槲寄生在肝癌治療中的作用研究進(jìn)展

劉 爽 曹正民 呂文良

中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院感染疾病科，北京 100053

肝癌在我國的發(fā)病率及死亡率極高，全球每年一半以上的新發(fā)肝癌病例均發(fā)生在我國，是目前我國第四位的常見惡性腫瘤及第三位的腫瘤致死病因［1］。肝癌病發(fā)隱匿，早期不存在明顯表現(xiàn)，患者就診時大部分已進(jìn)入晚期階段，常以肝區(qū)疼痛、食欲減退、乏力等癥狀就診，病重者會有肝硬化腹水、脾大、黃疸等表現(xiàn)，嚴(yán)重威脅著我國人民的生命和健康。因此，積極防治肝癌是臨床上亟需解決的重要問題。中醫(yī)古籍中雖無肝癌病名，但對肝癌的認(rèn)識卻由來已久，早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》就有其相關(guān)記載。中醫(yī)認(rèn)為肝癌屬于“積聚”“石水”“臌脹”“黃疸”“脅痛”等范疇，并運用中藥治療本病淵源已久，頗具優(yōu)勢，其中槲寄生更是以其多途徑多靶點的治療特點在防治肝癌中發(fā)揮著巨大的作用。本綜述將從中醫(yī)及西醫(yī)兩個角度，較全面地探討槲寄生在肝癌治療中的相關(guān)作用。

1 中醫(yī)角度

槲寄生，又名北寄生、冬青、桑寄生、柳寄生、黃寄生等，是桑寄生科植物槲寄生的干燥帶葉莖枝。其始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，始稱桑寄生［2］。從《名醫(yī)別錄》到《本草綱目》關(guān)于桑寄生的記載大都指槲寄生，直至1918 年《植物學(xué)大辭典》的頒布，槲寄生才代替原有的桑寄生被醫(yī)學(xué)界廣泛使用［3］。槲寄生味苦甘、性平。歸肝、腎經(jīng)，《神農(nóng)本草經(jīng)》言其：“主腰痛，小兒背強，癰腫，安胎，充肌膚，堅發(fā)、齒，長須眉。”《日華子本草》言其：“助筋骨，益血脈。”《生草藥性備要》言其：“消熱，滋補，追風(fēng)。養(yǎng)血散熱，作茶飲，舒筋活絡(luò)。”由此可見，槲寄生在補肝腎，強筋骨，祛風(fēng)濕，通經(jīng)絡(luò)，消癰解毒，益血等方面頗有驗效。

肝癌的病因復(fù)雜，從其發(fā)病及臨床表現(xiàn)看，多為虛實夾雜之證。朱丹溪言其為：“七情內(nèi)傷，六淫外侵，飲食不節(jié)，房勞致虛。”張景岳言其為：“以血氣結(jié)聚，不可解散。”是以可見，肝癌為本虛標(biāo)實之證，其肝腎陰虛，脾虛不運為本，毒瘀互結(jié)，膠結(jié)不去為標(biāo)。因此在治療時常攻補兼施，補益肝腎，調(diào)和肝脾，以顧護先天后天，通絡(luò)祛瘀，攻毒散結(jié)以肅清機體內(nèi)環(huán)境。研究顯示［4］，近年來臨床治療肝癌用藥貢獻(xiàn)度最高的四類藥物分別為利水滲濕藥、清熱藥、祛風(fēng)濕藥和理氣藥。而槲寄生作為祛濕藥的代表藥之一，苦能燥，甘能補，祛風(fēng)濕且長于補肝腎、強筋骨、通經(jīng)活絡(luò)、養(yǎng)血散熱，正切肝癌肝腎虛，毒瘀結(jié)之發(fā)病機制。

因此，在對肝癌的治療上大有裨益。錢英教授［5］以槲寄生為治肝癌特色藥，并創(chuàng)制了以其作為君藥之一的槲芪方，獲得了良好的臨床效果。其方在改善臨床癥狀及體征、改善肝功能、抑制病毒復(fù)制、抗肝纖維化方面具有較好的療效［6］。由此可見，槲寄生在對肝癌的治療上，很有針對性，需要更深一步地探討。

2 西醫(yī)角度

槲寄生是一種具有多種生物學(xué)活性的藥用植物，其分離物中主要包含黃酮類、生物堿類、萜類、糖類等高分子化合物，其藥物作用十分豐富，可以在抗心律失常、防治急性心肌梗死、抑制血小板聚集、增強免疫功能、改善微循環(huán)和抗腫瘤等方面發(fā)揮作用［7］。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示［8］，槲寄生主要通過其提取物，如槲寄生生物堿、槲寄生凝集素（mistletoe，ML）、槲寄生毒肽（viscotoxins，VT）等發(fā)揮抗肝癌作用。以下將具體論述槲寄生提取物在肝癌治療中的作用機制。

2.1 ML 抗肝癌研究

ML 可以從槲寄生或歐洲槲寄生中通過提取、過濾、分離、純化而來，是一種具有高生物活性的核糖體抑制性蛋白質(zhì)，主要通過抑制核糖體水平上的蛋白質(zhì)合成而發(fā)揮作用。ML 具有ML-Ⅰ、ML-Ⅱ、ML-Ⅲ3 種亞單位，均屬于Ⅱ型核糖體滅活家族，且具有同源的氨基酸序列，每種亞單位都由A、B 鏈構(gòu)成，并通過二硫鍵連接［9］。A 鏈的突出特性是抑制蛋白質(zhì)的合成。B 鏈的突出特性是激活巨噬細(xì)胞并釋放淋巴細(xì)胞。B 鏈可以與細(xì)胞表面受體半乳糖結(jié)合，因其Ⅰ、Ⅱ結(jié)構(gòu)域同其他同源核糖體失活蛋白一樣，所以能抑制蛋白質(zhì)合成，從而誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。ML-Ⅰ在進(jìn)入細(xì)胞的過程中必需解離出具催化作用的結(jié)合亞基，二硫鍵裂解，A 鏈經(jīng)胞飲作用進(jìn)入細(xì)胞，因其具有對28 Sr RNA 的N 端糖苷酶的活性，所以可以斷裂糖苷鍵，使60S 核糖體不能與延伸因子EF-2 反應(yīng)，從而阻斷核糖體蛋白的生物合成，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡［10］。由此可見，槲寄生的鏈結(jié)構(gòu)對誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡具有重要作用。A、B 鏈與ML-Ⅰ相對分子質(zhì)量相同，作用機制相近。ML-Ⅰ對特異的糖有親和性，且與惡性腫瘤細(xì)胞表面的糖配體結(jié)合率極高，除了可以誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞凋亡，亦可作為其他抗腫瘤藥物的靶向性運載工具。利用ML 這一特點，如果運用得當(dāng)，通過系統(tǒng)給藥，可以準(zhǔn)確地殺死靶區(qū)局部的腫瘤細(xì)胞，等體積靶向切除腫瘤，最大限度地減少周圍正常組織的損傷，以達(dá)到局部殺滅的目的，從而提高抗癌藥物的有效率。

ML 有很多誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的途徑，Caspase 途徑為其中之一。Caspase 是一種促使細(xì)胞凋亡的蛋白酶［11］，分三種亞型：第一型細(xì)胞凋亡始動者，第二型細(xì)胞凋亡執(zhí)行者，第三型炎癥介質(zhì)反應(yīng)調(diào)節(jié)者。其中Caspase-3 屬于第二型細(xì)胞凋亡執(zhí)行者，因其參與細(xì)胞因子介導(dǎo)炎癥反應(yīng)且可以在死亡受體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑中起關(guān)鍵作用，被稱為死亡蛋白酶，一旦被激活，就會發(fā)生下游的級聯(lián)反應(yīng)，使凋亡不可避免［12］。孫華等［13］研究發(fā)現(xiàn)，Caspase-3 酶活性隨著ML 作用劑量的增加而增加，而加入Caspase-3 抑制劑的實驗組Caspase-3 酶活性非常低。由此可見，ML 可通過Caspase-3 途徑直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，此實驗可以為臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)，也可以為槲寄生制劑的制備提供新思路。此外，ML 還能通過抑制端粒酶的活性以抗癌。端粒酶與引起腫瘤細(xì)胞凋亡的相關(guān)基因關(guān)系密切，可以在腫瘤細(xì)胞中廣泛表達(dá)，是目前已知比較常見的惡性腫瘤分子標(biāo)志物。此外，瑞粒酶具有逆轉(zhuǎn)錄酶的活性，能以自身RNA 為模板，不斷合成新的端粒序列，從而獲得無限增殖的能力。因此，端粒酶的激活是惡性腫瘤細(xì)胞永生化的必需條件，而ML 通過抑制端粒酶的活性，可以在關(guān)鍵點上遏制惡性腫瘤的無限復(fù)制增生［14］。

ML 對細(xì)胞免疫和體液免疫也有促進(jìn)作用。免疫實驗顯示［15］，ML 是有效的免疫佐劑，可增強細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，ML 可以活化γδ+T 細(xì)胞使其釋放白細(xì)胞介素-2（IL-2）、γ 干擾素（INF-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細(xì)胞因子，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。靜脈滴注ML 有多種免疫調(diào)節(jié)作用，如嗜中性粒細(xì)胞增多，粒細(xì)胞吞噬活性增強和自然殺傷（NK）細(xì)胞增多。NK 細(xì)胞在抗腫瘤免疫中起著重要作用，因為其介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的消除并調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫。ML可增強外周NK 細(xì)胞的功能，激發(fā)外周血巨噬細(xì)胞活性及造血母細(xì)胞活性，誘導(dǎo)體內(nèi)自由基的清除。在對培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的研究過程中［16］發(fā)現(xiàn)，ML 通過增強樹突狀細(xì)胞的成熟性表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)特性，使用人樹突狀細(xì)胞進(jìn)行的體外研究顯示，ML 對人樹突狀細(xì)胞具有誘導(dǎo)成熟的作用。由此可見，ML 可以通過細(xì)胞及體液免疫間接介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的消亡。

2.2 VT 抗肝癌研究

槲寄生的主要有效成分除黃酮類化合物和一些植物分子外，還包括一些高分子化合物，VT 就是其中一種。VT 的生物活性極高，是一類分子量在5 kD 左右的含有46 個氨基酸殘基的堿性毒性多肽［17］。而VT與抗腫瘤作用密切相關(guān)主要體現(xiàn)在以下幾個方面：VT 對動物細(xì)胞、細(xì)菌和真菌均有細(xì)胞毒作用。主要通過破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)而發(fā)揮作用，膜雙分子層被破壞，膜內(nèi)容物外漏，而使細(xì)胞死亡；VT 可以抑制惡性腫瘤細(xì)胞增殖。楊學(xué)良［18］通過四氮唑比色法（MTT）證明重組槲寄生能夠?qū)θ烁伟┘?xì)胞株SMMC7721 的增殖產(chǎn)生抑制作用；VT 還有免疫調(diào)節(jié)作用，其可以通過對人類粒性白細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)對腫瘤起作用。用不同濃度的VT 作用于腫瘤細(xì)胞，則可以得到生長抑制曲線。由此可見，VT 有一定的抗腫瘤活性。但是關(guān)于VT 的相關(guān)研究較少，應(yīng)進(jìn)一步探索其抗腫瘤作用的機制。

2.3 槲寄生總堿抗癌研究

槲寄生總堿是抗肝臟惡性腫瘤的有效成分之一，是多種生物堿的混合。包括酚性弱堿性生物堿、非酚性弱堿性生物堿、酚性叔胺生物堿、非酚性叔胺生物堿、水溶性生物堿等5 種生物堿，可以用稀醋酸浸提法或酸堿法提取，在體內(nèi)外均具有抗腫瘤作用。而槲寄生總堿與抗腫瘤作用密切相關(guān)主要體現(xiàn)在以下幾個方面：孟霞等［19］研究發(fā)現(xiàn)，槲寄生總堿能夠抑制肝癌前病變組織端粒酶活性的表達(dá)，其作用是通過抑制凋亡相關(guān)基因核因子（NF）-κB 的過表達(dá)，增加IκB-α的表達(dá)，進(jìn)而降低端粒酶的活性。進(jìn)而抑制異型變的肝細(xì)胞端粒合成，對癌變過程的促癌階段有阻斷作用。李若菲等［20］研究發(fā)現(xiàn)，通過觀察槲寄生總堿治療肝癌前病變大鼠組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)指標(biāo)及Hedgehog 信號通路表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)槲寄生總堿可能通過Hedgehog 信號通路抑制大鼠肝癌前病變。王鵬雁等［21］研究發(fā)現(xiàn)，槲寄生總堿也可以通過將細(xì)胞阻滯在DNA合成前期引起細(xì)胞增生受阻，從而使細(xì)胞凋亡。此外，還可以抑制腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期，可以通過抑制蛋白質(zhì)合成或抑制DNA 合成而阻滯DNA 復(fù)制期的細(xì)胞進(jìn)入DNA 復(fù)制后期和分裂期，從而減少細(xì)胞的有絲分裂，使DNA 復(fù)制前期細(xì)胞百分比下降，細(xì)胞增殖受到抑制，通過抑制肝癌細(xì)胞的數(shù)量，而控制肝癌的發(fā)展。黃曲霉毒素B1是最強化學(xué)致癌物之一，被作用于肝臟，會引起血液中很多的酶，尤其是同工酶的活性發(fā)生改變。槲寄生總堿可通過調(diào)節(jié)同工酶的表達(dá)干預(yù)癌前病變的發(fā)生和發(fā)展。綜上可見，槲寄生總堿可以多途徑的對腫瘤細(xì)胞起到抑制作用。

3 結(jié)語

槲寄生在抗腫瘤作用方面可以發(fā)揮很大的作用，然而我國對于槲寄生的相關(guān)研究卻比較少。也因生化類藥物的開發(fā)基礎(chǔ)薄弱，被限制了應(yīng)用。而槲寄生在我國藥物資源豐富，所以結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)，合理開發(fā)，高效利用槲寄生則成為一項必要的任務(wù)。在日后對槲寄生的研究中，可以著重在以下幾個方面進(jìn)行：①槲寄生有效物質(zhì)的提取分離工藝；②槲寄生的藥理研究；③槲寄生在方劑中的具體應(yīng)用；④槲寄生制劑的制備。我國地大物博，藥物資源豐富，但很多藥物如槲寄生因研究及應(yīng)用受限，并沒有被合理高效的應(yīng)用。但近年來隨著中醫(yī)藥的發(fā)展，對槲寄生化學(xué)成分及藥理作用研究的逐步深入，其多途徑治療疾病的優(yōu)勢逐漸顯現(xiàn)出來，希望隨著醫(yī)學(xué)及其應(yīng)用技術(shù)的不斷進(jìn)步，在保證可持續(xù)發(fā)展的同時，最合理的應(yīng)用這些藥物資源。