宮頸癌患者血清葉酸受體-1表達水平及早期診斷價值

李九龍,劉 林,張 湘,李惠惠,張玲琳,劉 華,劉 欣,鐘曉武,龍 璠

(1.南充市第五人民醫院檢驗科，四川南充 637100;2.川北醫學院轉化醫學研究中心,四川南充 637100)

近年來我國宮頸癌發病率呈逐年遞增趨勢，調查顯示，宮頸癌患者浸潤癌發病年齡44～45歲，原發性癌為30～35歲[1]。大量研究證實[2]90%宮頸癌伴有持續高危型人類乳頭瘤樣病毒(HPV)感染。隨著宮頸細胞學不斷發展，部分宮頸癌及癌前病變患者得以及時發現，并進行積極治療，使宮頸癌發病率和病死率在一定程度上有所降低。但由于宮頸癌發病隱匿，仍有部分患者確診時已進入中晚期，錯失最佳治療時機，導致患者預后較差。因此宮頸癌的早期診斷和病情監測對于制定合理的治療方案具有重要意義。目前宮頸癌的治療方案主要基于宮頸液細胞學檢測，但不同病理分期在預測宮頸癌生物學行為存在一定局限性，故尋找有價值的早期診斷宮頸癌的腫瘤標志物一直是臨床研究的熱點。葉酸受體-1(FOLR1)是糖基化磷脂酰基醇偶聯的糖蛋白，相對分子質量38～40×103，由FOLR1基因編碼，對葉酸在DNA合成、細胞代謝增殖分裂發揮出重要作用。研究發現[3]FOLR1可從腫瘤脫落的游離受體通過自身孔道進入血液系統，提示血清FOLR1可成為早期腫瘤標志物，在宮頸癌診斷、病情監測方面具有潛在價值，但臨床缺乏相應研究。本研究利用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清FOLR1表達水平，進一步探討FOLR1對宮頸癌早期診斷價值，現將研究成果總結如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2017年1月至2019年1月在南充市第五人民醫院門診行宮頸脫落細胞學檢查136例HPV感染患者臨床資料，在陰道鏡直視下取宮頸組織進行病理組織學確診，分為宮頸上皮內瘤變組58例和宮頸癌組78例。納入標準：(1)所有患者均為首次診斷為宮頸病變；(2)近3月內未進行宮頸疾病相關治療；(3)近1個月未服用B族維生素；(4)術前均未行內分泌、放化療等抗癌治療；(5)所有患者術前均簽署知情同意書。排除標準：(1)妊娠或哺乳期婦女；(2)宮頸錐切史；(3)合并嚴重肝腎功能異常者；(4)合并其他腫瘤病史；(5)生殖道炎癥或其他婦科合并癥。另選擇同期52例醫院體檢的健康女性作為健康對照組，年齡20～60歲，平均(41.8±7.7)歲。排除其他良惡性腫瘤、自身免疫性疾病。本研究經醫院倫理委員會審核批準。

1.2方法

1.2.1樣本采集 宮頸上皮內瘤變組和宮頸癌組于術前清晨空腹抽取肘靜脈血3 mL，以2 500 r/min高速離心15 min，靜置10 min后抽取上層血清，置于-70 ℃冰箱內保存備用。對照組于體檢當日抽取肘靜脈血3 mL，樣本處理方式同宮頸癌組。采用酶聯免疫吸附試驗檢測2組血清FOLR1表達水平，檢測設備為美國MD SpectraMax M5多功能酶標儀，試劑盒購自于武漢博士德生物工程公司，試驗操作嚴格按照檢測試劑盒說明書執行。

1.2.2資料收集 收集3組研究對象臨床資料，包括年齡、體質量指數、病理類型、組織分化、腫瘤分期、孕次、流產史、腫瘤家族史等。并將血清FOLR1表達與宮頸癌組臨床病理資料進行分析。

2 結 果

2.13組研究對象血清FOLR1含量比較 宮頸癌組血清FOLR1含量明顯高于宮頸上皮內瘤變組、健康對照組，差異具有統計學意義(t=8.214、8.587,P<0.001)，而宮頸上皮內瘤變組與健康對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.23組研究對象臨床資料比較 3組研究對象在年齡、FOLR1、HPV感染、16型HPV感染比較，差異具有統計學意義(P<0.05)；而在孕次、流產史、腫瘤家族史比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.3血清FOLR1含量與宮頸癌患者病理參數關系 根據宮頸癌患者血清FOLR1含量中位數271.68 ng/L將患者分為高表達組42例和低表達組36例。血清FOLR1含量與年齡、病理類型、組織分化、FLGO分期、 淋巴結轉移有關，差異有統計學意義(P<0.05)；血清FOLR1含量與孕次、流產史、腫瘤家族史無關，差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

2.4血清FOLR1鑒別宮頸病變的診斷效能 血清FOLR1鑒別宮頸癌和宮頸上皮內瘤變的AUC為0.884，根據最大約登指數(0.605)確定最佳界值為201.13 ng/L，靈敏度為81.03%，特異度為79.49%。血清FOLR1鑒別宮頸癌和健康對照組的AUC為0.946，根據最大約登指數(0.769)確定最佳界值為187.53 ng/L，靈敏度為84.62%，特異度為92.31%，見表4、圖1。

表1 3組研究對象血清FOLR1水平比較

注：與宮頸上皮內瘤變組比較,*P<0.05；與健康對照組比較,#P<0.05。

表2 3組研究對象臨床資料比較

表3 血清FOLR1含量與宮頸癌患者臨床資料關系(n)

續表3 血清FOLR1含量與宮頸癌患者臨床資料關系(n)

表4 血清FOLR1對宮頸上皮內瘤變、宮頸癌的診斷效能

圖1 血清FOLR1診斷宮頸病變的ROC曲線

3 討 論

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，發病率約占婦科腫瘤的12%左右，僅次于乳腺癌居于第二位[4]。研究顯示[5]葉酸與胃癌、結腸癌、宮頸癌等多種腫瘤發生發展相關，葉酸是S-腺苷蛋氨酸主要成分，而S-腺苷蛋氨酸是維持機體甲基正常代謝提供者。研究證實[6]機體低甲基化發生與葉酸缺乏有關，適量補充葉酸可逆轉宮頸癌前病變，及時抑制惡性病變，提示葉酸在細胞增殖、分裂及組織生長方面發揮重要作用。研究發現[7]宮頸癌是多因素導致慢性發病過程，其中HPV持續感染是常見的感染類型。HPV與宮頸癌研究表明[8]，腫瘤細胞組織中葉酸缺乏可降低甲基化水平，導致宮頸癌的發生。本研究結果顯示，宮頸癌的發生與HPV持續感染存在協同關系。有學者研究發現[9]HPV16型感染且葉酸濃度低宮頸上皮內瘤變患者明顯增大癌變風險，提示這與葉酸缺乏可協同HPV增大宮頸癌病變的風險。

FOLR1為一種膜蛋白，可與GPI偶聯細胞膜，能夠內吞介導葉酸進入細胞，對葉酸及衍生物具有高度親和力[10]。研究顯示[11]FOLR1在惡性腫瘤上調是因為腫瘤細胞快速生長導致葉酸的代謝需求增加，表明FOLR1在細胞代謝、修復合成DNA及腫瘤細胞增殖分裂中發揮重要作用。本研究首次觀察血清FOLR1與宮頸癌患者臨床病理資料，結果發現血清FOLR1表達水平與年齡、病理類型、組織分化、FLGO分期、 淋巴結轉移有關，與曾正蓮等[12]報道的FOLR1蛋白表達與宮頸癌患者臨床病理資料的關系一致。說明血清FOLR1與宮頸癌發生發展有關，可以作為患者早期診斷的指標。研究發現[13]FOLR1在正常組織中呈低表達，而在特定上皮組織來源的惡性腫瘤中呈高表達，如非黏液性卵巢癌、原發腎癌、子宮內膜癌、乳腺癌、鼻咽癌、胰腺癌等，并且與腫瘤發生、發展過程密切相關。王皓潔等[14]發現將近78%的Ⅰ～Ⅱ期宮頸癌患者FOLR1呈高水平表達，這與FOLR1中晚期患者中比例相當，但晚期患者的FOLR1表達水平更高。本研究進一步檢測血清FOLR1表達水平，結果證實宮頸癌患者血清FOLR1水平明顯高于宮頸上皮內瘤變組和健康對照組，表明FOLR1可能在宮頸癌發生發展中發揮重要作用，這與蘇敏君等[15]報道相一致。而血清FOLR1水平在早期宮頸癌患者快速升高，并且隨著FIGO腫瘤分期而增高，進一步表明FOLR1水平上調可能發生在宮頸癌疾病早期，提示血清FOLR1有作為檢測宮頸癌病變的潛在價值。本研究利用ROC曲線分析血清FOLR1對宮頸癌的早期診斷價值，結果發現血清FOLR1鑒別宮頸上皮內瘤變的AUC為0.884，診斷宮頸癌AUC為0.946，說明血清FOLR1有望成為宮頸癌早期篩查和病情監測的腫瘤標志物之一。

4 結 論

宮頸癌患者血清FOLR1水平明顯升高，高水平表達FOLR1與患者年齡、病理類型、組織分化、FLGO分期、淋巴結轉移有關，血清FOLR1可作為宮頸癌早期診斷指標之一。