中藥復(fù)方制劑對雞柔嫩艾美耳球蟲的療效試驗(yàn)

王黎霞,曹 允,馬建民,張成昆,張建軍,安 健

(1.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系，北京 房山 102442；2.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 昌平 102206)

雞球蟲病是由原生動(dòng)物門艾美耳屬的球蟲感染所引起的疾病，自1870年，艾美耳首次發(fā)現(xiàn)雞腸道內(nèi)有球蟲寄生以來，球蟲便一直是危害養(yǎng)禽業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一[1-2]。其中柔嫩艾美耳球蟲(Eimeriatenella)主要寄生于盲腸，致病力最強(qiáng)。迄今為止，國內(nèi)外對雞球蟲病的防制主要是依靠藥物，包括化學(xué)和抗生素兩大類藥物，從1936年首次出現(xiàn)專用抗球蟲藥以來，已報(bào)道的抗球蟲藥達(dá)40余種，現(xiàn)今廣泛使用的有20種，但是這些藥物都有易產(chǎn)生耐藥性和藥物殘留的問題[1]。與之相比，中藥則具有價(jià)格低、安全性高且不易產(chǎn)生耐藥性和藥物殘留的特點(diǎn)。中藥組方一般是由多種成份組成，不僅可以殺死球蟲，在臨床上還對球蟲病進(jìn)行治療，即治標(biāo)；同時(shí)還可以調(diào)節(jié)機(jī)體臟腑機(jī)能，提高免疫力，從根本上避免了雞球蟲病發(fā)生的可能，即治本。因此，目前全世界范圍內(nèi)都對中藥治療雞球蟲病產(chǎn)生了極大的興趣，已有多次研究證明，中藥治療雞球蟲病是有療效的。本試驗(yàn)從中獸醫(yī)理論的角度，根據(jù)柔嫩艾美耳球蟲病的起因及癥狀設(shè)計(jì)了抗球蟲中藥組方進(jìn)行療效試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)蟲株 BJ4株柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊，分自北京昌平養(yǎng)雞場，由北京農(nóng)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 1日齡小公雞，購自北京房山某養(yǎng)雞場，飼養(yǎng)于無球蟲雞籠中，自由采食，由華都飼料有限公司提供的雛雞飼料301，未添加抗球蟲藥及其他抗生素。

1.3 試驗(yàn)藥品

1.3.1 對照藥物 磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉(克球立得)，購自廣西北流市天龍獸藥有限公司，生產(chǎn)文號：獸藥字(2008)200201628。

1.3.2 中藥 確定由青蒿、鉤藤、黃芩、黃柏、黃連、甘草、黃芪、酒大黃、黑丑等組成基本方，然后在基本方的基礎(chǔ)上分別添加溫?zé)崴幦夤稹⒏山粴⑾x藥使君子、百部；利水藥車前子；化痰藥皂角；活血化瘀藥丹皮、丹參；止血藥白芨、地榆炭；理氣藥陳皮；滋陰藥酒黃精等藥物使其相互配伍，組成7個(gè)組方。大棗分別掰開下藥，黑丑用打藥機(jī)粉碎后下藥，每組藥分別用專用中藥壺煎煮，開鍋后繼續(xù)煎煮45 min，煎煮后過濾藥渣，最后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀制成1.00 g/L的母液，4 ℃恒溫保存?zhèn)溆茫恐兴幘徸员本┩侍盟幍辍?/p>

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法 將試驗(yàn)雞于12日齡逐只空腹稱重，淘汰弱雛及體重過大者，選取88只體重均勻的雞編號，隨機(jī)分為10組，每組8只。第1-7組為中藥飲水抗球蟲組，分組后每只雞感染4×104個(gè)雞E.tenella孢子化卵囊，并于感染當(dāng)日開始按20 g/L的比例飲水。第8組為克球立得(磺胺氯吡嗪鈉可溶性粉)抗球蟲對照組，分組后每只雞感染4×104個(gè)雞E.tenella孢子化卵囊，并于感染當(dāng)日開始按雙倍治療量0.5 g/L的比例飲水。第9組為攻毒對照組，分組后每只雞感染4×104個(gè)雞E.tenella孢子化卵囊。第10組為空白對照組。

2 抗球蟲藥效的確定

攻蟲后每天觀察臨床癥狀、糞便和飲食等，第8天，雞只稱重記錄，捕殺，剖開腹腔取盲腸，記錄盲腸病變，將盲腸勻漿，計(jì)數(shù)盲腸內(nèi)和5-8 d糞便卵囊數(shù)。統(tǒng)計(jì)存活率、相對增重率、病變值、卵囊值等，計(jì)算抗球蟲指數(shù)[18]。

表1 中藥方劑原料構(gòu)成

注：大棗單位為顆，每顆重量約為4 g左右；其余單位為g

2.1 相對增重率(%) 相對增重率=感染不給藥組或用藥組的平均增重÷空白對照雞的平均增重×100%，空白對照組的相對增重率為100%。

2.2 存活率(%) 存活率=存活雞數(shù)÷試驗(yàn)雞數(shù)×100%。

2.3 病變記分及病變值 Johnson Jand Reid (1970)[3]制定的標(biāo)準(zhǔn)對盲腸病變進(jìn)行評定記分。病變值=組內(nèi)平均病變記分×10。具體方法為：兩側(cè)盲腸病變不一致時(shí)，以嚴(yán)重的一側(cè)為準(zhǔn)。

0分，無肉眼病變；+1分，盲腸壁有很少量散在的瘀血點(diǎn)，腸壁不增厚，內(nèi)容物正常；+2分，病變數(shù)量較多，盲腸內(nèi)容物明顯帶血，盲腸壁增厚，內(nèi)容物正常；+3分，盲腸內(nèi)容物多量血液或有盲腸芯(血凝塊或灰白色干酪樣的香蕉型塊狀物)，盲腸壁增厚明顯，盲腸中糞便含量少；+4分，因充滿大量血液或腸芯而盲腸腫大，腸芯中含有糞渣或不含糞渣。死亡雞只也記分。

病變值=每組平均病變記分×10。

2.4 卵囊值 用McMaster的方法計(jì)數(shù)卵囊數(shù)，算出卵囊比數(shù)，按角田清方法換算卵囊值，卵囊比數(shù)與卵囊值的關(guān)系：卵囊比數(shù)分別為1%以下、2%～25%、26%～50%、51%～75%和76%～100%時(shí)，卵囊值分別為0、5、10、20和40。

2.5 判定標(biāo)準(zhǔn) 抗球蟲指數(shù)(ACI)根據(jù)美國墨克(Merck)公司計(jì)算方法。ACI=(相對增重率+存活率)-(病變值+卵囊值)。藥效判定標(biāo)準(zhǔn)為：ACI在180以上者為高效：180～160者為中效；160～120者為低效；120以下者為無效。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 臨床表現(xiàn) 攻毒后3 d，各組雞采食、飲水、排便及精神狀態(tài)未見異常，第4天開始，攻蟲各組雞都有食欲減退，精神沉郁、羽毛蓬亂的現(xiàn)像，第1組和第9組有拉稀現(xiàn)象，第5-6天，各組雞都不同程度出現(xiàn)癥狀，雞精神萎頓，兩腳麻痹，雞冠和可視黏膜蒼白，逐漸消瘦，糞呈水樣，并帶有血液，第1、9組最為嚴(yán)重，第4組較輕而且血便量也很少。 除第4組外，每組均有不同程度的死雞，其中第1組最為嚴(yán)重。且第5天最為嚴(yán)重，為排血便高峰期，排出大量鮮紅色血液，耐過雞7 d后逐漸穩(wěn)定。

3.2 抗球蟲藥效結(jié)果 結(jié)果表明：第4組存活率為100%，為感染組中唯一沒有死亡的組；相對增重率96%，為感染組中最高；病變值21，為感染組中最低；ACI值為165，為感染組中最高。第1組其ACI值為58在給藥組中是最低的，存活率為36%，也是最低。

表2 抗球蟲藥效結(jié)果

4 討論

我國中獸醫(yī)理論認(rèn)為，雞球蟲病屬于蟲積范疇，臨床辨證雞球蟲病為濕熱內(nèi)蘊(yùn)，雖病勢較其他細(xì)菌或病毒病緩慢，但蟲邪寄生于體內(nèi)，消耗了雞體的陰液，致使脾胃受損，耗血傷精，“陰虛則內(nèi)熱”，因此，中獸醫(yī)辯證屬虛熱證。中獸醫(yī)理論中，脾主運(yùn)化水濕，脾虛則健運(yùn)失職，不能行津液，造成聚而成濕。因此，雞球蟲病在臨床上表現(xiàn)為精神倦怠、行走無力、形體消瘦、腹瀉或下痢膿血等癥狀。中獸醫(yī)治療的基本法則是治本、治標(biāo)、扶正祛邪相結(jié)合，因此，在球蟲病的中獸醫(yī)治療上采取殺球蟲、補(bǔ)虛益氣、增強(qiáng)機(jī)體抵抗力的原則。

中藥常山、青蒿、使君子等為傳統(tǒng)的驅(qū)蟲藥；苦參、白頭翁、蒲公英等可清熱燥濕、涼血解毒；仙鶴草、地榆、白芨等具有止血功能；當(dāng)歸、熟地、黨參、黃芪等具有補(bǔ)益氣血的功能，近年來人們常以這些藥物進(jìn)行配伍進(jìn)行雞球蟲病的防治研究[2，4-9]。

本試驗(yàn)以中獸醫(yī)理論為基礎(chǔ)，按照中獸醫(yī)治療原則確定了基本方，其中的青蒿和鉤藤都具有明顯抗球蟲的作用，青蒿及其提取物對球蟲卵囊孢子化有抑制作用，而鉤藤含有鉤藤堿，對球蟲裂殖子有抑殺作用[9-14]。馬海利2001年研究結(jié)果就表明，利用含有青蒿的中藥在體外對柔嫩艾美球蟲未孢子化卵囊進(jìn)行處理，其孢子化過程明顯受到抑制，且隨著藥物作用時(shí)間延長，卵囊孢子化率降低：經(jīng)處理后的孢子化卵囊再感染雞，臨床上無明顯異常,與空白對照組差異不明顯[15]。黃連、黃柏、黃芩都有清熱燥濕的作用，解決了球蟲病所引起的濕熱內(nèi)蘊(yùn)的問題；黃芪具有補(bǔ)虛的作用，由于球蟲病引起脾胃受損，且黃連、黃柏、黃芩藥性苦寒傷脾胃，故而用黃芪補(bǔ)虛以起到調(diào)和作用；酒大黃具有瀉下攻積、清熱瀉火、涼血活血等作用；黑丑也具有排痰瀉下的作用，與大黃一起使用可以起到相輔相成、攻下排蟲積作用；甘草味甘，性平，具有補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥的功效，是中藥的組方中常見的使藥，在本基本方中主要起調(diào)和諸藥的功效。通過本基礎(chǔ)方，可以達(dá)到治療球蟲病、補(bǔ)益機(jī)體的作用。

為了使中藥方劑能夠具有更好的治療球蟲病，提高機(jī)體生產(chǎn)性能，在基本方的基礎(chǔ)上，我們又添加了不同藥性的藥物以達(dá)到更好的效果。如化痰藥和活血化瘀藥物，在以往的文獻(xiàn)和報(bào)導(dǎo)中，雖然運(yùn)用活血化瘀的思路在球蟲病上有一定的作用，但化痰藥物卻很少有報(bào)導(dǎo)。皂角作為化痰藥物的代表，其主要含皂莢苷、鞣質(zhì)、皂角皂苷等成分[16]，皂角主要作用有化痰祛痰，開竅通閉，殺蟲散結(jié)等作用。王占彬等[17]用皂角刺提取物觀察對肉仔雞免疫功能的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其低劑量組可顯著提高肉仔雞T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)免疫功能和提高生長率，但高劑量組則有相反的作用。這說明，中藥的使用劑量在對球蟲病的治療效果上也存在明顯的差異。本試驗(yàn)借鑒這一研究結(jié)果，使用皂角的用量很低，同時(shí)與大棗相配伍使用，能夠更好的發(fā)揮其作用。丹皮有清熱涼血，活血散瘀功能；丹參則有活血通經(jīng)、排膿生肌、生新血的作用，這2種藥物均能緩解球蟲病的臨床癥狀，其與基本方聯(lián)合使用，可以起到很好的抗球蟲效果。

在添加了溫中散寒藥肉桂和干姜的第1組，其ACI為58，明顯低于其他各組，這種結(jié)果與楊再昌[18]進(jìn)行的中藥對比試驗(yàn)結(jié)果相同，也證實(shí)了中獸醫(yī)認(rèn)為球蟲病為濕熱的論證；第5組在基本方的基礎(chǔ)上，添加滋陰藥酒黃精，理氣止血藥白芨、陳皮，清熱化痰的竹茹，其ACI為68，相對增重率為21%，為所有感染組最低，基本無抗球蟲作用；添加了竹茹的第2、3、7組，其治療效果也不如未添加竹茹的第4組，其增重率較低，死亡率和病變值較高，這可能與竹茹不適用于脾虛證有關(guān)，即使這些試驗(yàn)組中的雞只在本次感染中沒有死亡，其今后的生產(chǎn)性能也會(huì)大大下降。

在本試驗(yàn)中，第4組在基礎(chǔ)方中添加了皂角、大棗、丹皮、丹參、陳皮后抗球蟲效果較好，存活率為100%，這保證了雞群數(shù)量上的不損失，相對增重率96%，與未感染組相差不大，這顯示了在試驗(yàn)雞感染球蟲后，其生產(chǎn)性能受到的影響較小，病變值最小，表示雞體所受到的損傷小，其長期生產(chǎn)性能也不會(huì)受到較大影響。

通過本試驗(yàn)表明，中藥治療雞球蟲病是一個(gè)切實(shí)可行的方法，只是在治療效果上還需要進(jìn)行試驗(yàn)，確定更好的組方。