、蘆丁質(zhì)量濃度（mg/mL）為縱坐標(biāo)，得回歸方程：y=1.9961x-0.0026（R20.9999）。樣品中總黃酮的含量在標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)的值，某黃罐養(yǎng)肝茶、某金罐養(yǎng)肝茶、某紅罐養(yǎng)肝茶、某大罐養(yǎng)肝茶的總黃酮含量分別為44.4mg/mL、32.2mg/mL、28.8mg/mL、20.0mg/mL。4種市售養(yǎng)肝茶總黃酮含量大小依次為：某黃罐養(yǎng)肝茶>某金罐養(yǎng)肝茶>某紅罐涼茶>某大罐養(yǎng)肝茶。通過方差分析，1#黃罐養(yǎng)肝茶總黃酮含量遠(yuǎn)高于其他品牌養(yǎng)肝茶中總黃酮含量，且差異顯著著（（P<0.01）。1#某黃罐養(yǎng)肝茶較其他3個品牌養(yǎng)肝茶中本草植物種類多為羅漢果、桑葉、淡竹葉。總黃酮含量差異表明了1#黃罐養(yǎng)肝茶用料量大或者黃酮含量多的植物投料量多。

3.2養(yǎng)肝茶清除DPPH自由基能力

分別配制不同濃度養(yǎng)肝茶樣品，并測定其對清除DPPH自由基清除率，其結(jié)果如表2所示。根據(jù)每種養(yǎng)肝茶不同濃度對DPPH自由基清除率，繪制每種養(yǎng)肝茶清除DPPH自由基能力曲線圖。

由圖2可知，同一養(yǎng)肝茶樣品隨著反應(yīng)體系中養(yǎng)肝茶量增大，其清除DPPH自由基能力逐漸增大，并且4種養(yǎng)肝茶在（0.01-0.1）mL范圍內(nèi)，其線性關(guān)系良好。由不同量養(yǎng)肝茶清除DPPH自由基能力可知，1#某黃罐養(yǎng)肝茶清除DPPH自由基能力最強(qiáng)，其次為某金罐養(yǎng)肝茶、紅罐養(yǎng)肝茶，而某大罐養(yǎng)肝茶清除DPPH自由基能力最差。4種養(yǎng)肝茶清除DPPH自由基IC50分別為0.068，0.097，0.098，0.123 mL，其中1#某黃罐養(yǎng)肝茶與其他養(yǎng)肝茶IC50差異極，R著（P<0.01）。配制不同濃度Vc作為對照物，以Vc質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)、清除率為縱坐標(biāo)，得回歸方程：y1784x-4.771（R20.9998）。

3.3養(yǎng)肝茶還原能力測定

通過還原力測定可以檢測樣品是否為良好的電子供體。具有還原能力的物質(zhì)能夠還原脂質(zhì)過氧化過程中產(chǎn)生的中間體，從而表現(xiàn)其抗氧化作用。

由圖3可知，同一養(yǎng)肝茶樣品，隨著反應(yīng)體系中樣品量增大，其吸光度值越大，即還原能力越強(qiáng)，且在（0.1-0.6）mL線性范圍內(nèi)，吸光度值與反應(yīng)體系中樣品量線性關(guān)系良好;且不同涼茶，按照同一樣品量下，其吸光度值大小從大到小依次為同仁堂養(yǎng)肝茶>某金罐養(yǎng)肝茶>某紅罐養(yǎng)肝茶>某大罐養(yǎng)肝茶。對照樣品Vc濃度與吸光度關(guān)系線性方程為：y=25.1024x+0.0792（R20.9996），根據(jù)線性方程計算不同養(yǎng)肝茶在反應(yīng)體系中0.5 mL樣品相對于Vc的量。

3.4養(yǎng)肝茶總黃酮含量與其抗氧化能力分析

為比較養(yǎng)肝茶總黃酮含量與其抗氧化關(guān)系，以不同養(yǎng)肝茶總黃酮含量為橫坐標(biāo)，分別以不同養(yǎng)肝茶清除DPPH自由基IC50倒數(shù)及不同品牌養(yǎng)肝茶0.5 mL還原能力相當(dāng)于Vc的量為縱坐標(biāo)，分析其總黃酮含量與其抗氧化能力關(guān)系。其中IC50倒數(shù)值越大，其抗氧化活性越強(qiáng);且養(yǎng)肝茶還原能力相當(dāng)于Vc量值越大，其還原能力越強(qiáng)，抗氧化活性越強(qiáng)。其總黃酮含量與抗氧化能力關(guān)系見圖4。

由圖4可知，養(yǎng)肝茶清除DPPH自由基能力及還原能力與總黃酮含量呈線性關(guān)系，且線性關(guān)系良好。因此養(yǎng)肝茶抗氧化活性與總黃酮含量呈良好的線性關(guān)系。總黃酮含量可作為判斷養(yǎng)肝茶抗氧化活性的指標(biāo)，同時可以作為養(yǎng)肝茶預(yù)防上火作用的指標(biāo)。

4結(jié)論與討論

通過研究表明，4個品牌罐裝養(yǎng)肝茶總黃酮含量差異較大，其抗氧化活性差異也較大，因此其預(yù)防上火作用也存在差異。1#某黃罐養(yǎng)肝茶總黃酮含量及抗氧化能力遠(yuǎn)高于其他品牌養(yǎng)肝茶，分析其原因是其養(yǎng)肝茶中本草原料與其他3個品牌不同，同時也可能其添加本草原料高。而其他3個品牌養(yǎng)肝茶本草原料配方相同，但4#某大罐養(yǎng)肝茶遠(yuǎn)低于2#，3#養(yǎng)肝茶，其原因可能是原料投料量不同或提取方法不同導(dǎo)致。目前養(yǎng)肝茶品種較多，但市場混亂，因此即將實現(xiàn)的《植物飲料養(yǎng)肝茶》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)將總黃酮含量作為其主要控制指標(biāo)，此項標(biāo)準(zhǔn)實施將規(guī)范養(yǎng)肝茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展，提升養(yǎng)肝茶產(chǎn)品品質(zhì)。

參考文獻(xiàn)

[1] ?田平平，李仁宙，簡永健，李健明，王杰.連翹茶的強(qiáng)抗氧化活性成分及其抗氧化穩(wěn)定性[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，03：543-553.

[2] ?鄭淋.抗氧化肽的構(gòu)效關(guān)系及定向制備的研究[D].華南理工大學(xué)，2015.