兩株乳酸菌對高脂模型大鼠的益生作用

朱婕旭，高利娥，黃文康，李文苑，馬 瑩，郭旭生，丁梓桐

（蘭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，益生菌與生物飼料研究中心，甘肅 蘭州 730000）

膽固醇廣泛存在于動物體的細(xì)胞膜中，是細(xì)胞膜的重要組成部分，在動物體內(nèi)發(fā)揮重要的生理功能。近年來，國內(nèi)外心腦血管疾病如冠心病、動脈粥樣硬化等疾病的發(fā)生率和死亡率一直呈上升趨勢，嚴(yán)重威脅著人類的健康。而血清膽固醇的升高是導(dǎo)致心腦血管疾病的主要風(fēng)險之一[1]。有研究表明，血清膽固醇濃度每降低1%，相應(yīng)心血管疾病的發(fā)病率就大約降低2%～3%[2]。目前緩解高膽固醇的方法主要有兩種，一種是飲食干預(yù)，主要是限制高脂類及高膽固醇類食物的攝入，盡管這種方法有一定的效果，但是需要長期控制，因此在生活中很難達(dá)到預(yù)期效果；另一種是服用他汀類藥物抑制膽固醇的合成，但是，他汀類藥物具有一定的副作用[3-5]，容易誘發(fā)肝臟轉(zhuǎn)氨酶活力升高和骨骼肌毒性作用[6]，有些還可引起肝功能損傷[7]。因此，針對這兩種方法的缺陷，找到一種對人類安全有效的降膽固醇方法尤為重要。

2001年，聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織和世界衛(wèi)生組織定義益生菌為所攝取的足夠數(shù)量、對食用者身體健康能發(fā)揮有益作用的活的微生物[8]。益生菌不僅可以在腸道內(nèi)起激活免疫、抗感染、調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的作用[9-11]，還具有抗過敏[12]、抗腫瘤[13]、抗輻射延緩衰老[14]、治療炎癥性腸病[15]和改善酒精性肝損傷[16]等多種益生功能。據(jù)報(bào)道，長期食用具有降膽固醇作用的益生菌及其制品可降低血清中膽固醇及低密度脂蛋白的含量，從而降低心腦血管疾病的發(fā)病率[17]。20世紀(jì)初期，著名的生物學(xué)家梅契尼柯夫發(fā)表了《長壽學(xué)說》，首次從科學(xué)的角度揭示了乳酸菌的保健和醫(yī)療價值[18]。已有相關(guān)研究表明，乳酸菌能夠有效降低小鼠和豬血清中的膽固醇、甘油三酯（triglyceride，TG）和低密度脂蛋白膽固醇（low-density liptein cholesterol，LDL-C）的含量[19-20]。其機(jī)理可能是乳酸菌通過產(chǎn)生膽鹽水解酶與膽汁酸發(fā)生共沉淀作用降低膽固醇含量[1]。

因此，開發(fā)更多具有降膽固醇功能的乳酸菌將會為降血脂益生菌的研究與應(yīng)用奠定重要的基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)將羅伊氏乳桿菌BX56及瑞士乳桿菌BX-1應(yīng)用到高脂模型SD大鼠中，研究其對實(shí)驗(yàn)動物血脂水平的影響。這兩株菌是本實(shí)驗(yàn)室篩選自青藏高原傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸奶中體外降膽固醇能力較高的乳酸菌，具有較強(qiáng)的耐酸、耐膽鹽以及較強(qiáng)的腸道黏附能力，而且用鈣圈法測定發(fā)現(xiàn)菌株BX-1產(chǎn)膽鹽水解酶，而菌株BX56不產(chǎn)膽鹽水解酶，但這只是對乳酸菌降解膽固醇機(jī)理的一個初步的探討，并未深入研究。因此，初步確定這兩株菌是具有良好耐受力的降膽固醇乳酸菌。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究其對飼喂高脂日糧SD大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用，旨在為降血脂益生菌的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

健康雄性SD大鼠（許可證號：LZ170423），5 周齡，體質(zhì)量（150.51f 4.02）g，購自于蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，喂養(yǎng)于單獨(dú)隔離的鼠籠。飼養(yǎng)條件：環(huán)境溫度維持在（22f 2）℃，相對濕度維持在（55f 5）%，嚴(yán)格按照12 h光照和12 h黑暗循環(huán)，大鼠自由采食和飲水，并定期更換飲水和墊料。

普通飼料（粗蛋白質(zhì)23%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）、粗脂肪4.8%、粗纖維3.6%、鈣1.1%、總磷0.7%、無氮浸出物66.8%）、高脂飼料（麥芽糖糊精7.87%、纖維素5.54%、大豆油2.77%、可可油17.19%、膽酸鈉0.30%、L-胱氨酸0.33%、酪蛋白22.18%、玉米淀粉23.70%、復(fù)合礦物質(zhì)4.99%、復(fù)合維生素1.11%、酒石酸膽堿0.22%、蔗糖12.53%、膽固醇1.25%[21]） 北京科奧協(xié)力有限責(zé)任公司。

總膽固醇（total cholesterol，TC）試劑盒、TG試劑盒、總膽汁酸（total bile acid，TBA）試劑盒 浙江東歐診斷產(chǎn)品有限公司；血清高密度脂蛋白膽固醇（highdensity liptein cholesterol，HDL-C）試劑盒、血清LDL-C試劑盒 南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

大鼠固定器 上海茂生生物科技發(fā)展有限公司；大鼠灌胃針 北京合力科創(chuàng)科技發(fā)展有限公司；U-2910紫外-可見分光光度計(jì) 日本日立公司；HZQ-F160A高低溫恒溫振蕩培養(yǎng)箱 上海恒科儀器有限公司；高速冷凍離心機(jī) 美國Beckman公司；勻漿機(jī) 南通市衛(wèi)寧實(shí)驗(yàn)器材有限公司。

1.3 方法

1.3.1 菌種活化與菌懸液制備

將篩選得到的羅伊氏乳桿菌BX56與瑞士乳桿菌BX-1活化3 次后，分別接種于MRS液體培養(yǎng)基中置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 h后調(diào)整菌液濃度為1h 1010CFU/mL，各吸取菌液10 mL，8 000 r/min離心2 min后棄上清液，之后用滅菌的生理鹽水沖洗菌泥兩次，加入10 mL生理鹽水混勻，使菌液濃度仍為1h 1010CFU/mL。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)分組及飼喂方式

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周之后稱量其體質(zhì)量，隨機(jī)分為4 組，每組10 只。BX56組和BX-1組每天每只大鼠分別灌胃羅伊氏乳桿菌BX56（BX56組）與瑞士乳桿菌BX-1（BX-1組）菌液1 mL，對照組（C組）和高脂組（HC組）每天每只大鼠灌胃無菌生理鹽水1 mL。菌液需要每天現(xiàn)用現(xiàn)配，于上午固定時間灌胃。C組飼喂普通飼料，其他3 組飼喂高脂飼料。

1.3.3 體質(zhì)量增加量與采食量的測定

實(shí)驗(yàn)期間，各組大鼠均飼養(yǎng)7 周，每天稱量喂食量和剩余飼料量的質(zhì)量，計(jì)算大鼠每天的采食量。每周于固定時間稱量大鼠體質(zhì)量，并按公式（1）計(jì)算飼料利用率。

1.3.4 血液采集與檢測

從大鼠適應(yīng)期開始，每兩周斷尾采血2 mL，采血前將大鼠禁食禁水12 h。將采到的血樣置于冰上2 h，4 ℃靜置過夜，待血清自然析出，3 000 r/min、4 ℃離心2 min，分離出血清，棄去不溶物，將血清轉(zhuǎn)移至干凈的離心管中，保存于－20 ℃冰箱待測。

根據(jù)血清膽固醇各指標(biāo)試劑盒說明書對TC、TG、LDL-C和HDL-C質(zhì)量濃度進(jìn)行測定。

1.3.5 糞便含水量檢測

將鋁盒清洗干凈放入烘箱使其烘干至恒質(zhì)量，在干燥器中冷卻后稱質(zhì)量，記錄鋁盒編號及質(zhì)量m0/g。每周固定時間采集大鼠新鮮糞便，收集于稱質(zhì)量并編號的鋁盒中，再次稱質(zhì)量并記錄下總質(zhì)量m1/g。之后將鋁盒放入烘箱中，105 ℃烘48 h后取出鋁盒放入干燥器中，待冷卻后稱質(zhì)量并記錄總質(zhì)量m2/g。按公式（2）計(jì)算糞便含水量。

1.3.6 糞便TBA及TC含量檢測

將第7周收集的糞便準(zhǔn)確稱取1 g放入無菌試管中，按照1∶9（m/V）的比例加入9 倍體積的勻漿介質(zhì)，冰浴條件下機(jī)械勻漿后，2 500 r/min離心10 min，收集上清液。根據(jù)TBA試劑盒和TC試劑盒說明書分別測定糞便中TBA和TC的含量。

1.3.7 臟器指數(shù)測定

實(shí)驗(yàn)最后一周結(jié)束前將大鼠禁食12 h后安樂死，立即解剖大鼠，取出其肝臟、脾臟、腎臟，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗肝臟、脾臟和腎臟并用濾紙擦拭干凈，稱量并記錄其質(zhì)量。從每只大鼠肝臟最大肝葉的同一部位切取1 cmh 1 cm大小的組織塊，放入體積分?jǐn)?shù)10%的甲醛溶液中固定24 h。其余組織放入－20 ℃冰箱保存，并盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。按公式（3）計(jì)算臟器指數(shù)。

1.3.8 肝臟TC及TG含量的測定

將肝臟組織從－20 ℃冰箱中取出，準(zhǔn)確稱取1 g組織塊于干凈的離心管中，在冰浴條件下，以1∶9（m/V）的比例加入Folch溶液（氯仿-甲醇體積比2∶1），用高速勻漿器勻漿。然后4 ℃、5 000 r/min離心2 min，吸取上清液。按照TC和TG試劑盒說明書分別測定肝臟組織中TC和TG的含量。

1.3.9 肝臟組織切片與HE染色

將固定好的肝臟組織塊送至蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心制作組織切片。經(jīng)過包埋、切片、脫蠟、蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色等步驟完成組織切片的制作。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

利用Excel 2007軟件整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析與Duncan氏多重比較。數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母不同為差異顯著（P＜0.05）。用Origin 8.6軟件進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠體質(zhì)量增加量、采食量和飼料利用率變化

如表1所示，在體質(zhì)量增加方面，可以看出HC組大鼠的體質(zhì)量增加量顯著高于其他3 組（P＜0.05）。在采食量上，C組的大鼠采食量顯著高于飼喂高脂飼料大鼠的采食量（P＜0.05）。HC組大鼠的飼料利用率顯著高于C組、BX56及BX-1組的大鼠的飼料利用率。

表 1 各組大鼠體質(zhì)量增加量、總采食量和飼料利用率（n＝10）Table 1 Body mass gain, total feed intake and feed utilization rates in rats in each group (n= 10)

2.2 大鼠臟器指數(shù)變化

在實(shí)驗(yàn)期間各組大鼠食欲正常、毛色光潔，除了人為造成一只大鼠的意外死亡之外，其他大鼠均無死亡，也無異常行為。從表2中可以看出：飼喂高脂日糧組大鼠的肝臟指數(shù)顯著高于C組大鼠，而BX56和BX-1組大鼠的肝臟指數(shù)略低于HC組大鼠，但差異不顯著（P＞0.05）。而腎臟指數(shù)和脾臟指數(shù)在4 組SD大鼠之間沒有顯著性變化，這說明了灌胃的兩種乳酸菌對于SD大鼠沒有明顯的毒副作用。

表 2 各組大鼠臟器指數(shù)（n＝10）Table 2 Organ indexes of rats in each group (n= 10)

2.3 大鼠血清TC質(zhì)量濃度變化

圖 1 大鼠血清TC質(zhì)量濃度變化Fig. 1 Changes in serum total cholesterol content in SD rats

從圖1中可以看出，在第1周時4 組大鼠的血清TC質(zhì)量濃度差異不顯著。到第3周時HC組、BX56組和BX-1組大鼠的TC質(zhì)量濃度較C組明顯升高，且差異顯著 （P＜0.05），這表明給大鼠飼喂高脂飼料后，在第3周時高脂動物模型已經(jīng)基本建立。從第5周開始，BX56及BX-1組大鼠血清TC質(zhì)量濃度與HC組比較，均有所下降，且BX-1組與HC組之間差異顯著（P＜0.05），而BX56組與HC組之間差異不顯著。

2.4 大鼠血清TG質(zhì)量濃度變化

圖 2 大鼠血清TG質(zhì)量濃度變化Fig. 2 Changes in serum triglyceride content in SD rats

如圖2所示，從第3周開始，飼喂高脂日糧的3 組大鼠的血清TG質(zhì)量濃度開始顯著高于C組（P＜0.05）。第5周時，HC組大鼠血清中TG質(zhì)量濃度顯著高于C組大鼠和BX-1組大鼠（P＜0.05），而BX56組大鼠血清TG質(zhì)量濃度對比HC組雖然有所下降，但差異并不顯著。

自第3周起，飼喂高脂飼料大鼠的血清TC和TG質(zhì)量濃度就明顯高于C組大鼠，說明了本實(shí)驗(yàn)中SD大鼠高脂模型已基本建立。這一結(jié)果表明，在飼料中添加膽固醇和油脂類物質(zhì)可以誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動物脂類物質(zhì)代謝紊亂，從而引起血清膽固醇和TG質(zhì)量濃度的升高。這種通過在飲食中增加膽固醇和脂肪質(zhì)量濃度來建立高血脂動物模型的方法已被很多研究所采用。

2.5 大鼠血清LDL-C質(zhì)量濃度變化

圖 3 大鼠血清LDL-C質(zhì)量濃度變化Fig. 3 Changes in serum low-density liptein cholesterol levels in SD rats

如圖3所示，從第3周開始HC組、BX56組及BX-1組大鼠的LDL-C質(zhì)量濃度顯著高于C組大鼠，而從第5周開始，BX-1組大鼠的LDL-C質(zhì)量濃度開始顯著低于HC組（P＜0.05），而BX56組大鼠的LDL-C質(zhì)量濃度與HC組之間并沒有顯著性差異。

2.6 大鼠血清HDL-C質(zhì)量濃度變化

如圖4所示，血清HDL-C質(zhì)量濃度在4 組大鼠之間差異性不顯著，但從總體來看，灌胃乳酸菌的兩組大鼠HDL-C質(zhì)量濃度略高于HC組，這說明灌胃乳酸菌羅伊氏乳桿菌BX56和瑞士乳桿菌BX-1對于HDL-C質(zhì)量濃度有一定影響，但是效果并不明顯。

從以上結(jié)果可以看出，灌胃瑞士乳桿菌BX-1可以有效降低SD高脂大鼠血清中的TC、TG和LDL-C的質(zhì)量濃度，但是對HDL-C的質(zhì)量濃度影響不大。

圖 4 大鼠血清HDL-C質(zhì)量濃度變化Fig. 4 Changes in serum high-density liptein cholesterol levels in SD rats

2.7 大鼠糞便含水量變化

圖 5 大鼠糞便含水量變化Fig. 5 Changes in fecal water content in SD rats

由圖5可知，C組大鼠的糞便含水量最高，保持在60%左右，這與各組大鼠所喂食的飼料成分有很大的關(guān)系。而灌胃乳酸菌BX56和BX-1的兩組大鼠糞便含水量比HC組大鼠糞便含水量要高。

2.8 大鼠糞便TC和TBA含量變化

圖 6 不同處理組大鼠糞便TC含量Fig. 6 Fecal total cholesterol levels in SD rats in different groups

如圖6所示，BX-1組大鼠糞便TC含量顯著高于C組（P＜0.05），而BX56組、HC組及C組間大鼠糞便TC含量差異不顯著。

從圖7可以看出，HC、BX56、BX-1組大鼠糞便中TBA的含量顯著高于C組（P＜0.05），同時BX-1組的大鼠糞便中TBA含量也顯著高于其他3 組（P＜0.05）。綜上來看，BX-1組大鼠糞便中TC含量高于HC組大鼠，但差異不顯著；TBA的含量顯著高于HC組大鼠，而BX56組大鼠的TC、TBA含量與HC組大鼠相比差異不顯著。

圖 7 不同處理組大鼠糞便TBA含量Fig. 7 Fecal total bile acid content in SD rats in different groups

2.9 大鼠肝臟TC和TG含量變化

圖 8 不同處理組大鼠肝臟TC含量Fig. 8 Total cholesterol levels in the liver of SD rats in different groups

圖 9 不同處理組大鼠肝臟TG含量Fig. 9 Triglyceride levels in the liver of SD rats in different groups

如圖8、9所示，飼喂高脂飼料的大鼠肝臟中TC和TG含量遠(yuǎn)高于C組，但是灌胃瑞士乳桿菌BX-1的大鼠肝臟中TC、TG的含量顯著低于HC組（P＜0.05），灌胃羅伊氏乳桿菌BX56的大鼠的肝臟TG含量雖然也顯著低于HC組，但肝臟TC含量與HC組相比差異并不顯著。

2.10 大鼠肝臟組織HE染色結(jié)果

圖 10 大鼠肝臟組織HE染色Fig. 10 Histological examination by hematoxylin-eosin staining of SD rat liver tissues

根據(jù)前期得到的血清、肝臟以及糞便中的數(shù)據(jù)可知，羅伊氏乳桿菌BX56在大鼠體內(nèi)降低膽固醇的能力并不理想，因此不再做該組大鼠肝臟組織HE染色。

由圖10A可知，正常的肝臟細(xì)胞，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，核大而圓，細(xì)胞呈索狀排列，胞漿為紅色。由圖10B可知，HC組大鼠的肝臟有嚴(yán)重的脂肪肝病變。該組大鼠肝臟細(xì)胞呈圓形，細(xì)胞內(nèi)部充滿了脂肪空泡，紅色胞漿較少，內(nèi)有較多微小脂滴，細(xì)胞核被脂肪泡擠至細(xì)胞邊緣，肝竇受壓。由圖10C可以看出，該組大鼠肝臟組織雖然也有不同程度的脂肪浸潤，但是總體看來，細(xì)胞內(nèi)部的脂肪泡數(shù)量較HC組少很多，胞漿呈現(xiàn)紅色，并且還有正常形態(tài)的肝臟細(xì)胞存在。由此可知，瑞士乳桿菌BX-1可以減少脂肪在肝臟細(xì)胞中的浸潤，保護(hù)肝臟細(xì)胞。

3 討 論

乳酸菌已成為治療人類和動物腸道疾病的一種益生菌，大量研究已經(jīng)證明部分乳酸菌能夠在體外和體內(nèi)都起到降膽固醇的作用。本研究通過建立SD大鼠高脂模型，并灌胃乳酸菌進(jìn)行干預(yù)，通過比較大鼠血清、糞便以及肝臟各指標(biāo)來初步探究降膽固醇乳酸菌對高脂模型大鼠的益生作用。

實(shí)驗(yàn)期間，灌胃乳酸菌的兩組大鼠的體質(zhì)量增加量顯著低于高脂組大鼠的體質(zhì)量增加量。這可能是由于灌胃乳酸菌后會影響大鼠的脂質(zhì)代謝，在一定程度上減少了大鼠的體質(zhì)量增加量。有研究已經(jīng)證明一些乳酸菌菌株能夠有效抑制由高脂飲食引起的大鼠體質(zhì)量的過度增加[22]。

Bazzare等[23]在1983年就已經(jīng)提出，攝入益生乳酸菌對人類也許是最為安全有效的降低血清膽固醇的方法。Nguyen等[24]用從嬰兒糞便中分離得到的植物乳桿菌PH04灌胃高膽固醇血癥的大鼠，發(fā)現(xiàn)灌胃乳酸菌組大鼠血清TC和TG的含量相比于C組都分別降低7%和10%，表明植物乳桿菌PH04在降低膽固醇方面能發(fā)揮有效的益生作用。本實(shí)驗(yàn)中BX-1組SD大鼠的血清TC、TG和LDL-C質(zhì)量濃度要顯著低于高脂組大鼠，但是血清HDL-C質(zhì)量濃度沒有顯著差異。這表明菌株BX-1可以有效降低高脂大鼠血清中TC、TG和LDL-C的含量，但是對HDL-C含量的影響不大。李梅等[25]以不同劑量的兩株雙歧桿菌飼喂高脂血癥模型大鼠后，得出這兩株雙歧桿菌均能顯著降低大鼠血清TG和TC含量，但是對HDL-C的含量沒有顯著影響。這與本實(shí)驗(yàn)中所得出的結(jié)論相符。但是， 肖琳琳等[26]將分離到的一株干酪乳桿菌用于高血脂小鼠進(jìn)行體內(nèi)的降血脂作用研究，結(jié)果證實(shí)菌液組小鼠與對照組小鼠相比，血清中TC和TG濃度顯著降低，同時HDL-C濃度增加。Hashimoto等[27]也發(fā)現(xiàn)干酪乳桿菌可以增加HDL-C的濃度。

正如預(yù)期所料，攝入高脂飼料會導(dǎo)致肝臟TC和TG含量的升高，但灌胃瑞士乳桿菌BX-1組大鼠的肝臟TC和TG含量均顯著低于高脂組大鼠。同時為了全面評價乳酸菌的降血脂作用，制作了大鼠肝臟組織切片，通過HE染色，在顯微鏡下可以看出：BX-1組大鼠肝臟細(xì)胞中的脂肪空泡要明顯少于高脂組大鼠，其肝臟組織形態(tài)也更接近于正常大鼠，這進(jìn)一步表明瑞士乳桿菌BX-1可以明顯改善脂類物質(zhì)在大鼠肝臟中的沉積，起到保護(hù)肝臟細(xì)胞的作用，這可能是因?yàn)榻夤曹椖扄}和膽固醇共同沉淀致使肝臟中的膽固醇會形成新的膽酸進(jìn)入肝膽循環(huán)，從而可降低肝臟中膽固醇的含量。此外，雖然灌胃瑞士乳桿菌BX-1組的大鼠肝臟脂質(zhì)沉積減少了，肝臟指數(shù)也顯著低于高脂組，但仍高于C組，這可能與長期攝入高劑量的高脂飼料有關(guān)。胡夢坤[28]、Xie Ning[29]等的研究中也得出了相同的結(jié)論。

Usman[30]和Jeun[31]等關(guān)于乳酸菌在降低大鼠血清膽固醇的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)大鼠體內(nèi)膽固醇水平降低的同時糞便中膽酸的含量顯著高于C組。本實(shí)驗(yàn)中灌胃瑞士乳桿菌BX-1組的大鼠糞便中的膽汁酸含量要高于高脂組，這可能是由于瑞士乳桿菌BX-1所產(chǎn)生的膽鹽水解酶在腸道內(nèi)對膽鹽的解共軛作用使得脫結(jié)合的膽酸量在糞便中顯著增加。已有研究發(fā)現(xiàn)，部分乳酸菌能夠產(chǎn)生膽鹽水解酶，這種膽鹽水解酶可以將膽鹽水解為游離態(tài)的膽酸，脫結(jié)合的游離膽酸在小腸中比結(jié)合態(tài)的膽酸更難吸收，并且比結(jié)合態(tài)的膽酸更快排泄，更易于與膳食纖維和腸道細(xì)菌黏附，結(jié)果造成了糞便中膽酸含量的增加。與此同時，膽酸的重吸收減少，又使得肝臟中的膽固醇被分解合成膽酸參與肝膽循環(huán)，從而降低了體內(nèi)TC的 含量[32-33]。因此，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明，乳酸菌在體內(nèi)降膽固醇的作用與膽酸的代謝息息相關(guān)。

灌胃瑞士乳桿菌BX-1組的大鼠雖然也長期攝入高脂飼料，但是其糞便的含水量要比高脂組高4.4%。Wang Yanping等[34]報(bào)道用植物乳桿菌MA2灌胃高脂模型大鼠5 周后發(fā)現(xiàn)，灌胃乳酸菌的大鼠糞便含水量比高脂組大鼠平均高了7%，這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似，同時也表明瑞士乳桿菌BX-1和羅伊氏乳桿菌BX56在一定程度上可以增加糞便含水量，具有潛在的潤腸通便的能力。

最后，灌胃羅伊氏乳桿菌BX56組的大鼠，其糞便膽固醇和肝臟膽固醇的水平與對照相比差異不顯著，糞便膽汁酸和肝臟TG的水平與對照相比差異顯著。這可能是由于BX56不產(chǎn)膽鹽水解酶，在腸道內(nèi)無法水解共軛膽鹽，因此無法促進(jìn)膽固醇參與肝膽循環(huán)來降低體內(nèi)膽固醇的含量，只通過菌體細(xì)胞自身吸收同化部分膽固醇，所以在體內(nèi)降膽固醇效果并不明顯。大量實(shí)驗(yàn)證明，乳酸菌在代謝中產(chǎn)生的膽鹽水解酶具有沉淀去除膽固醇的能力[23]，但也有實(shí)驗(yàn)證明，某些不產(chǎn)膽鹽水解酶的乳酸菌也能很好地降解膽固醇[35-36]。目前降解膽固醇的機(jī)理還不完全清楚，有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，從青藏高原傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸奶中分離純化出來的瑞士乳桿菌BX-1在高脂模型大鼠中表現(xiàn)出良好的降低血清及肝臟TC、TG水平的能力和促進(jìn)膽固醇、膽汁酸排出體外的能力，為進(jìn)一步開發(fā)預(yù)防和治療膽固醇高血脂癥的益生菌制劑提供了理論依據(jù)，但其降解膽固醇的機(jī)理還需進(jìn)一步的研究。可以進(jìn)一步從基因入手，通過研究乳酸菌對體內(nèi)膽固醇代謝相關(guān)基因的影響，來發(fā)現(xiàn)其具體的降膽固醇作用機(jī)制。