氣質聯用法檢測對甲苯磺酸酯類雜質

劉 成，張書玉，袁艷麗，蔡英杰，李新麗

(江蘇省理化測試中心，江蘇 南京 210042)

消旋卡多曲作為一種新作用機制的抗腹瀉藥，直接抑制腸道過度分泌，快速改善腹瀉癥狀，能明顯縮短病程、減少患兒的痛苦，適用于成人及1月以上嬰兒和兒童的急性腹瀉[1]。消旋卡多曲生產工藝線路長，在藥物生產過程中使用了對甲苯磺酸鹽、甲醇、乙醇和異丙醇等有毒有害試劑，產品中容易有對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯、對甲苯磺酸異丙酯等雜質的殘留。由于對甲苯磺酸酯類被視為潛在基因毒性雜質，可與DNA發生烷基化反應[2-3]，從而可能成為引發癌癥的誘因[4-5]，因此要嚴格控制消旋卡多曲中對甲苯磺酸酯類的含量。本試驗采用氣相色譜質譜聯用技術檢測消旋卡多曲中對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯和對甲苯磺酸異丙酯的含量，為消旋卡多曲藥物生產中雜質的檢測提供技術依據。

1 實 驗

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890B-5977A GC/MS氣相色譜-質譜聯用儀，美國安捷倫；BT25S電子天平，德國賽多利斯。

消旋卡多曲，對甲苯磺酸甲酯(分析純，純度≥99%)，對甲苯磺酸乙酯(分析純，純度≥99%)，對甲苯磺酸異丙酯(分析純，純度≥99%)。

1.2 色譜質譜條件

色譜柱：HP-5ms，固定相為5%苯基-甲基聚硅氧烷氣相毛細管柱(長：30 m，內徑：0.25 mm，膜厚：0.5 μm)。

載氣：氦氣。流速：0.8 mL/min。進樣口溫度：300 ℃。

程序升溫：初始柱溫80 ℃，保持2 min，以20 ℃/min的速度升到160 ℃，以3 ℃/min的速度升到180 ℃，再以20 ℃/min的速度升到320 ℃，保持15 min。

質譜檢測參數：電子轟擊(EI)離子源，電離能量70 eV，離子源溫度230 ℃，SIM掃描模式，分別選擇質荷比(m/z)為65、91、92、107、155、172、186的離子進行檢測。

1.3 標準溶液配制

稀釋劑：乙腈。供試品溶液：取本品適量，精密稱定溶于乙腈中。標準儲備液：分別精密稱取對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯和對甲苯磺酸異丙酯標準樣品，用乙腈稀釋至濃度為10 μg/mL。分別精密量取對照品貯備液50、100、200、300、400、500 μL于10 mL容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，得線性溶液，濃度為0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 μg/mL。取上述線性溶液各 1 μL進樣，記錄色譜圖。

2 結果與討論

2.1 專屬性驗證

配制對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯、對甲苯磺酸異丙酯混合標準溶液，進樣。專屬性考察結果表明，各目標峰(見圖1)之間分離度良好，無其他分子量相同的雜質干擾測定，該方法專屬性強。

圖1 對甲苯磺酸酯類雜質混合標準溶液的總離子流譜圖

2.2 檢出限

表1 檢測限試驗結果

取標準溶液適量逐級稀釋成0.005 μg/mL的溶液并進樣，連續進樣3針，記錄離子流圖，計算得信噪比(S/N)(見表1)。試驗數據顯示：對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯和對甲苯磺酸異丙酯檢出限濃度分別為0.05 mg/kg、0.067 mg/kg和0.070 mg/kg。

2.3 線性范圍

分別配置不同濃度的混合標準溶液，與樣品空白溶液同時進行測定，以各組分的峰面積與其對應的質量濃度繪制標準曲線，試驗結果表明，對甲苯磺酸甲酯在0.050～0.50 μg/mL濃度范圍內線性方程：y=6.366×105x+9159，相關系數：r=0.9992；對甲苯磺酸乙酯在0.05～0.50 μg/mL濃度范圍內線性方程：y=2.915×105x-405.3，相關系數：r=0.9991；對甲苯磺酸異丙酯在0.05～0.50 μg/mL濃度范圍內線性方程：y=9.753×104x+200.9，相關系數：r=0.9995。

2.4 方法精密度和準確度

分別配制相當于進樣濃度0.10 μg/mL、0.40 μg/mL的加標供試品溶液，平行進樣6次檢測，計算各目標化合物的含量，回收率及回收率的RSD。確定該色譜方法的測定結果與真實值(加入量)的差異，從而確認該方法是否可以獲得準確的測試結果。三種化合物的準確度測試結果見表2。對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯和對甲苯磺酸異丙酯平均回收率分別為93.0%、94.0%、94.3%。各基因毒性雜質的精密度結果分別為對甲苯磺酸甲酯3.5%，對甲苯磺酸乙酯2.7%，對甲苯磺酸異丙酯2.6%，測定結果的RSD 均≤10.0%。各雜質的加標回收試驗結果良好。該方法準確度和精密度良好。

表2 對甲苯磺酸酯類準確度測試結果

2.5 樣品檢測

消旋卡多曲供試品溶液：精密稱定供試品各1 g(精確到0.0001 g)，置于10 mL的量瓶中，搖勻，進樣測試。結果見表3。

表3 樣品檢測結果

3 結 論

本試驗用氣相色譜-質譜聯用法測定消旋卡多曲中的對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯、對甲苯磺酸異丙酯，本方法前處理簡單、所得數據準確,可用于消旋卡多曲中基因毒性雜質的定量。