黃芪對病毒性心肌炎患兒相關細胞因子及HSP70的影響

牛 玲, 安新江, 徐 慧, 田 靜, 傅鳴郁, 王慶文, 李春利, 許永茂

(徐州醫科大學附屬徐州市兒童醫院心血管內科, 江蘇 徐州 221000)

病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)是人體感染嗜心機性病毒，心肌細胞內的病毒不斷復制導致心肌溶解，由此誘發一系列心肌非特異間質性的炎癥，是除先天性心臟病之外小兒最常見的心臟病之一，且年齡小發病率高。《美國心臟學雜志》和《國際中醫中藥雜志》有研究提出[1,2]，對外來抗原及入侵微生物的免疫反應和防御技能的調節主要是有細胞因子來完成的，而黃芪作為一種傳統中藥，有同表止汗、利水消腫、托毒排膿及生肌等功效，是一味補氣中藥，至今仍廣泛作用于生物學，能起到抑制柯薩奇病毒的作用，并且能有效降低心肌細胞的凋亡和壞死率，對于治療小兒病毒性心肌炎效果確切。然而，黃芪的治療作用是否與IL-1、IL-6、IFN-γ、TNF-α和HSP70有關還尚未見報道。因此，本文通過口服黃芪顆粒研究觀察患兒在治療前后細胞因子的變化狀況，為黃芪類藥物在治療中的廣泛應用提供實驗基礎?，F將研究結果報告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料:選取70例于2016年4月至2018年3月在我院住院治療的病毒性心肌炎患兒作為研究對象，將其用簡單隨機數字表法分為對照組32例和研究組38例。選取的患兒各項檢查項目包括病史、臨床表現、心電圖(Electrocadiogram,ECG)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、彩色多普勒超聲心動圖(Color Doppler Echocardiography,CDE)，上述檢查項目均按照《1999年中華醫學會兒科分會心血管學組制定的關于小兒病毒性心肌炎的臨床診斷標準》[3]嚴格進行并且符合納入標準：①有明顯的心功能不全；②有明顯的心臟增大；③存在明顯的心律失常；④心肌酶譜發生變化；這四條標準，如有兩條符合即可診斷為兒童心肌炎；其中，兒童病毒性心肌炎還需在心肌中找到特殊的病毒顆粒。排除標準：伴有其他系統嚴重疾?。徊荒芎芎门浜蠈嶒?，藥物過敏。本研究經過醫院醫學倫理委員會批準同意，患兒家屬均簽署知情同意書。

1.2方法:首先，對照組患兒均給予常規治療方案：聯合維生素C注射液(生產企業：安徽聯誼藥業股份有限公司,批準文號：國藥準字H34021858)100～200mg/kg/d，1次/d靜滴，最大量不超過成人；磷酸肌酸鈉注射液(生產企業：河北天成藥業股份有限公司,批準文號：國藥準字H20084021)：1.0g/d，1次/d靜滴；注射用1,6-二磷酸果糖(企業名稱：Biomedica Foscama Industria Chimico Farmaceutica S.p.A.批準文號：H20100111)100～250 mg/kg/d，1次/d。研究組的患兒常規治療基礎上，再額外給予口服黃芪顆粒(生產企業：四川百利藥業有限責任公司 批準文號：國藥準字Z20003380)：<3歲，2g/次，2次/d；3～6歲 4g/次，2次/d；≥7歲 8g/次 2次/d；療程為1周。細胞因子HSP70的檢測方法:抽取清晨空腹的患兒靜脈血2mL使其自凝，后用3000r/min離心五min后提取血清，分裝并置于-20℃條件下保存。細胞因子IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ、HSP70的檢測方式采用雙抗夾心ELISA法(試劑盒由武漢純度生物科技有限公司提供)測定。

1.3統計學方法:應用SPSS22.0統計學軟件科學分析此次研究得出的數據，計數資料用n(%)表示，χ2檢驗；組間比較用重復測量法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1一般臨床資料比較:兩組患兒在年齡、性別和病情等一般資料方面差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組一般臨床資料比較

2.2兩組患者細胞因子在治療前和治療一周后的變化對比，見表2。

表2 細胞因子在治療前治療1周后的變化

表3 HSP70在治療前治療1周后的變化

2.3兩組患者HSP70在治療前和治療一周后的變化對比，見表3。

3 討 論

病毒性心肌炎是病毒感染侵襲心肌，引起的以心肌間質炎癥為主的心臟疾病?？滤_奇B組病毒是其最主要病原，病毒感染的初期直接影響心肌組織造成直接損傷，隨后誘發自身免疫反應形成永久持續性損傷[4]。由多個動物試驗及臨床試驗研究表明該過程中一系列的細胞因子、蛋白質、細胞凋亡相關因子發揮著巨大的作用[5]。本文通過對臨床病例的研究分析，觀察黃芪對病毒性心肌炎患兒IL-1、IL-6、IFN-γ、TNF-α等細胞因子及HSP70的影響。

目前，免疫系統紊亂這一說法在病毒性心肌炎發病機制中的主導地位愈發被認可。人體的免疫系統是覆蓋全身的防衛網絡，其中主要的三道防線由免疫器官(扁桃體、淋巴結、胸腺、骨髓、和脾臟等)、免疫細胞(淋巴細胞、吞噬細胞等)借助血液循環和淋巴循環而組成。其中淋巴細胞的免疫地位頗為重要。當TH1/TH2處于平衡狀態時，機體的免疫功能呈正常狀態，當TH1占優勢時，身體會出現過度炎癥反應，導致機體受損。TH1、TH2分泌的相關炎癥因子也在這個網絡中互相協同、互相牽制，發揮重要的作用[6]。國外一些醫學家也對此作出了相關的研究，比如Zhang Y等人研究發現病毒性心肌炎患兒血清IL-1水平增高[7]；Huber A T 等人研究發現IL-1在局部濃度過高的話會加重人體組織的損傷。動物實驗表明在小鼠病毒性心肌炎急性期給予IL-1抑制劑或IL-1受體拮抗劑可能會減輕小鼠的心肌損傷。而黃芪正好有抑制IL-1水平的效果，可以達到保護心肌的作用[8]。張少卿[9]等認為：體內細胞因子濃度的變化影響著疾病的轉歸。細胞因子濃度較低時可以限制病毒的發展。細胞因子濃度較高時反而容易導致機體組織的損傷。她們通過對細胞因子IL-6及IFN-γ的研究發現，適量的IL-6及IFN-γ可發揮抗炎、抑制病毒發展的作用。而它們的過度表達反而會導致心肌細胞的損傷。黃芪則可有效降低它們的濃度，保護心肌細胞。本文的研究結果表明，研究組治療后，IL-6及IFN-γ低于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)；對照組治療后，IL-6及IFN-γ低于治療前，差異有統計學意義(P<0.05)；且研究組和對照組治療后，研究組IFN-γ低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，與文獻報道觀點相符，支持黃芪可通過下調IL-6及IFN-γ水平保護心肌細胞，減輕免疫損傷的結論。李程遠[10]等研究報道：在病毒性心肌炎發病過程中，病毒的入侵直接損傷心肌細胞后，將誘導淋巴細胞、NK細胞分泌產生大量的TNF-α，它可導致心肌發生炎性病變，容易受病毒感染的心肌細胞，但當病毒感染清除后，體內仍存的大量的TNF-α可破壞心肌細胞膜，進而導致心肌受損；它們通過給病毒性心肌炎患兒注射黃芪注射液結果發現，TNF-α濃度明顯降低，考慮黃芪可通過降低TNF-α水平保護心肌細胞。而本文的研究結果表明，研究組患兒治療后體內的TNF-α水平較對照組明顯下降，差異有統計學意義，這與目前的報道相符。

熱休克蛋白是一類遺傳高度保守的熱應激蛋白，它廣泛存在于原核生物和真核中，從細菌到哺乳動物均可見其表達，這種蛋白根據分子質量大小及同源程度可以分為HSP60、HSP70、HSP90、HSP110等等。近年來的大量研究熱點是HSP70，主要是因其在生物細胞中的含量較高，作用廣泛，可誘導性最強，具有多種生物學功能。目前研究表明在心血管系統方面，HSP70能協助蛋白合成、修復損傷蛋白質、減少細胞凋亡、保護線粒體免受細胞因子損傷等。它通過多種途徑阻止細胞凋亡，延長細胞壽命。本文結果表明病毒作用后心肌細胞HSP70濃度增加，而應用黃芪顆粒治療后研究組的HSP70濃度明顯升高，與對照組差異有統計學意義(P<0.05)，支持上述觀點。

病毒性心肌炎屬的發病機制較為復雜，涉及到人體免疫、細胞凋亡等多個層面，而黃芪顆粒因廣泛作用于生物學，是現代制藥工藝加工中藥黃芪而制成的中藥顆粒，它的化學成分包括黃芪皂苷、黃芪多糖和異黃酮類化合物等二十多種氨基酸，可以有效抑制病毒繁殖，誘發干擾素生成以達到抑制病毒復制。其還有鈣拮抗作用，還是良好的免疫調節劑，恰好能從抑制細胞凋亡、阻止病毒侵入細胞、抗自由基的損傷、抑制病毒RNA復制、減輕自身免疫反應等方面發揮重要作用。中藥治療是國粹，與西醫結合能更好的改善疾病的預后，是中西醫結合的良好成果。在中醫學中，病毒性心肌炎歸屬于“胸痹”、“心痹”等范疇，認為發病的主要原因是正氣不足和邪毒侵心導致氣血兩虛、脈絡瘀阻、血運無力，因此在中醫臨床治療上多以理氣活血、化瘀通陽及益氣養陰為原則。

本研究結果顯示黃芪顆?？山档筒《拘孕募⊙谆純后w內IL-1、IL-6、IFN-γ、TNF-α濃度，上調HSP70水平，為黃芪治療小兒病毒性心肌炎提供更為豐富及科學的實驗依據和理論依據，也說明祖國醫學在心血管系統中應用具有廣泛的前景。本研究局限在于臨床研究時間較短、樣本數有限，且關于從細胞因子的相關通路方向研究黃芪治療小兒病毒性心肌炎的機制還有待進一步明確。