基于UHPLC-Q-Exactive-MS技術的豬牙皂化學成分分析

韓君

摘要 [目的]定性分析豬牙皂的化學成分組成。[方法]采用UHPLC-Q-Exactive-MS技術，對比相關文獻，通過Xcalibur軟件分析鑒定豬牙皂中化學成分。[結果]鑒定了豬牙皂中17個化合物，包括3個酚類成分、7個黃酮類成分、7個皂苷類成分。[結論]該方法專屬性好、結果可靠，為豬牙皂質量控制及藥效物質基礎提供參考。

關鍵詞 豬牙皂;化學成分;UHPLC-Q-Exactive-MS;皂苷類

中圖分類號 R284.1文獻標識碼 A文章編號 0517-6611（2020）24-0201-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.24.057

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Chemical Composition Analysis of Gleditsiae Fructus Abnormalis Based on UHPLCQExactiveMS Technology

HAN Jun

（National and Local Joint Engineering Research Center for Key Technology of Chinses Medicinal Composition Granules，Beijing Tcmages Pharmaceutical Co.， Ltd.， Beijing 101301）

Abstract [Objective] Qualitatively analyzed the chemical compositions of gleditsiae fructus abnormalis. [Method]The chemical compositions of gleditsiae fructus abnormalis were analyzed and authenticated by using the UHPLCQExactiveMS technology and comparing relevant documents through the Xcalibur software. [Result]The 17 chemicals were authenticated in gleditsiae fructus abnormalis， including 3 phenolic compounds， 7 flavonoids and 7 saponins. [Conclusion]The good exclusiveness and reliable result of this method provided reference to the quality control and efficacious material basis of gleditsiae fructus abnormalis.

Key words Gleditsiae fructus abnormalis;Chemical composition;UHPLCQExactiveMS;Saponins

豬牙皂為豆科植物皂莢（Gleditsia sinensis Lam.）的干燥不育果實[1]，被《中華人民共和國藥典》2020年版收載為常用中藥之一，但未見控制其藥材的指標性成分，文獻中對其化學成分分析主要以總皂苷以及三萜皂苷的苷元齊墩果酸和刺囊酸為主[2-5]，全面化學成分分析鮮見報道。目前，對豬牙皂研究主要為三萜皂苷、黃酮和木脂素[6-8]的提取分離與結構鑒定。該研究用UHPLC-Q-Exactive-MS技術對豬牙皂化學成分進行鑒定，以期為質量控制指標成分的選擇和藥效物質基礎提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

四極桿-靜電場軌道肼高分辨質譜儀串聯Ultimate 3000型超高效液相色譜系統（美國賽默飛世爾科技公司）;BT25S型電子天平（Sartorius公司）;KQ-300DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

甲醇（國藥集團化學試劑有限公司，批號為20190910）;色譜級乙腈（默克股份兩合公司，批號為JB097430）;豬牙皂對照藥材（上海源葉生物有限公司，批號為Y19N10H103559）。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件。

ZORBAX Eclipse XDB-C18 色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）;柱溫為30 ℃;流動相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～15 min，10%～40%A;15～25 min，40%～80%A;25～30 min，80%A;30～40 min，80%～10%A）;流速為0.2 mL/min;進樣量為1 μL。

1.2.2 質譜條件。

采用電噴霧離子源（ESI），毛細管電壓3 200 V，毛細管溫度300 ℃，離子源溫度350 ℃，質譜一級采集范圍m/z 146～2 200，二級采集范圍m/z 50～3 000，S-Lens RF Level 50。

1.2.3 供試品溶液的制備。

取豬牙皂對照藥材約22.55 mg，置50 mL三角瓶中，加25%甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，即得。

2 結果與分析

2.1 UHPLC-Q-Exactive-MS分析

取“1.2.3”項下供試品溶液，按“1.2.1”和“1.2.2”色譜質譜條件進行分析，分別得到負離子模式下豬牙皂的總離子流見圖1。

2.2 結構鑒定

理論值通過質量計算器獲得，根據測定值與理論值二者偏差小于0.005‰，氮律等原則，結合Xcalibur軟件的相對分子質量數，質譜一級、二級碎片信息，相關參考文獻，共鑒定出17種化合物，包括3個酚類成分、7個黃酮類成分、7個皂苷類成分。被鑒定的化學成分的分子式、二級碎片離子、結構類型等信息見表1。

2.3 化合物的質譜裂解特征分析

2.3.1 黃酮類成分的鑒定。

該研究共分析鑒定了7個黃酮類化合物。以化合物5為例，ESI-模式下準分子離子為m/z 609.185 1[M-H]-，經過碰撞脫去一分子鼠李糖形成碎片離子m/z 463.966 0[M-H-C6H10O4]-，再脫去一分子葡萄糖形成碎片離子m/z 301.071 9[M-H-C6H10O5- C6H10O4]-，丟失B環和C環并發生重排后形成碎片離子m/z 151.002 7。根據文獻[13]報道和裂解碎片特征判斷，該化合物可能為新橙皮苷，該化合物的MS/MS圖見圖2，可能的裂解方式見圖3。

2.3.2 皂苷類成分的鑒定。

皂苷類化合物是豬牙皂中的特征性成分，該研究共分析鑒別了7個皂苷類化合物。以化合物16為例，ESI-模式下準分子離子為m/z 1 635.778 7[M-H]-，脫去一分子H2O形成碎片離子m/z 1 617.770 3[M-H-H2O]-，再脫去C10H16O3形成碎片離子m/z 1 453.686 2[M-H-C10H16O3-H2O]-，再脫去一分子H2O形成碎片m/z 1 435.673 5[M-H-2H2O-C10H16O3]-，再脫去C22H35O16形成碎片離子m/z 881.490 6[M-H-C22H35O16-2H2O-C10H16O3]-，再脫去C16H27O13形成碎片離子m/z 455.353 8[M-H-C16H27O13- C22H35O16-2H2O-C10H16O3]-。

根據文獻[5]報道和裂解碎片特征，判斷該化合物可能為皂莢皂苷B，該化合物的MS/MS圖見圖4，可能的裂解方式見圖5。

3 結論

采用UHPLC-Q-Exactive-MS技術，利用質譜的高分辨、高靈敏度等特點，對豬牙皂中化學成分進行研究，鑒定出17個化合物，明確了豬牙皂中黃酮類以及皂苷類成分的質譜裂解規律，為其藥效物質基礎及質量控制指標成分的選擇提供了數據支撐。

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