減味壽胎丸對甲醛胚胎毒性的干預作用

高新源， 王慧穎

[北京中醫藥大學深圳醫院（龍崗）婦科，廣東深圳 518112]

甲醛已被世界衛生組織煙草控制框架公約（FCTC）列為煙氣優先級管制污染物[1]，它對人類的生殖系統[2-3]、免疫系統[4]、神經系統[5]、循環系統[5]等都有毒害。值得注意的是，大部分裝修材料及新購家具含有甲醛成分，尤其是劣質的裝修材料，其甲醛成分遠遠超過健康標準，且據研究報告顯示室內甲醛殘留時間很長，當它的濃度上升至高峰后會逐漸下降，但可持續殘留3～15年，這就使我國城市室內污染非常嚴重[6-8]。為保障人類生殖健康，防止妊娠缺失及子代缺陷，學者們越來越關注甲醛的生殖毒性[9-11]及治療[12]。清·張錫純所創立的壽胎丸由菟絲子、桑寄生、續斷、阿膠4味中藥組成，具有補腎安胎之功效，臨床療效確切。為進一步探討壽胎丸對甲醛生殖毒性的拮抗作用，本研究觀察了減味壽胎丸對甲醛所致妊娠缺失、胚胎缺陷的干預效果，因維生素C[12]可減少甲醛對體內抗氧化成分的消耗，從而改善胚胎發育毒性，故以其作為陽性對照藥物。現將研究結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 孕鼠的準備 選用12周齡SD大鼠雌性80只、雄性40只，由廣東省醫學實驗動物中心所提供。實驗動物生產許可證號：SCXK（粵）2013-0002；廣東省動物實驗證明號：00180392、00180394；實驗動物質量合格證號：44007200045043、44007200045044。將雌性與雄性12周齡SD大鼠按1∶2或1∶1的比例進行交配，獲得57只孕鼠，隨機分為5組，即陰性對照組（12只）、模型對照組（11只）、維生素C組（11只）、減味壽胎丸低劑量組（11只）、減味壽胎丸高劑量組（12只）。

1.2 藥物及制備 減味壽胎丸組成：鹽菟絲子100 g，桑寄生50 g，續斷片50 g。加水武火煮沸后文火慢煎成灌胃液。按照60 kg成人與300 g大鼠體表面積的劑量換算公式（系數為4.78）換算大鼠給藥劑量。大鼠減味壽胎丸等效劑量為3.19 g·kg-1·d-1，作為本實驗的低劑量；高劑量是低劑量的2倍，為6.38 g·kg-1·d-1。維生素C片，100 mg/片，由廣東恒健制藥有限公司生產，批號：170513。維生素C按照藥品說明書以成人給藥劑量換算大鼠等效劑量為150 mg·kg-1·d-1。

1.3 試劑與儀器 甲醛（西隴科技股份有限公司）。HOPE-MED 8050F/54全身吸入染毒控制儀（天津合普公司）；MIC-800-CH2O便攜式甲醛檢測儀（深圳市逸云天科技有限公司）。

1.4 造模 造模方法采用李詩宇[13]、朱嘉偉[14]等的靜吸式甲醛吸入染毒方式。自妊娠第1天起至妊娠第15天，除陰性對照組外，其余動物置于全身吸入染毒柜中，根據甲醛不同染毒濃度、不同染毒時間預實驗，確定給予110 mg/m3甲醛濃度吸入染毒2 h，每天1次。同時，自妊娠第1天起至妊娠第15天，減味壽胎丸低、高劑量組分別給予減味壽胎丸水煎液（劑量分別為3.19、6.38 g·kg-1·d-1）灌胃，維生素C組給予維生素C溶液（劑量為150 mg·kg-1·d-1）灌胃，模型對照組、陰性對照組給予等體積的純凈水灌胃。均連續15 d。

1.5 觀察指標

1.5.1 胚胎著床情況 孕20 d給予孕鼠過量二氧化碳吸入安樂死，剖宮，記錄活胎數、吸收胎數、死胎數，計算總胎數、活胎率、吸收胎率。公式：總胎數=活胎數+吸收胎數+死胎數；活胎率=活胎數/總胎數；吸收胎率=吸收胎數/總胎數。

1.5.2 胎仔情況 檢查胎仔有無外觀異常，并測量胎仔體質量、身長、尾長。

1.5.3 胎仔畸形情況 檢查胎仔外觀畸形、內臟畸形及骨骼畸形情況。畸形發生率=畸形胎仔數/檢查胎仔數。

1.6 統計方法 應用SPSS 21.0統計軟件進行數據分析。計量數據以均數±標準差(-x±s)表示，計量資料數據方差齊，或數據經轉換后方差齊，采用單因素方差分析，若數據經轉換后方差仍不齊，采用秩和檢驗進行統計分析；計數資料采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 著床情況

2.1.1 活胎情況 模型對照組活胎率較陰性對照組降低，差異有統計學意義（P＜0.01）；各給藥組活胎率較模型對照組升高，差異有統計學意義（P＜0.05）；減味壽胎丸高劑量組孕鼠活胎率與維生素C組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。具體結果見表1。

表1 各組妊娠母鼠孕20 d活胎情況比較Table 1 Comparison of the data about live fetal in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

2.1.2 吸收胎情況 模型對照組孕鼠的吸收胎率較陰性對照組升高，差異有統計學意義（P＜0.01）；各給藥組孕鼠的吸收胎率較模型對照組降低，差異有統計學意義（P＜0.05）；減味壽胎丸高劑量組孕鼠吸收胎率與維生素C組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。具體結果見表2。

2.2 胎仔情況

2.2.1 胎仔體質量 與陰性對照組比較，模型對照組胎仔體質量降低，差異有統計學意義（P＜0.05）；與模型對照組比較，各給藥組胎仔體質量均升高，其中減味壽胎丸低劑量組有統計學差異（P＜0.05），其余則無統計學差異。具體結果見表3。

表2 各組妊娠母鼠孕20 d吸收胎情況比較Table 2 Comparison of the data of absorption embryo in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

表3 各組妊娠母鼠孕20 d剖檢胎仔體質量比較Table 3 Comparison of the fatal body mass in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

2.2.2 胎仔身長、尾長 各組胎仔身長、尾長比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。具體結果見表4。

表4 各組妊娠母鼠孕20 d剖檢胎仔身長、尾長比較Table 4 Comparison of the fatal body length and tail length in the rats with pregnancy for 20 days of various groups （-x±s，l/mm）

2.2.3 胎仔畸形情況

2.2.3.1 外觀畸形 對各組胎仔外觀進行檢查，均未見到任何畸形。

2.2.3.2 胎仔內臟畸形 陰性對照組（86只）、減味壽胎丸高劑量組（93只）均未見內臟畸形胎仔。模型對照組（81只）畸形胎仔1只，發生率1.2%。維生素C組（82只）畸形胎仔2只，發生率2.4%。減味壽胎丸低劑量組（88只）畸形胎仔2只，發生率2.3%。各組胎仔內臟畸形發生率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。具體結果見表5。

表5 各組胎仔內臟畸形檢查結果比較Table 5 Comparison of the data about malformation ofthe fatal viscera in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

2.2.3.3 胎仔骨骼畸形 陰性對照組（96只）均未見骨骼畸形。模型對照組（87只）畸形胎仔14只，發生率16.1%，與陰性對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；維生素C組（88只）畸形胎仔10只，發生率11.4%，與模型對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；減味壽胎丸低劑量組（93只）畸形胎仔5只，發生率5.4%，與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；減味壽胎丸高劑量組（99只）畸形胎仔7只，發生率7.1%，與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。具體結果見表6。

表6 各組胎仔骨骼畸形檢查結果比較Table 6 Comparison of the data about malformation of the fatal skeleton in the rats with pregnancy for 20 days of various groups [n/只（p/%）]

3 討論

本課題組在前期實驗中對壽胎丸進行了復方組成及配伍規律的研究，經藥效驗證篩選出補腎安胎的優選配比方：菟絲子∶桑寄生∶續斷∶阿膠=20∶10∶10∶0，即去阿膠形成本次研究所用的減味壽胎丸。菟絲子為方中君藥，正如《醫學衷中參西錄》所言：“菟絲大能補腎，腎旺自能蔭胎也。”其藥性平和，能滋補肝腎、固沖安胎，是平補之良藥。桑寄生為補益肝腎、養血安胎之要藥，為方中臣藥，其味苦、甘，平，可協君藥補腎填精，固沖安胎，正如《藥性論》中記載所言：“桑寄生能令胎牢固，主懷妊漏血不止。”方中續斷藥性苦辛，微溫，入肝、腎經，為本方佐藥，可助菟絲子、桑寄生補肝腎、固沖任，使胎氣強壯，如《本草疏經》載：“續斷，……為治胎產、續絕傷、療不足、療金瘡、理腰腎之要藥也。”減味壽胎丸中君藥菟絲子、臣藥桑寄生、佐藥續斷三藥相合，能益精填髓，精血同生，腎氣旺盛，胚胎穩固。

胚胎著床是復雜精細的生理過程，其受有害環境的影響非常明顯，是公認的反映環境中有害因素影響的敏感生物標志物，因此，在進行環境保護和質量評價領域，胚胎著床情況是重要檢測指標[15-16]。本研究結果表明，環境中的甲醛通過呼吸而進入體內，可經胎盤屏障進入胎仔，具有胚胎毒性，導致胚胎發育畸形、發育不良甚至是胚胎死亡；而減味壽胎丸及維生素C均可在一定程度上拮抗甲醛對胚胎的毒性，干預甲醛對胎仔的致畸、致死作用，且由于自然界“優勝劣汰”的規律，異常胚胎會被吸收，而減味壽胎丸干預能保證優質胚胎優先發育，促進不良胚胎吸收，減少畸形兒的出現機率。

胚胎毒性還主要表現在胎仔發育水平及發育畸形情況。本研究結果表明，甲醛具有生育毒性，可通過胚胎胎盤轉運，對子代的生理發育產生不良影響，造成胎仔體質量減輕，但對身長及尾長無明顯影響，還可以導致胎仔畸形尤其以致骨骼畸形最為明顯，而減味壽胎丸可拮抗此種毒性，進而增加胎仔體質量，減輕甲醛對胎仔的致畸力，減少胎仔畸形的發生。

綜上所述，減味壽胎丸可拮抗甲醛的生殖毒性，保證優質胚胎優先發育，增加胎仔體質量，減輕甲醛的致畸能力，可為臨床應用和推廣提供依據。