FHL2與PBX3在宮頸癌組織中表達與臨床病理特征及預后的相關性

周偉平

(湖南省腦科醫院/湖南省第二人民醫院病理科，湖南長沙 410007)

宮頸癌是我國婦科常見的一種惡性腫瘤，患者年齡主要集中于40～60歲，但近年來其發病人群逐漸年輕化，發病率以及病死率較高[1]。宮頸癌的發病與病毒感染、性行為、分娩等相關因素相關，嚴重危害患者的生命健康[2]。為了能夠使宮頸癌患者早期確診與治療，以降低患者病死率，進行的相關研究顯示，宮頸癌組織中的相關蛋白變化能夠反映疾病的嚴重程度，但尚需進一步研究[3]。四個半LIM結構域蛋白2( FHL2)是屬于LIM蛋白家族的一員，最早發現于成肌細胞與橫肌肉瘤細胞中，能夠參與基因轉錄調節、細胞分化、信號轉導以及腫瘤發生發展的過程[4-5]。前B細胞白血病同源盒基因3(PBX3)是屬于PBX家族的成員，能夠參與機體細胞的發育以及進化[6]。既往研究顯示，FHL與PBX同屬同源異型盒基因(HOX)的轉錄因子，在腫瘤的發生發展過程中起到了一定的作用[7-8]。而HOX基因高表達在宮頸癌的發生發展中的作用已得到證實[9]。但是目前尚未見其中的FHL2與PBX3在宮頸癌中的表達研究。因此，本次研究主要是探討FHL2與PBX3在宮頸癌組織中的表達與臨床特征及預后的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2013年12月至2015年12月收治的55例宮頸癌患者作為研究對象，采用回顧性分析法分析患者的臨床資料將患者癌組織標本分為研究組(55例)，將患者癌旁組織標本(距腫瘤邊緣4 cm處)作為對照組。患者年齡30～74歲，平均(47.66±11.32)歲。納入標準：(1)符合宮頸癌診斷標準[10]；(2)獲得患者及家屬的知情同意，并簽署知情同意書；(3)經病理檢查已確診為宮頸癌，并適合手術者；(4)所有患者術前均未進行放療、化療。排除標準：(1)合并其他惡性腫瘤者；(2)嚴重肝腎心功能不全者；(3)代謝異常者；(4)既往精神病史者。本次研究已獲得本院醫學倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑 兔抗人FHL2單克隆抗體為美國HBT公司產品；兔抗人PBX3購于上海億欣生物科技公司；免疫組化試劑盒和DAB顯色試劑盒產于北京中山生物技術有限公式。

1.2.2免疫組化法 嚴格按照試劑盒說明進行SP法免疫組織化學檢測，FHL2與PBX3均按照說明書進行稀釋。所有標本均進行常規固定、包埋、切片，脫蠟后，使用3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶，抗原修復后，加入一抗4 ℃過夜，二抗孵育，DAB顯色、復染、脫水、透明以及封片，最后用PBS代替一抗作為空白組對照，一切操作均嚴格按照SP試劑盒說明書進行。

1.2.3結果判定[11]每張切片隨機選取5個高倍鏡視野，計數500個腫瘤細胞，FHL2蛋白定位于細胞核中，PBX3蛋白定位于細胞質，染色陽性為均勻棕黃色顆粒。并根據細胞染色強度與陽性細胞百分比進行綜合評分。(1)根據陽性細胞染色強度：無著色為0分；黃色為1分；棕色為2分；棕褐色為3分。(2)根據陽性細胞百分比：<5%為0分，5%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。(3)將陽性細胞比例與著色強度相乘：≥6分均為陽性表達，<6分為陰性表達。免疫組織化學結果判定由高年資的病理醫師完成。

1.3隨訪 采用電話或者上門進行隨訪，隨訪截止時間為2018年12月30日，隨訪時間為2～36個月，以患者發生轉移、死亡或隨訪時間結束為終點。

2 結 果

2.1兩組FHL2、PBX3蛋白表達水平比較 研究組FHL2、PBX3蛋白陽性表達率明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。免疫組化法檢測顯示，FHL2在宮頸癌組織主要表達在細胞質或細胞膜(棕色染色)，而在癌旁組織細胞質中少有表達，見圖1；PBX3在宮頸癌組織中主要表達在細胞質(棕色染色)，而在癌旁組織細胞質中少有表達，見圖2。

2.2宮頸癌組織FHL2、PBX3蛋白表達和臨床病理特征的關系 FHL2、PBX3蛋白表達與宮頸癌患者的年齡、病理類型等臨床特征不相關(P>0.05)，但與宮頸癌患者的腫瘤分化程度、淋巴結轉移、浸潤深度以及病理分級相關，當腫瘤分化程度越低、有淋巴轉移、浸潤深度越深以及病理程度越高時，FHL2、PBX3蛋白陽性表達率越高，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表1 兩組組織標本間FHL2、PBX3蛋白表達率的比較[n(%)]

2.3宮頸癌患者的預后生存情況 所有研究對象從出院至隨訪結束時存活2～36個月。宮頸癌患者中位生存期為20個月，其中FHL2陽性表達和陰性表達患者的中位生存期分別為18、30個月，PBX3陽性表達和陰性表達患者的中位生存期分別為17和32個月，比較差異有統計學意義(P<0.05)。

注：A表示癌組織；B表示癌旁組織。

圖1FHL2在宮頸癌組織及癌旁組織中的表達(×400)

注：A表示癌組織；B表示癌旁組織。

圖2PBX3在宮頸癌組織及癌旁組織中的表達(×400)

表2 55例患者宮頸癌組織FHL2、PBX3蛋白表達情況與臨床病理特征的相關分析

續表2 55例患者宮頸癌組織FHL2、PBX3蛋白表達情況與臨床病理特征的相關分析

表3 影響宮頸癌癌患者預后的單因素分析(n)

2.4宮頸癌患者預后的單因素分析 經單因素分析得出：腫瘤低分化、淋巴結轉移、浸潤深度>1/2、病理分級G3、FHL2、PBX3陽性表達的患者生存時間均顯著縮短，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

2.5宮頸癌患者預后的Cox多因素分析 經多因素Cox比例風險回歸模型分析得出：腫瘤低分化、淋巴結轉移、浸潤深度>1/2、病理分級G3、FHL2、PBX3陽性表達均為影響宮頸癌患者預后的獨立因素(P<0.05)，見表4。

表4 影響宮頸癌患者預后Cox多因素分析

3 討 論

FHL2是屬于FHL蛋白家族一員，富含279個氨基酸，主要是由四個半富含半胱氨酸的FHL結構域組成[12]。主要是位于細胞核并在細胞質與細胞核之間穿梭，并且在大腦以及骨骼肌、心臟中特異性表達，同時能夠在不同組織中作為轉錄因子激活或抑制轉錄以及誘導組織細胞的凋亡[13]，并有經過研究證明，FHL2能夠影響腫瘤的發展以及轉移侵襲的能力[14]。PBX3是屬于PBX蛋白家族成員之一，主要是作為細胞內的轉錄因子，主要是對于哺乳動物細胞的發育、進化有著重要功能，既往主要是研究PBX3表達在白血病患者中作用，但隨著深入研究發現，PBX3在腫瘤的發生發展方面有著重要作用[15-16]。

宮頸癌是女性生殖系統疾病中發病率僅低于乳腺癌的一種婦科腫瘤疾病，在我國，發病年齡主要集中在40～50歲，但近年來發病年齡逐漸年輕化，且發病率有著明顯的地區差異[17]，臨床主要出現陰道流血、排液、發熱，嚴重時出現全身衰竭等癥狀[18]。目前臨床上為了能夠降低發病率以及病死率，常采用宮頸細胞學篩查，雖能夠降低患者的發病率，但宮頸癌患者的發病率和病死率仍較高[19]。有相關研究報道，FHL2表達上調能夠導致患者腫瘤逐漸惡化[20]。研究發現，PBX3表達能夠促進腫瘤細胞的增殖，同時對于評估患者的預后有一定的作用[21]。但對于FHL2與PBX3蛋白是否能夠評估宮頸癌患者的嚴重程度以及預后尚未有具體研究結果。因此，本次研究主要是探討FHL2與PBX3在宮頸癌組織中表達與臨床特征及預后的相關性。

本次研究結果顯示，研究組FHL2、PBX3蛋白陽性表達明顯高于對照組，表明FHL2、PBX3在宮頸癌患者中表達水平增高；FHL2、PBX3蛋白表達與宮頸癌患者的年齡、病理類型等，但與宮頸癌患者的腫瘤分化程度、淋巴結轉移、浸潤深度以及病理分級相關，當腫瘤分化程度越低、有淋巴轉移、浸潤深度越深以及病理程度越高時，FHL2、PBX3蛋白陽性表達率越高，表明FHL2、PBX3表達能夠反應疾病的嚴重程度；宮頸癌患者平均中位生存期20個月，其中FHL2陽性表達和陰性表達患者的中位生存期分別為18個月、30個月，PBX3陽性表達和陰性表達患者的中位生存期分別為17個月、32個月中位生存期；經單因素分析得出：腫瘤低分化、淋巴結轉移、浸潤深度>1/2、病理分級G3、FHL2、PBX3陽性表達的患者生存時間均顯著縮短；經多因素Cox比例風險回歸模型分析得出：腫瘤低分化、淋巴結轉移、浸潤深度>1/2、病理分級G3、FHL2、PBX3陽性表達均為影響宮頸癌患者預后的獨立因素，由此可見，當宮頸癌患者病情逐漸加重時，FHL2、PBX3表達水平增高，能夠作為評估患者嚴重程度以及預后的有效指標。

4 結 論

FHL2與PBX3蛋白在宮頸癌組織中的表達水平升高，且表達水平與宮頸癌患者的臨床特征顯著相關，對于宮頸癌患者的發生、發展以及預后均有著重要的臨床意義，可作為評估宮頸癌的嚴重程度以及預后的有效指標。但本組研究選取樣本量較少，研究時間過短，尚需進一步深入研究。