孫向偉 于岸洲 李曉雪
(1.東北農業大學農學院,黑龍江哈爾濱 150030;2.東北農業大學生命科學學院,黑龍江哈爾濱 150030;3.西南大學園藝園林學院,重慶 400715)
大豆屬于糧油作物,人們食用后能夠獲取大量的蛋白質,有利于身體健康發展。經過長期的發展,我國已經擁有上千個大豆品種,但在不斷的發掘研究過程中,采用傳統的育種方式已無法快速地培育出更佳的品種。而分子育種方式在實踐期間實現有效應用,為大豆種植發展做出貢獻。
作物分子育種概念在2003年出現,逐漸得到認可,并隨著相關技術水平的不斷提高也逐漸成熟。
1.1 標記輔助育種生物在生長發育過程中,所處的環境會不斷發生變化,而其為適應客觀環境會進行相應的進化,由此會引發DNA序列的變化,而此種變異具有一定的遺傳性,同時也是分子標記輔助育種的原理。生物體內蘊含多個分子,因此,標記組合方式有多種情況。最佳的分子標記選擇,其遺傳應呈現多態化的情況,同時應呈顯性,分子標記能夠重現并具有較強的穩定程度。此外,所選的分子標記應包含大量的信息,有助于提升分子分析效果,同時能夠使用較為簡便的分析模式獲得信息,有助于提高該環節的現代化程度,控制研究項目的資金投入量。標記輔助方式育種經過多年的研究探索,已經實現大幅度提升,并研究出多種相關技術[1]。
1.1.1 PCR分子標記 此種方式中主要有兩項內容。①RAPD。采用此技術能夠根據多個分子組進行分析,相較于其他分析方式而言,RAPD技術對于分子總數以及質量無過高要求。此外,使用該項技術耗費的時間較短,且操作較為簡單,有助于合理縮減前期準備的部分環節。需要注意的是,該項技術也存在不足之處,其敏感程度較高,無法進行多次操作。②SCAR標記。此項編輯技術是在RAPD的基礎上發展起來的,對RAPD片段實施克隆,并對其進行末端測序,根據所選片段的兩端序列設置專門的引物,之后對DNA片段實施PCR操作,將其與原本的分子片段進行單一位點的鑒別操作。該項技術具有較強的共顯性,分析分子成果可借助擴增產物效果得知。此項技術相較于上述的RAPD標記,更為快捷,且具有較高的可靠性和穩定性,能夠進行多次操作。
1.1.2 分子雜交 該項技術是最早的DNA標記技術,其基本類型為點的多態性和序列的多態性。RFLP技術具有較強的穩定性,但實驗操作步驟過多,整體的投資數額較大,綜合多方因素考量,僅能應用在較小規模的分子育種項目中。
1.1.3 限制性酶切與PCR技術融合 實驗操作較為簡單,且具有較強的共顯性,同時采用此項分子標記技術對DNA的數量以及濃度要求較低。在實際操作中,相關人員需要較長的引物,并且最終呈現的擴增效果較為穩固,不僅可以去除RFLP技術中的膜轉印環節,還能確保基本的精準性。另外,其操作技術含量較低,現代化程度較高。
1.1.4 SNP分子標記技術 該項技術展現出來的多態性包括單個堿基的變異,主要是由單個堿基通過轉換、顛換形成的。該項技術的自動化程度較高,實驗時長短,技術人員可借此構建規范化的操作,能夠應用于大規模的實驗項目中。
1.2 轉基因目前,大豆的轉基因技術應用較多的是農桿菌介導技術以及基因槍技術。我國在該方面的研究仍停留在植株選擇、檢測以及鑒定階段。部分學者借助農桿菌介導方式提高轉化的效果,不僅實現了提升轉化效率的目標,還能為后續的大豆育種提供基礎性的保障。目前,我國已針對大豆的抗蟲、抗病等方面開展相應的實驗項目,相較于其他國家,國內對該方面的研究仍處于初期階段,且產業化的程度較弱。在轉基因技術不斷發展的趨勢下,大豆分子標記育種在未來會不斷改進。分子育種技術是對原本的DNA信息進行深度探索,借助專業檢定、親本選擇組合以及后代選擇開展高技術含量的實驗項目,在大豆方面的相關研究屬于新興的模塊,相關學者正在不斷探索[2]。
就分子育種長期的發展情況而言,是未來發展的主攻方向,在實驗項目中,確定更多的DNA功能,對使用該項技術進行育種的效果會更加明顯。大豆光周期基因實驗項目,既可以直接應用在相關的育種項目中,又能為提高大豆的質量和產量起到一定的支持作用。目前,由于大豆的種植面積較小,導致總體的產量逐漸下降,無法滿足市場需求。出現此種情況主要受兩個方面因素的影響:第一,由于其他作物的經濟效益較高,導致大豆的實際種植面積逐漸縮小;第二,相關市場中的部分大豆是以較低價格從其他國家購進。
近年來,我國在大豆育種方面仍采用傳統的作業模式,但經過相關學者的共同努力,其分子育種方式已經實現較好的發展,為未來的育種設計環節奠定了基礎。相信該項技術在大豆育種方面的價值會受到更多人的認可,并在實際作業中突顯其應用價值。