連翹木脂素類成分的色譜學研究進展

聶承冬 李攀越 江園園 周文潔 谷東皓 閻新佳 溫 靜*

（1、哈爾濱商業大學 藥學院，黑龍江 哈爾濱150076 2、黑龍江省預防與治療老年病藥物研究重點實驗室，黑龍江 哈爾濱150076）

連 翹（Forsythia suspensa （Thunb.） Vahl） 為 木 犀 科（Oleaceae）連翹屬（Forsythia）植物，是臨床常用中藥，具有清熱解毒，消腫散結之功效，常用于風熱感冒、溫病初起、溫熱入營、熱淋尿閉、癰疽、瘰疬、乳癰、丹毒和腫毒等癥[1-3]。目前，從該植物中，已分離出的木脂素有46 種以上[4]。木脂素是連翹的特征性物質，具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗病毒和抗過敏等作用。連翹中木脂素的分離檢測方法有薄層色譜法（TLC），高效液相色譜法（HPLC）等，本文對這些連翹的木脂素色譜學研究方法進行了總結，為后人進一步研究連翹木脂素提供更好的科學依據。

1 薄層色譜法（TLC）

1.1 TLC 分離木脂素的方法

在TLC 中，是在覆蓋有固定相薄層的板上進行分離的，其中流動相通過毛細管力沿板移動。通常，TLC 技術僅用于分離和檢測植物提取物中低或非揮發性成分。TLC 板由玻璃或氧化鋁制成，并覆蓋有固定相，例如硅膠，或與十八烷基，辛基，苯基，聯苯基，硝?；蛭灞交嚷撚谩LC 可用于NP，RP，HILIC，OPTLC，HPTLC 色譜系統[7]?？梢允褂玫榷认疵?，逐步洗脫或梯度洗脫以及一維或二維分離模式進行分離。1D-TLC 使用常規的流動相進行分離，適用于分析具有極性相差較大的相對非復雜樣品。因此，可能不足以分離復雜的植物提取物或具有類似特性的化合物的混合物。對于此類應用，使用正交系統的2D-TLC 分離技術是有利的，因為可以對每個維度應用不同的色譜特性和保留機制。1D-TLC 的分離效率可通過逐步梯度洗脫來提高，在該梯度洗脫中，相繼應用洗脫效率不斷提高的流動相，但都是僅在單個方向上進行分離。在分離中值得注意的是，在分離步驟之間更改流動相以除去殘留的吸附溶劑之前，都必須先干燥2D 和1DTLC 板[5]。盡管TLC 最近被用于各種植物中分離木脂素化合物，但目前從連翹中分離木脂素的專用的TLC 方法還有待進一步研究。

1.2 TLC 檢測木脂素的方法

TLC 檢測木脂素的方法以木脂素Schizandrin A，Schizandrin B 為例。張敏等人對Schizandrin A，Schizandrin B 等成分進行了薄層色譜鑒別[6]。實驗種分別用了四種展開劑：正己烷- 乙酸乙醋（10：1）、環己烷- 乙酸乙醋（10：1.5）、正己烷- 乙酸乙醋（7.5：2.5）、正己烷- 乙酸乙醋（8.5：1.5），比較結果顯示 采用正己烷-乙酸乙醋（10：1）為展開劑效果較為滿意。在檢測分離相關木脂素時可以已此為參考。還可以通過使用HPTLC 或OPTLC 方法來改善TLC 的選擇性，這可以縮短分離時間，并可以改善峰形，使分離出的化合物分離度更好[7]。

1.3 TLC 指紋鑒別木脂素

指紋分析是經過WHO 批準的工具，可用于質量評估和標準化用于天然藥物和中草藥制劑生產的植物材料。色譜指紋圖譜用于比較同一物種不同品種，植物生長不同階段的植物材料，或評估在不同地理或大氣條件等條件下生長的影響。TLC 指紋法可用于確定：樣品之間的相似性和差異，樣品完整性或存在特征成分（選定標記）。它經常與先進的統計方法和化學計量學分析方法相結合。

2 高效液相色譜法（HPLC）

2.1 HPLC 分離木脂素

HPLC 裝置可以與根據分離的化合物的不同物理化學性質操作的各種檢測器聯合使用，如UV-VIS 檢測器等。但是，由于木脂素可能與提取物其他成分的光譜重疊，所以部分檢測器可能受限制。所以基于MS 的檢測方法效果更好些。MS 光譜分析能夠對木脂素化合物進行初步檢測，結構分析和鑒定。用于分離連翹提取物的現代分析方法如LC-MS 系統等，可用于進行提取物的分析和鑒定。LC-MS 技術常用于木脂素的檢測和表征，例如通過多種離子化技術（EI，CI，FAB-MS 和ESI-MS / MS 等）獲得的其碎片離子以及其特征結構，來證明其存在木脂素。

2.2 HPLC 中木脂素檢測和鑒別的方法

HPLC 法分離木脂素，以梁軍等人，使用HPLC-FLD 分離為例[8]。HPLC-FLD 色譜柱為 采用色譜柱Dima C18（4.6mm×250mm，5μm），流動相甲醇（A）- 水（B）梯度洗脫系統，流速1.0mL/min。木脂素類成分熒光檢測激發波長為270nm，發射波長為340nm；咖啡酸苯乙醇苷類成分激發波長為320nm，發射波長為460nm。還有NP-HILIC 與RP-HPLC 等多種聯用方法來分離木脂素。在檢測分離相關木脂素時可以已此為參考。

3 結論

連翹的富含木脂素的提取物是非常復雜的化合物混合物。由于木脂素的結構相似性和極性不同，使得通過LC 法進行分離成為一項艱巨的任務。此外，由于提取分離時，提取物中存在的其他化合物也表現出相似的極性，對木脂素化合物的分離，鑒定和測定產生了一定干擾。TLC 是一種用于初始選擇時，選擇分離條件，控制檢測萃取、浸出效率，以及初步評估第一步分離后各餾分化學成分定性定量的方法。研究應用二維或多階段TLC 程序，在木脂素研究中是十分有利的，最終可以通過單次分離步驟就能分離開木脂素化合物和其他化合物。目前，在木脂素分析方向的最佳方法是HPLC 或UPLC 等相關方法，因為這種方法具有更高的效率和分辨率。由于木脂素化合物的特征和復雜的核心結構，建議結合使用基于碎片離子性質的鑒定方法（MS 等）和立體構型測定方法（如CD 譜測定，IM-MS 測定）相結合來精確測定這些化合物。目前，還需要進一步的實驗研究來確定連翹中其他含有木脂素的部位（如根、根莖等部分）的最佳分離條件。在開發提取分離木脂素新方法中，環境污染，提取效率低，有機試劑殘留等問題需重點考慮，如何有效的進行工業制備規模的純木脂素化合物的分離也需進一步研究開發。