丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液細菌內毒素檢查法的干擾試驗

丁麗燕

摘 要 目的：開展干擾試驗研究，確定丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液細菌內毒素的檢查方法。方法：按中國藥典2015年版細菌內毒素檢查法第一法（凝膠法），對3批產品進行細菌內毒素干擾試驗。結果：丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液稀釋至105.6倍時，對細菌內毒素檢查法無干擾作用。經檢測，3批產品的細菌內毒素均符合要求。結論：凝膠法可用于丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液的細菌內毒素檢查，并可為細菌內毒素檢查的干擾試驗提供數據支持。

關鍵詞 丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液 細菌內毒素 干擾試驗

中圖分類號：R927.12； R971.2 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2020）01-0070-04

Interference study of bacterial endotoxin test in propofol injection

DING Liyan*（Shanghai Joy Biopharm CO.， LTD.， Shanghai Engineering Research Center of Lipid Emulsion， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT Objective： To study the interference of bacterial endotoxin test in propofol medium and long chain fat emulsion injection and establish a method for bacterial endotoxin test. Methods： The inference of bacterial endotoxin test in 3 batches of products were determined based on the Chinese Pharmacopoeia （2015 edition） . Results： Propofol medium and long chain fat emulsion injection did not interfere with the bacterial endotoxin test when it was diluted to 105.6 folds with bacterial endotoxin water. The bacterial endotoxin in the 3 batches of products met the requirements after determination. Conclusion： Gelation assay can be used for detecting the bacterial endotoxin in propofol medium and long chain fat emulsion injection and can provide data support for interference tests of bacterial endotoxin inspection.

KEy WORDS propofol medium and long chain fat emulsion injection； bacterial endotoxins； interference test

丙泊酚（2，6-二異丙基苯酚），作為一種靜脈麻醉藥，以其起效迅速、作用時間短、清醒快、易于控制和不良反應少等特點，被麻醉醫師廣泛用于全麻誘導，硬膜外麻醉輔助鎮靜，無痛人流，無痛胃鏡等領域。其術后惡心、嘔吐率低等優點，進一步奠定其門診手術首選全麻藥物的地位[1-2]。在腹腔鏡、宮腔鏡等短小手術的應用中，其麻醉深度的良好控制性和蘇醒迅速、平穩已被廣泛認同。丙泊酚具有降低顱內壓，腦代謝，抗氧化作用，廣泛應用于神經外科麻醉[3-4]。

含藥靜脈注射用脂肪乳劑中，大部分藥物分布在油相或油水界面，避免與水直接接觸。對于易水解或對水敏感的藥物，這種隔離起到了增加穩定性的作用。靜脈注射用脂肪乳劑不含或僅含少量有機溶劑，對血管刺激性較小；同時，外水相中藥物較少，可有效降低由藥物引起靜脈炎的可能，增強患者的順應性；另外，靜脈注射用脂肪乳劑具有一定的靶向性，可降低非靶區藥物的濃度。丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液游離藥物濃度和注射疼痛發生率較長鏈脂肪乳顯著降低，且在長期輸注過程中不易引起高脂癥的發生，還可減輕肝臟負擔，更適用于肺功能不全的患者和嬰幼兒麻醉，是目前市場上最安全有效的丙泊酚制劑[5-6]。

目前法定的熱原檢查方法有家兔熱原檢查法和細菌內毒素檢查法。家兔法存在操作繁瑣、重復性差、靈敏度低、費時等缺點，而細菌內毒素檢查法操作簡單，靈敏度高，干擾少，速度快[7]。美國藥典20版（USPXX）第一次收載細菌內毒素檢查法（bacterial endotoxin test， BET），隨后英、德、意、日以及中國相繼在藥典中收載BET法。《中國藥典》2005年版BET法檢查品種增至168個，《中國藥典》2010年版又新增修訂品種達112種，《中國藥典》2015年版BET法檢查品種增至631種。可見用細菌內毒素檢查法替代家兔熱原檢查法是一種趨勢。本文參照《中國藥典》2015年版四部“細菌內毒素檢查法”[8]和相關文獻，通過試驗研究，建立了一種可用于丙泊酚中長鏈脂肪乳中細菌內毒素檢查的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

HH·W21·600電熱恒溫水溫箱（上海躍進醫療器械廠）、XW-80A旋渦混合器（上海醫大儀器有限公司）、SW-CJ-1FD（蘇州凈化設備有限公司），試驗所用玻璃器皿均在250 ℃烘烤2 h，以去除可能存在的外源性細菌內毒素。

1.2 試藥

鱟試劑（TAL，湛江安度斯生物有限公司，靈敏度0.25 EU/ml、0.03 EU/ml）；細菌內毒素工作標準品（CSE，湛江安度斯生物有限公司，10 EU/支）；細菌內毒素檢查用水（BET水，湛江安度斯生物有限公司，5 ml/支）；丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液（上海喬源生物制藥有限公司，20 ml∶200 mg，批號：BZA171001A、BZA171002A、BZA171003A）。

1.3 方法

1.3.1 干擾初篩試驗

1）供試品限值 丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液細菌內毒素限值L= K/M=5/15=0.33 EU/mg。式中，K為人每千克體重每小時最大可接受的內毒素劑量，以EU/（kg·h）表示，注射劑K=5 EU/（kg·h）；M為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量，以mg/（kg·h）表示，根據丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液原研產品（B. Braun Melsungen Ag）的說明書，M=15 mg/（kg·h）。

2）最大有效稀釋倍數（MVD） MVD=CL/λ，C為供試品溶液的濃度，丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液濃度為10 mg/ml，L=0.33 EU/mg。當靈敏度λ為0.5、0.25、0.125、0.06、0.03 EU/ml時，所對應的MVD分別為6.6、13.2、26.4、52.8、105.6倍。

1.3.2 干擾預試驗

取批號為BZA171002A的供試品，用BET水分別稀釋至6.6、13.2、26.4、52.8、105.6倍的系列溶液，作為供試品陰性對照（A）。另制備同樣倍數的供試品系列溶液，分別加入含有2λ（λ：0.25 EU/ml）的細菌內毒素，作為供試品陽性對照（B）。設立陽性對照（C）管和陰性對照（D）管。每個濃度平行做兩管，加入鱟試劑反應管，（37±1）℃反應（60±2）min。

1.3.3 干擾試驗

根據干擾初篩試驗的結果，選擇第二個出現陽性結果的供試品濃度作為干擾試驗（一般不選擇第一個出現陽性結果的供試品濃度作為干擾試驗）。用細菌內毒素檢查用水分別將供試品溶液稀釋至第二個出現陽性結果的供試品濃度（A），平行做2管（A）。用A溶液將細菌內毒素工作標準品稀釋成含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ（λ：0.03 EU/ml的系列溶液，及每個濃度（B）。用細菌內毒素檢查用水將細菌內毒素工作標準品稀釋成含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ的系列溶液，及每個濃度平行做4管（C）。另設立陰性對照（D），平行做兩管。

2 結果

2.1 干擾預試驗

結果顯示，溶液A、D均為陰性；溶液C均為陽性，試驗有效；溶液B系列中，本試驗中樣品的無干擾濃度為≥S52.8（表1）。第二個出現陽性結果的供試品濃度為S105.6，選擇S105.6作干擾試驗。

2.2 干擾試驗

干擾試驗結果顯示，供試品溶液和內毒素檢查用水分別作為供試品陰性對照和陰性對照，結果均為陰性，ES=0.03，在0.5λ

2.3 丙泊酚中/長脂肪乳注射液細菌內毒素檢查

取3批產品，使用λ為0.03 EU/ml的鱟試劑，參照《中國藥典》2015年版第四部1143細菌內毒素檢查法第一法（凝膠法）依法檢查[8]。結果顯示，A和D均為陰性；B和C均為陽性，試驗有效（表3）。表明這3批產品的細菌內毒素檢查均符合規定。

3 討論

細菌內毒素檢查法具有操作簡單、迅速且靈敏度高的特點，適用于注射劑生產過程中的熱原控制和家兔法不能檢測的某些細胞毒性藥物制劑。但它的試驗結果會受到鱟試劑、生產工藝、處方配比、試驗環境或供試品稀釋方式等多種因素的影響而發生變化，不同廠家的相同品種對其細菌內毒素檢查所產生的干擾情況也存在較大的差別，因此，進行干擾試驗是必要的[9-11]。本研究僅對一個廠家的鱟試劑和細菌內毒素工作標準品、特定生產工藝的產品、供試品稀釋方式等因素進行了干擾試驗，建議對不同廠家鱟試劑和細菌內毒素工作標準品、不同廠家的相同品種進行細菌內毒性檢測前都需進行干擾試驗，以獲得更準確、更可靠的試驗結果，保障產品的安全。

本研究采用靈敏度為0.03 EU/ml的鱟試劑，對3批丙泊酚中長鏈脂肪乳注射液進行試驗。從干擾試驗可知，Et/Es在0.5～2之間，稀釋105.6倍的丙泊酚中/長鏈脂肪乳注射液對細菌內毒素檢查沒有干擾，表明此法可行。

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