支氣管哮喘氣道炎癥表型與Th1/Th2和IgE的相關研究*

努爾阿米娜·鐵力瓦爾迪,熱依拉·牙合甫，韓利梅，李 新，古力鮮·馬合木提

(新疆醫科大學第二附屬醫院呼吸內科，烏魯木齊 830063)

支氣管哮喘是遺傳和環境共同作用的結果，隨著環境污染的加重，兒童和成人支氣管哮喘的患病率逐漸增加，已引起臨床和社會的高度重視。病理研究發現[1]，支氣管哮喘是多種炎性細胞和炎性介質參與，氣道高反應性、呼吸受限可逆、氣道重塑的慢性炎癥疾病，也是阻塞性肺疾病和呼吸衰竭的重要原因。氣道炎癥表型是支氣管哮喘的重要機制之一，通常根據誘導痰液分為中性粒細胞(Neu)居多型、嗜酸性粒細胞(Eos)居多型、混合型和寡細胞型，近期研究還發現[2]，白三烯表達增多可能也是一個重要的炎癥表型。不同的炎癥表型可能在發病機制、臨床特征以及重要生化標志物表達方面存在一定差異，臨床上進行針對性干預有重要意義。因此，該研究重點分析了不同氣道炎癥表型的支氣管哮喘患者的循環血Th1/Th2和IgE水平與臨床特征的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年6月至2018年12月于本院診斷為支氣管哮喘的患者共180例，納入標準：(1)年齡18～75歲；(2)符合支氣管哮喘的診斷標準[3]；(3)近3個月未接受抗哮喘藥物治療，如支氣管舒張劑、糖皮質激素、茶堿類；(4)能獲得可分析的誘導痰液；(5)取得知情同意，經倫理委員會批準,臨床資料完善。排除標準：(1)重癥哮喘、哮喘持續狀態，合并呼吸衰竭、重癥肺炎、肺癌；(2)肝腎功能障礙、自身免疫性疾病。根據誘導痰液Neu和Eos百分比分為Neu組(Neu>65.0%)、Eos組(Eos>1.0%)、混合組(Neu>65.0%且Eos>1.0%)和寡細胞組(Neu<65.0%且Eos<1.0%)，分別50例(27.8%)、98例(54.4%)、21例和11例。Neu組男22例，女28例，平均(42.6±6.7)歲；Eos組男46例，女52例，平均(41.5±6.3)歲；混合組男10例，女11例，平均(43.1±6.5)歲；寡細胞組男5例，女6例，平均(43.2±6.8)歲；性別和年齡組間比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 入組患者完善相關檢查，評估病情，根據哮喘指南推薦進行合理治療，如吸氧、抗感染、化痰、霧化吸入，藥物主要有支氣管舒張劑、糖皮質激素、茶堿類等。檢測循環血輔助性T細胞1/2(Th1/Th2)和IgE水平，Th1分泌細胞因子血清干擾素-γ(IFN-γ)和Th2分泌白細胞介素-4(IL-4)，抽取清晨外周肘靜脈6～8 mL，分裝2個抗凝管，1個采用流式細胞術檢測Th1/Th2，1個采用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)法檢測IFN-γ、IL-4和IgE，試劑購自美國Sigma公司，嚴格按照說明書步驟進行。流式細胞檢測主要步驟：取20 μL抗凝外周全血于96孔培養板上培養4 h，于流式管中加入表面標記抗體CD4-FITC，設置同型陰性對照管，避光孵育20 min，300×g離心5 min棄上清；加入胞內抗體IFN-γ-FITC和IL-4-APC，避光孵育50 min；離心洗滌后上機檢測。

比較各組患者的臨床特征，包括性別、年齡、哮喘病程、嚴重程度、吸煙、氣道感染、過敏性鼻炎(AR)和皮膚點刺試驗(SPT)，以及肺功能，包括第1秒用力呼氣容積(FEV1)及與用力肺活量的比值(FEV1/FVC)、用力呼氣中段流量(MMEF%)、50%用力呼氣流量(FEF 50%)和75%用力呼氣流量(FEF 75%)。根據標準肺功能檢測流程完成，每個患者間隔10～20 min重復測量2次，取平均值。

1.3統計學處理 數據錄入采用Excel軟件，統計分析采用SPSS20.0軟件，計量資料符合正態分布和方差齊性檢驗，多組間比較采用ANOVA分析和LSD-t檢驗法作兩兩組間比較，計數資料作χ2檢驗；檢驗水準取雙側0.05，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1各組臨床特征的比較 Neu組和混合組患者哮喘病程和嚴重程度明顯大于其他兩組，吸煙和氣道感染率增加；Eos組和混合組患者過敏性鼻炎和皮膚點刺試驗陽性率高于其他兩組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2各組肺功能的比較 4種炎癥表型組患者的肺功能FEV1/FVC、FEV1、FEF 50%、FEF 75%、MMEF%比較差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3各組Th1/Th2、IgE和細胞因子水平的比較 Eos組和混合組的Th1/Th2明顯低于Neu組和寡細胞組，IgE水平增加，IFN-γ和IL-4水平升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表1 各組臨床特征的比較

注：與Eos組比較，aP<0.05；與混合組比較，bP<0.05；與Neu組比較，cP<0.05。

表2 各組肺功能的比較

表3 各組Th1/Th2、IgE和細胞因子水平的比較

注：與Eos組比較，aP<0.05；與混合組比較，bP<0.05。

3 討 論

哮喘是一組高度特異度疾病，約30%～70%有過敏史，遠離過敏原和有效的免疫療法可取得較好的臨床療效[4]。過敏性哮喘的氣道組織和細胞以大量浸潤Eos和分泌IgE為主要特征，Th2細胞在趨化和激活Eos，刺激B淋巴細胞分泌IgE中發揮主要作用[5-6]。180例哮喘患者中54.4%為Eos型，27.8%為Neu型，是臨床中最常見的兩種炎癥表型，提示氣道內的炎癥細胞浸潤以Eos和Neu為主，Eos反映了氣道高反應性和過敏性，與哮喘的主要發生機制相吻合[7]；而Neu則提示氣道內過強的感染性炎癥，哮喘的促發因素離不開氣道內多種病原微生物的感染，如定植菌、獲得性病原菌，而且哮喘的維持和進展往往與肺部感染相伴行，抗感染通常也是哮喘的基本療法[8-9]。

誘導痰液檢測Eos水平可幫助判斷哮喘控制、預測哮喘失控，在過敏性哮喘兒童中應用有較好的準確性[10]。而且氣道Eos含量還與FEV1和對醋甲膽堿反應性有較好的負相關性，對指示氣流受限程度和氣道高反應性有重要的應用價值[11]。本研究發現Eos組和混合組的Th1/Th2明顯小于Neu組和寡細胞組，IgE水平升高，IFN-γ和IL-4水平增加。研究認為[12]，哮喘的發生與機體免疫功能Th1/Th2的平衡障礙有關，以Th1表達下降，Th2升高明顯，因此，哮喘患者與健康人群比較，Th1/Th2值顯著下降。IgE水平反映機體對過敏刺激的免疫強度，IFN-γ反映Th1細胞活性，IL-4反映Th2細胞活性，T淋巴細胞功能激活進而誘導B淋巴細胞分泌更多的抗體，參與機體的炎性反應和免疫調節[13-14]。

Neu組和混合組患者哮喘病程和嚴重程度明顯大于其他兩組，吸煙和氣道感染率增加；Eos組和混合組患者過敏性鼻炎和皮膚點刺試驗陽性率高于其他兩組。氣道內Neu浸潤增多提示哮喘病情惡化、氣道內感染、吸煙等，肺功能下降較明顯，多見于大劑量糖皮質激素治療的重癥哮喘、哮喘持續狀態患者[15-16]。Neu激活可釋放多種酶、細胞因子和炎癥介質，參與炎性反應過程[17-18]。各組肺功能指標比較差異無統計學意義。提示，肺功能不能作為鑒別氣道炎癥表型的依據。哮喘存在不同的炎癥表型，但臨床特征差異不大[19]。

4 結 論

支氣管哮喘患者具有不同的炎癥細胞表型，與循環血Th1/Th2和IgE水平以及臨床特征有密切聯系。研究的目的提示哮喘患者的不同炎癥表型可能與臨床特征、免疫功能紊亂有關，是否可作為常規臨床檢查技術，對指導臨床用藥和改善哮喘預后方面的意義還有待進一步研究。