依達拉奉對心肌梗死大鼠心肌細胞凋亡的抑制作用及機制研究

李開智，楊森林，姜暉，郭亞強，江曉娜，李佳芮

（1.唐山市第二醫院 藥劑科，河北 唐山 063000；2.中國人民解放軍聯勤保障部隊第982醫院 心內科，河北 唐山 063000；3.唐山市工人醫院 藥學部，河北 唐山 063000；4.武安市第一人民醫院 藥劑科，河北 邯鄲 056300；5.唐山市曹妃甸區醫院藥劑科，河北 唐山 063299；6.中國人民解放軍聯勤保障部隊第982 醫院藥械科，河北 唐山 063000）

心肌梗死（myocardial infarction, MI）等缺血性心臟病導致的心力衰竭是一類嚴重危害人類健康的心臟疾病。根據我國心血管病報告，MI 病死率近年來呈快速上升的趨勢，是目前威脅人類生命的主要疾病之一，給家庭和社會帶來嚴重的經濟負擔，并且已成為重大的公共衛生問題[1]。冠狀動脈封閉導致的左心室供血不足，引起嚴重的持續性心肌細胞缺氧、缺血，最終導致MI 的發生。目前研究證實，心肌細胞凋亡是早期缺血性心肌細胞損傷的主要方式，大量心肌細胞凋亡壞死、心肌實質和間質膠原重構引起心肌肥厚、擴張，使心臟功能嚴重受損，極大程度影響患者的臨床預后[2]。MI 發生后心肌線粒體功能受損、多形核白細胞活化并聚集、次黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶生成增多、Ca2+超載等多種因素導致活性氧生成過多，心肌處于氧化應激狀態，是造成心肌細胞壞死與凋亡的重要環節。如何減輕氧化應激反應，從而減輕心肌細胞壞死與凋亡對于緩解心室病理性重塑、提升心功能、抑制心力衰竭的發生、發展意義重大。磷脂酰肌醇3-激酶/（絲氨酸/蘇氨酸）蛋白激酶（PI3K/Akt）信號通路是細胞內最重要的生存通路，可調節細胞凋亡過程，能夠明顯抑制細胞凋亡[3]，PI3K/Akt 信號途徑對缺血缺氧誘發的心肌細胞凋亡可產生心肌保護作用[4]。依達拉奉屬于新型自由基清除劑，可有效清除活性氧及有細胞毒性的羥自由基，在臨床上常用于改善急性腦梗死所致的神經癥狀、日常活動能力和功能障礙。依達拉奉是否通過抗氧化應激對MI 產生保護作用，這種保護作用是否與PI3K/Akt 信號通路有關鮮有報道。本研究探討依達拉奉對MI 大鼠心肌細胞壞死與凋亡的抑制作用及作用機制，以期為MI 新的治療方法提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 動物

選用清潔級SD 大鼠50 只，雌雄各半，8 周齡，體重（250±20）g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，動物許可證編號：SCXK（京）2012-0001。各組大鼠分籠飼養，給予標準大鼠顆粒飼料，自由飲用純凈水。飼養環境溫度（25±2）℃，相對濕度（50±10）%，通風換氣8～12次/h，12 h晝夜循環照明。實驗開始前所有大鼠均適應性飼養1 周，手術前12 h禁食、不禁水。實驗過程中動物的處置符合醫學倫理學標準。

1.2 主要藥物、試劑及儀器

依達拉奉（國藥集團國瑞藥業有限公司，國藥準字 H20080056），TUNEL 試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD），丙二醛（Malondialdehyde, MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px），肌酸激酶同工酶（MB isoenzyme of creatine kinase, CK-MB），乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase, LDH），肌鈣蛋白T（cardiac troponin, cTnT）、辣根過氧化物酶標記的二抗、RIPA 裂解液及BCA 蛋白濃度定量試劑盒（上海碧云天生物技術公司），Masson 試劑盒（北京華越洋生物科技公司），Trizol 試劑、逆轉錄試劑盒、Super Real Pre Mix Plus（SYBR Green）試劑[天根生化科技（北京）有限公司]，PI3K、Akt 及p-Akt、B 淋巴細胞瘤-2 基因（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）、Bcl-2 相關X 蛋白（Bax）和β-Actin 一抗（美國Cell Signaling Technology 公司）。PI3K、Akt、Bcl-2、Bax 和β-actin 引物序列由上海捷瑞生物工程有限公司合成，引物序列見表1。

表1 PRC 引物序列

超高分辨小動物彩色多普勒超聲成像系統（美國Visual Sonics 公司），EXL808 全自動酶標儀（美國Bio-Tek 公 司），ABI step one 熒光定量PCR 儀，（美國ABI 公司），Gene Genius 全自動凝膠成像系統（美國Syngene 公司）；Western blotting 電泳儀（美國Bio- Rad公司），Fluor Chem Q蛋白印跡成像和定量分析系統（美國Alpha 公司）。

1.3 動物分組及給藥

50 只SD 大鼠隨機選擇10 只作為假手術對照組，其余40 只進行MI 模型復制，模型復制后隨機分為4 組，分別為模型對照組、依達拉奉小劑量組、中劑量組和大劑量組，每組10 只。術后2 h 時依達拉奉小劑量組、中劑量組和大劑量組大鼠分別腹腔注射依達拉奉1、3和6 mg/kg，假手術組和模型對照組大鼠均腹腔注射等體積生理鹽水。首次給藥1 次/d，連續14 d。

1.4 MI 模型的復制

所有大鼠模型復制前1 天晚上開始禁食，采用冠狀動脈左前降支結扎法復制大鼠MI 模型[3]。腹腔注射5%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）進行麻醉，背位固定，氣管插管后連接小動物呼吸機進行輔助呼吸（潮氣量為1 ml，呼吸比為2 ∶1，60 次/min）。左胸前區常規去毛備皮、消毒，在第3 肋間開胸，于肺動脈圓錐與左心耳交界下緣約1 ～2 mm 處結扎左冠狀動脈，止血、清理胸腔，迅速逐層縫合胸壁，關胸。假手術對照組大鼠手術過程同上，但不結扎左冠狀動脈。術后將大鼠置于單籠飼養，維持輔助呼吸至自主呼吸恢復，腹腔注射青霉素10 萬u，連續3 d，預防傷口感染。心肌梗死診斷標準為心電圖示2 個以上肢體導聯或胸導聯ST 段弓背向上抬高[4]。術后連續3 d腹腔注射20 萬u 青霉素預防感染。

1.5 超聲左心室結構和功能檢測

末次給藥后1 h 時各組大鼠腹腔注射5%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）進行麻醉，背位固定，胸前區備皮。大鼠生理狀態穩定后采用高分辨小動物超聲儀探頭對大鼠心臟功能進行檢測，指標包括左心室舒張末期內徑（LVEDD）、左心室收縮末期內徑（LVESD）和左室短軸率（LVFS），計數左心室射血分數（LVEF）。每項超聲測定指標取連續3 個心動周期測量值的平均值。

1.6 血清心肌酶和抗氧化標志物檢測

心功能檢測后腹主動脈取血10 ml 于普通采血管中，室溫下靜置30 min，待血液完全凝固后低溫3 000 r/min 離心15 min，分離得血清，按照試劑盒說明書檢測血清心肌酶和抗氧化標志物。血清心肌酶包括cTnT、CK-MB、LDH，抗氧化標志物包括SOD、MDA、GSH-Px。其中SOD 采用黃嘌呤氧化酶法檢測，MDA 應用硫代巴比妥酸反應法檢測，cTnT、CK-MB、LDH 和GSH-Px 采用雙抗體夾心法檢測。

1.7 大鼠心肌細胞凋亡檢測

腹主動脈取血后打開胸腔迅速取出心臟，將血液擠干凈，用磷酸鹽緩沖液沖洗干凈，在左室梗死與非梗死交界區心肌組織取下，部分組織采用4%多聚甲醛固定，其余組織分為兩部分用液氮保存。所取組織固定24 h，梯度乙醇脫水，包埋，常規石蠟切片（厚4 μm），TUNEL 染色，清洗后封片。高倍顯微鏡下觀察心肌細胞凋亡情況，細胞呈棕褐色或棕黃色顆粒且具備凋亡細胞形態學特征判定為凋亡細胞，計算凋亡指數（apototic index, AI）=（熒光細胞數/細胞總數）×100%。

1.8 大鼠心肌PI3K、Akt、mTOR 和Bcl-2 mRNA和蛋白檢測

取左室梗死與非梗死交界區心肌組織適量，液氮下研磨，加入Trizol 裂解液提取RNA，酶標儀測定總RNA 濃度及純度。將總RNA 逆轉錄為cDNA，進行定量PCR 擴增。反應體系為50 μl：10×PCR Buffer 5 μl，10 μmol/L dNTP 1 μ1，模板1 μl，正反向引物各1 μl，0.5 μl 2 u/μ1 Taq DNA 聚合酶（含Mg2+），加入ddH2O 至50 μl。PCR 反應條件為：94℃預變性10 min，94℃變性15 s， 58℃退火45 s，72℃延伸60 s，共35 個循環，72℃再延伸5 min。將擴增產物行瓊脂糖凝膠電泳，Quantity One 軟件分析目標基因PI3K、Akt、Bcl-2和Bax與內參基因β-actin吸光度，以目標蛋白吸光度與β-actin 吸光度的比值作用目標蛋白的相對表達量。

取左室梗死與非梗死交界區心肌組織適量，切成米粒大小，加入RIPA 裂解液和蛋白酶抑制劑，用快速組織細胞破碎儀粉碎組織，低溫12 000 r/min 離心10 min，分離得總蛋白，用BCA 法進行蛋白定量。用10%SDS-PAGE 凝膠分離蛋白，轉膜。用5%脫脂奶粉（磷酸化抗體用4% BSA）封閉2 h，分別加入PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、Bcl-2 和β-actin 一抗，4℃下孵育過夜。PBST 溶液洗膜3 次，加入IgG-HRP，室溫避光孵育1 h，PBST 溶液洗膜3 次。加ECL 發光液曝光、顯影、定影。用掃描儀掃描曝光膠片，用Image J軟件分析條帶灰度值。以β-actin 為內參照，計算目標蛋白PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR 和Bcl-2 的相對表達量。

1.9 統計學方法

數據分析采用SPSS 21.0 統計軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 依達拉奉對MI 大鼠心臟結構和功能的影響

如表2 所示，各組大鼠術后14 d 的LVEDD、LVESD、LVFS 和LVEF 比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；模型對照組大鼠LVEDD 和LVESD 較假手術對照組大鼠升高（P＜0.05），LVFS 和LVEF 較假手術對照組大鼠降低（P＜0.05）；依達拉奉小劑量組LVEDD、LVESD、LVFS 和LVEF 與模型對照組大鼠比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；依達拉奉中劑量組大鼠LVEDD 和LVESD 較 小 劑 量 組 大 鼠 降 低（P＜0.05），LVFS 和LVEF 較小劑量組大鼠升高（P＜0.05）；依達拉奉大劑量組大鼠LVEDD 和LVESD 較中劑量組大鼠降低（P＜0.05），LVFS 和LVEF 較中劑量組大鼠升高（P＜0.05）。

表2 術后14 d 各組大鼠左心室結構和功能的比較 （n =10，±s）

表2 術后14 d 各組大鼠左心室結構和功能的比較 （n =10，±s）

注：①與假手術對照組比較，P ＜0.05；②與模型對照組比較，P ＜0.05；③與依達拉奉小劑量組比較，P ＜0.05；④與依達拉奉中劑量組比較，P ＜0.05。

組別 LVEDD/mm LVESD/mm LVFS/% LVEF/%假手術對照組 5.5±0.9 2.5±0.3 53.5±5.9 86.4±6.6模型對照組 8.5±0.7① 6.2±0.5① 21.9±3.5① 35.7±4.7①依達拉奉小劑量組 8.0±0.7 5.7±0.5 24.3±4.3 39.2±5.2依達拉奉中劑量組 7.1±0.6②③ 5.2±0.4②③ 29.9±4.5②③ 47.4±5.7②③依達拉奉大劑量組 6.3±0.6②③④ 4.3±0.5②③④ 35.0±5.3②③④ 63.5±6.4②③④F 值 29.721 97.110 69.445 130.653 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.2 依達拉奉對MI 大鼠血清CK-MB、LDH 和cTnT 水平的影響

各組大鼠術后14 d 血清CK-MB、LDH 和cTnT水平比較，經方差分析，差異有統計學意義（P＜0.05）；模型對照組大鼠血清CK-MB、LDH 和cTnT 水平較假手術對照組大鼠升高（P＜0.05）；依達拉奉小劑量組大鼠血清CK-MB、LDH 和cTnT 水平較模型對照組大鼠降低（P＜0.05）；依達拉奉中劑量組大鼠血清CK-MB、LDH 和cTnT 水平較小劑量組大鼠降低（P＜0.05）；依達拉奉大劑量組大鼠血清CK-MB、LDH 和cTnT 水平較中劑量組大鼠降低（P＜0.05）。見表3。

表3 術后14 d 各組大鼠血清心肌酶水平的比較 （n =10，±s）

表3 術后14 d 各組大鼠血清心肌酶水平的比較 （n =10，±s）

注：①與假手術對照組比較，P ＜0.05；②與模型對照組比較，P ＜0.05；③與依達拉奉小劑量組比較，P ＜0.05；④與依達拉奉中劑量組比較，P ＜0.05。

組別 CK-MB/（u/L） LDH/（IU/L） cTnT/（pg/L）假手術對照組 715.6±45.4 932.7±112.5 675.5±117.1模型對照組 1 284.4±97.5① 2 421.4±215.7① 2 182.3±186.5①依達拉奉小劑量組 1 164.3±101.3② 2 115.4±226.4② 1 984.7±193.2②依達拉奉中劑量組 1 057.7±93.6②③ 1 845.3±184.7②③ 1 735.1±184.5②③依達拉奉大劑量組 914.3±89.6②③④ 1 594.4±159.5②③④ 1 473.6±165.4②③④F 值 63.351 94.158 116.788 P 值 0.000 0.000 0.000

2.3 依達拉奉對MI 大鼠血清抗氧化標志物的影響

各組大鼠術后14 d 血清SOD、MDA 和GSH-Px水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；模型對照組大鼠血清SOD 和GSH-Px 水平較假手術對照組大鼠降低（P＜0.05），MDA 水平較假手術對照組大鼠升高（P＜0.05）；依達拉奉小劑量組大鼠血清SOD 和GSH-Px水平較模型對照組大鼠升高（P＜0.05），MDA 水平較模型對照組大鼠降低（P＜0.05）；依達拉奉中劑量組大鼠血清SOD 和GSH-Px 水平較小劑量組大鼠升高（P＜0.05），MDA 水平較小劑量組大鼠降低（P＜0.05）；依達拉奉大劑量組大鼠血清SOD 和GSH-Px 水平較中劑量組大鼠升高（P＜0.05），MDA 水平較中劑量組大鼠降低（P＜0.05）。見表4。

2.4 依達拉奉對MI 大鼠心肌細胞凋亡的影響

各組大鼠術后14 d 心肌AI 比較，差異有統計學意義（F=83.794，P=0.000）；模型對照組大鼠心肌AI（39.47±4.29）%較假手術對照組大鼠（8.16±0.75）%升高（P＜0.05）；依達拉奉小劑量組大鼠心肌AI（34.29±4.84）%較模型對照組大鼠降低（P＜0.05）；依達拉奉中劑量組大鼠心肌AI（28.62±5.17）%較小劑量組大鼠降低（P＜0.05）；依達拉奉大劑量組大鼠心肌AI（21.36±4.45）%較中劑量組大鼠降低（P＜0.05）。見圖1、2。

2.5 依達拉奉對MI 大鼠心肌PI3K、Akt、Bcl-2和Bax mRNA 表達的影響

各組大鼠術后14d 心肌PI3K、Akt、Bcl-2 和Bax mRNA 表達比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；模型對照組大鼠心肌PI3K、Akt 和Bcl-2 mRNA 表達較假手術組大鼠降低（P＜0.05），Bax mRNA 表達較假手術對照組大鼠升高（P＜0.05）；依達拉奉中劑量組大鼠心肌PI3K、Akt 和Bcl-2 mRNA 表達較小劑量組大鼠升高（P＜0.05），Bax mRNA 表達較小劑量組大鼠降低（P＜0.05）；依達拉奉大劑量組大鼠心肌PI3K、Akt 和Bcl-2 mRNA 表達較中劑量組大鼠升高（P＜0.05），Bax mRNA 表達較中劑量組大鼠降低（P＜0.05）。見表5。

表4 術后14 d 各組大鼠血清抗氧化標志物水平的比較（n =10，±s）

表4 術后14 d 各組大鼠血清抗氧化標志物水平的比較（n =10，±s）

注：①與假手術對照組比較，P ＜0.05；②與模型對照組比較，P ＜0.05；③與依達拉奉小劑量組比較，P ＜0.05；④與依達拉奉中劑量組比較，P ＜0.05。

組別 SOD/（u/ml）MDA/（nmol/ml）GSH-Px/（u/ml）假手術對照組 367.3±27.3 3.3±0.5 786.4±42.5模型對照組 147.9±23.8① 17.6±2.2① 421.4±35.3①依達拉奉小劑量組 189.3±24.4② 15.3±1.8② 469.4±37.9②依達拉奉中劑量組 215.4±26.5②③ 11.8±1.7②③ 516.7±41.9②③依達拉奉大劑量組 248.3±28.9②③④ 9.5±1.5②③④ 574.3±43.8②③④F 值 100.630 114.124 123.353 P 值 0.000 0.000 0.000

圖1 依達拉奉對MI 大鼠心肌細胞凋亡的影響（n =10，±s）

2.6 依達拉奉對MI 大鼠心肌PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2 和Bax 蛋白表達的影響

如表6 所示，各組大鼠術后14d 心肌PI3K、Akt、Bcl-2 和Bax 蛋白表達比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；模型對照組大鼠心肌PI3K、Akt、p-Akt 和Bcl-2 蛋白表達較假手術對照組大鼠降低（P＜0.05），Bax 蛋白表達較假手術對照組大鼠升高（P＜0.05）；依達拉奉中劑量組大鼠心肌PI3K、Akt、p-Akt 和Bcl-2蛋白表達較小劑量組大鼠升高（P＜0.05），Bax 蛋白表達較小劑量組大鼠降低（P＜0.05）；依達拉奉大劑量組大鼠心肌PI3K、Akt、p-Akt 和Bcl-2 蛋白表達較中劑量組大鼠升高（P＜0.05），Bax 蛋白表達較中劑量組大鼠降低（P＜0.05）。

圖2 各組大鼠心肌細胞凋亡情況 （×200）

表5 術后14 d 各組大鼠心肌PI3K、Akt、Bcl-2 和Bax mRNA 表達的比較 （n =10，±s）

表5 術后14 d 各組大鼠心肌PI3K、Akt、Bcl-2 和Bax mRNA 表達的比較 （n =10，±s）

注：①與假手術對照組比較，P ＜0.05；②與模型對照組比較，P ＜0.05；③與依達拉奉小劑量組比較，P ＜0.05；④與依達拉奉中劑量組比較，P ＜0.05。

組別 PI3K Akt Bcl-2 Bax假手術對照組 6.7±0.5 3.7±0.4 1.6±0.2 0.8±0.1模型對照組 3.5±0.4① 1.6±0.2① 0.8±0.2① 2.5±0.2①依達拉奉小劑量組 3.7±0.4 1.6±0.3 0.9±0.1 2.4±0.2依達拉奉中劑量組 4.3±0.5②③ 1.9±0.2②③ 1.2±0.1②③ 2.2±0.1②③依達拉奉大劑量組 5.1±0.6②③④ 2.7±0.3②③④ 1.4±0.2②③④ 1.8±0.2②③④F 值 71.525 86.702 32.941 170.714 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000

表6 術后14 d 各組大鼠心肌PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2 和Bax 蛋白表達的比較 （n=10，±s）

表6 術后14 d 各組大鼠心肌PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2 和Bax 蛋白表達的比較 （n=10，±s）

注：①與假手術對照組比較，P ＜0.05；②與模型對照組比較，P ＜0.05；③與依達拉奉小劑量組比較，P ＜0.05；④與依達拉奉中劑量組比較，P ＜0.05。

組別 PI3K Akt p-Akt Bcl-2 Bax假手術對照組 3.5±0.2 1.5±0.1 0.9±0.1 0.9±0.1 0.4±0.1模型對照組 1.8±0.2① 0.9±0.1① 0.6±0.1① 0.4±0.1① 1.1±0.1①依達拉奉小劑量組 1.8±0.2 0.9±0.1 0.6±0.1 0.4±0.1 1.1±0.1依達拉奉中劑量組 2.1±0.2②③ 1.0±0.1②③ 0.7±0.1②③ 0.5±0.1②③ 0.9±0.1②③依達拉奉大劑量組 2.6±0.2②③④ 1.3±0.2②③④ 0.8±0.1②③④ 0.6±0.1②③④ 0.8±0.1②③④F 值 128.25 45.000 10.625 43.000 83.000 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

3 討論

MI 是指心臟在缺血、缺氧后引起的心肌細胞的壞死，是導致心血管疾病患者死亡最主要的原因之一[5]。隨著人們生活方式的改變及人口老齡化，MI 發病率和致死率的逐年攀升[6]，已嚴重威脅全球人民的身體健康。MI 引起氧化應激損傷、心肌細胞凋亡、心肌組織嚴重受損及心室重構，最終發展為心力衰竭[7]。因此，減輕氧化應激反應，進而減輕心肌細胞壞死與凋亡是防治心肌梗死后心室重構的重要途徑。依達拉奉通過抑制脂質的過氧化，可避免血管內皮細胞的損傷[8-9]。本研究探討MI 大鼠心肌細胞凋亡的抑制作用并探討其作用機制，為其臨床應用奠定基礎。本研究結果顯示，依達拉奉可劑量依賴性降低MI 大鼠LVESD 和LVEDD、升高LVEF 和LVFS，降低血清cTnT、CK-MB 和LDH 水平，因此依達拉奉可對MI 具有保護作用，并且對心臟功能具有的改善作用。

細胞凋亡又稱程序性細胞死亡，是由細胞內外因素觸發細胞內預存的死亡程序而引起細胞死亡的一種方式，表現為細胞皺縮、細胞膜完整并發泡、染色質固縮、凋亡小體形成。MI 后由于缺血、缺氧，心肌細胞啟動細胞凋亡相關機制，形成凋亡復合體，通過多種蛋白酶的活化誘導細胞凋亡，在MI 向心力衰竭的轉化過程中發揮重要作用。本研究結果顯示，依達拉奉可劑量依賴性降低MI 大鼠心肌細胞的AI，說明依達拉奉可降低MI 大鼠心肌細胞的凋亡。

氧化應激是指機體受到各種有害刺激后機體內氧化活性物質產生過多和/或抗氧化能力減弱，氧自由基的清除不足，破壞機體氧化/還原的正常平衡，進而造成細胞、組織氧化損傷的病理過程。機體內SOD、GSH-Px 和MDA 水平可反映出機體的氧化應激狀態[10]。MI 后氧自由基生成增多，體內的重要抗氧化酶SOD、GSH-Px 活性下降，破壞心肌細胞結構、損傷心肌細胞膜，導致心肌細胞壞死[11。本研究結果顯示，依達拉奉可劑量依賴性升高SOD、GSH-Px 水平，而降低MDA 水平，從而改善MI 大鼠心肌的抗氧化能力。

PI3K/Akt 信號通路是細胞內最重要的生存通路，可以調節細胞凋亡過程，抑制細胞凋亡[12]。PI3K 可直接激活Akt 發生磷酸化，p-Akt 能夠進一步通過抑制促凋亡蛋白的形成[13]，從而對缺血缺氧誘發的心肌細胞凋亡可產生心肌保護作用[14]。此外PI3K/Akt 信號可通過調控下游的Bcl-2、Bax 等多種靶蛋白而調控細胞的生物學過程[15]。Bcl-2 和Bax 分別是Bcl-2 家族的抑凋亡蛋白和促凋亡蛋白，互相作用而調節機體內的細胞凋亡情況。Bax 發生活化后可誘導線粒體釋放細胞色素C 從而誘導細胞的凋亡，而Bcl-2 和Bax可結合形成二聚體而抑制細胞凋亡[16]。已有多項研究證實可通過上調Bcl-2 和下調Bax 以降低心肌細胞的凋亡[17]。本研究結果顯示，依達拉奉可劑量依賴性升高PI3K、Akt 和Bcl-2 mRNA 的表達，降低Bax mRNA 的表達；依達拉奉可劑量依賴性升高PI3K、Akt、p-Akt 和Bcl-2 蛋白的表達，降低Bax 蛋白的表達，說明依達拉奉可調控PI3K/Akt 信號通路，這也可能是其抑制MI 大鼠心肌細胞凋亡的原因。

綜上所述，依達拉奉對MI 大鼠具有保護作用，可改善MI 大鼠的心臟結構和心臟功能，降低心肌細胞的凋亡，改善心肌抗氧化能力，并且與調控PI3K/Akt 信號通路有關。