冰醋酸在胸腔液基細胞學制片中的應用研究

汪貽苑 王 琦 李 增 李傳應

近年來，肺癌已經成為發展中國家和發達國家惡性腫瘤相關死亡的主要原因之一，是一個重大的公共衛生問題[1]。胸腔液基涂片作為肺癌篩查的常用方法，其制片質量與HE染色結果密切相關，進而影響檢測結果的判斷。若標本含有大量血液、淋巴液、脫落細胞或細菌，這些細胞或雜質貼附在制片區，影響病理細胞的判讀[2]。因此，高質量的細胞學制片對臨床病理診斷顯得尤為重要。本實驗將圍繞這一問題，探討冰醋酸作為輔助裂解液在胸腔液基細胞學制片中的應用價值，以期優化液基細胞學制片方法和質量。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 冰醋酸（AR 國藥集團化學試劑有限公司）、無水乙醇（AR 無錫市展望化工試劑有限公司）、HE染液（珠海貝索生物技術有限公司）、生理鹽水（石家莊四藥有限公司）、液基薄層細胞制片機（南京健邦錦源醫療儀器有限公司，JY-8000B）。

1.2 方法

1.2.1 試劑配制 取50 mL冰醋酸與50 mL生理鹽水混勻配成體積分數為50%冰醋酸；另取兩支潔凈無菌試管分別加入50 mL生理鹽水，采用倍比稀釋的方法依次配成25%冰醋酸和12.5%冰醋酸溶液，備用。

1.2.2 涂片制備 ①所有標本來源為本醫院2019年-2020年疑似肺癌患者行將胸腔液基細胞學檢查的標本，選取其中90例，分為正常組、血性液組和渾濁液組，各組30例。②取正常組、血性液組和渾濁液組標本離心處理，棄上清液，取沉渣于細胞保存液，混勻后分別置于制片機上制片，作為對照組。③如上相同的方法處理血性液組和渾濁液組標本，分別取沉渣于細胞保存液，混勻后分別加入50%冰醋酸、25%冰醋酸、12.5%冰醋酸，混勻后置于自動制片機上制片。④所有標本制片后行HE染色，光學顯微鏡觀察染色情況。

2 結 果

2.1 肉眼觀察結果 ①液基細胞學檢查正常胸腔液呈黃色或淺黃色、澄清透明狀液體，或有少量細胞均勻分布；渾濁液組胸腔液為深黃色，懸浮有大量細小顆粒狀物；血性液組胸腔液呈紅棕色、灰褐色或暗紅色，內含大量血細胞，不透明。②將各組標本制成直徑約13 mm的圓形細胞薄層片，后行HE染色，結果顯示，正常組呈一薄層細胞均勻分布，表面平整，邊緣整齊，染色均勻；血性液組和渾濁液組未經冰醋酸處理的涂片厚薄不一，染色不均勻，表面不平整；經冰醋酸處理組涂片外觀似正常組涂片，且隨著冰醋酸濃度變化，著色深淺不同。

2.2 鏡下觀察結果 ①正常組涂片背景干凈，少量細胞，無明顯雜質，分布均勻，著色對比清晰（圖1-P）。②渾濁液組和血性液組，未經冰醋酸處理的涂片染色不均勻，有較多細胞碎片或細胞堆積，可見大片的紅染區，著色對比不明顯（圖1-A，圖1-E）；經50%冰醋酸處理的涂片背景雜亂，細胞破壞較多，血性液組可見較多紅染區，著色對比不清晰（圖1-B，圖1-F）；經25%冰醋酸處理的涂片與正常組涂片相似，背景較為干凈，細胞分布均勻，紅染區大幅減少，著色對比清晰（圖1-C，圖1-G）；經12.5%冰醋酸處理的涂片染色不均勻，有較多細胞碎片和細胞堆積，著色對比不清晰（圖1-D，圖1-H）。

注：P：正常胸腔液所制涂片HE染色結果；A渾濁胸腔液未經冰醋酸處理所制涂片HE染色結果；B：渾濁胸腔液經50%冰醋酸處理所制涂片HE染色結果；C：渾濁胸腔液經25%冰醋酸處理所制涂片HE染色結果；D：渾濁胸腔液經12.5%冰醋酸處理所制涂片HE染色結果；E：血性胸腔液未經冰醋酸處理所制涂片HE染色結果；F：血性胸腔液經50%冰醋酸處理所制涂片HE染色結果；G：血性胸腔液經25%冰醋酸處理所制涂片HE染色結果；H：血性胸腔液經12.5%冰醋酸處理所制涂片HE染色結果

3 討 論

液基細胞薄層涂片檢測（TCT）是利用重力沉淀或濾膜原理，制作標準化優良細胞學病理薄片的技術[3]。與傳統細胞直接涂片相比，其優勢在于：一方面避免直接涂片造成細胞干燥，影響染色[4]。另一方面，自動化程序制作的薄片均勻，乙醇作為固定液使得細胞核結構清晰，細胞分布均勻易于染色和觀察[5～6]。

肺癌是引起胸腔積水的主要病因之一，因此鑒別胸腔液的性質是排查肺部癌性病變的重要手段。然而，不同疾病引起胸腔液的顏色、透明度、蛋白和細胞的含量及分類有所不同。因此，胸腔液基細胞學檢查是肺部腫瘤篩查、診斷和治療必不可少的手段。若胸水中含有大量血液、淋巴液、脫落細胞或細菌等，在行液基細胞學檢查時就會嚴重影響觀察、制片和染色。一方面紅細胞碎片、部分大分子蛋白、細菌顆粒會貼附在制片區或炎癥細胞、上皮細胞過度重疊，甚至覆蓋病理細胞造成背景雜亂，導致無法觀察而影響診斷；另一方面被染液染色的血細胞或細菌顆粒等粘附于玻片上，造成染色背景復雜，著色對比不清晰，影響病理細胞的判讀[2]，因此正確處理血細胞或其他雜質蛋白是液基細胞學制片成功的關鍵。研究表明，冰醋酸能夠改變血紅細胞膜[7～8]和細菌細胞壁的通透性，促進大分子蛋白質的變性。目前臨床上普遍采用高濃度的冰醋酸來處理上述標本，方法是直接向標本中加入一定比例的冰醋酸，裂解紅細胞后離心去除紅細胞碎片，但是大量的高濃度冰醋酸會將一部分正常細胞以及病變細胞也一同裂解，因此在去除紅細胞同時可能會因為病變細胞也被裂解而造成漏檢。所以需要通過合適方法來排除過多血液或大分子蛋白等雜質的干擾。

本實驗中我們用不同濃度的冰醋酸處理標本，以探究其在胸腔液基細胞學制片中的應用價值，取得了良好的效果。本實驗結果與相關文獻結果一致[9]，即冰醋酸體積分數為25%左右為最適濃度，冰醋酸的濃度過高或過低裂解效果均不明顯，這可能是由于高濃度的冰醋酸不僅能裂解紅細胞，也會影響上皮細胞等有核細胞的通透性，使部分正常的細胞也遭到裂解，從而影響制片的質量。因此，在胸腔液基細胞學制片中用適當濃度的冰醋酸作為裂解液，有助于提高涂片染色效果和制片的質量，從而提高異常細胞的檢出率，具有較好的臨床應用價值。