尿IL-18、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C在窒息新生兒急性腎損傷早期診斷中的價(jià)值

楊 雯，幸黔魯，謝 穎 （. 貴州省遵義市婦幼保健院，貴州遵義 563000；2. 貴州省遵義醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院兒科，貴州遵義 563000）

急性腎損傷(AKI)是一種腎功能在短時(shí)間內(nèi)急劇下降的臨床危急重癥，新生兒因圍產(chǎn)期發(fā)生窒息、缺氧、藥物中毒等導(dǎo)致多器官功能衰竭，易患AKI，其在新生兒及兒童中的發(fā)病率及致死率均較高(其中發(fā)病率為10%～61%)[1]。臨床上為改善窒息新生兒AKI的預(yù)后情況，尋找某些生物標(biāo)志物來(lái)應(yīng)用于窒息新生兒AKI早期診斷具有重要意義。近年來(lái)，探討成人尿液中白細(xì)胞介素-18(IL-18)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(Cys-C)與AKI之間的聯(lián)系較多[2]，但I(xiàn)L-18、Cys-C在窒息新生兒AKI早期診斷中的價(jià)值研究鮮有報(bào)道。本文通過(guò)檢測(cè)窒息新生兒尿液樣本中的IL-18、Cys-C的水平，探討其對(duì)窒息新生兒AKI早期診斷的價(jià)值。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年1月－2019年2月出生后被我院重癥監(jiān)護(hù)病房收治的足月窒息新生患兒65例(參考有關(guān)窒息診斷標(biāo)準(zhǔn)將其分為輕度窒息38例、重度窒息27例)作為窒息組。選擇同期本院出生健康正常的足月新生兒65例(均經(jīng)超聲檢查無(wú)先天性泌尿系統(tǒng)疾病)為對(duì)照組。窒息組與對(duì)照組新生兒的性別、胎齡、日齡及出生時(shí)身體質(zhì)量等基礎(chǔ)資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性(詳見表1)。研究期間共納入65例入選的足月窒息新生患兒在1周內(nèi)發(fā)生急性腎損傷(AKI)共有42例，為AKI組。窒息新生兒AKI診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]：(1)新生兒48 h內(nèi)血清肌酐(Scr)值升高≥26.5 μmol/L(≥0.3 mg/L)；(2)前7 d內(nèi)經(jīng)推測(cè)或經(jīng)明確后新生兒出現(xiàn)腎損害，Scr升高至≥1.5倍基礎(chǔ)數(shù)值；(3)新生兒尿量<0.5 mL/(kg·h)且持續(xù)6 h。本研究項(xiàng)目經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)，且參與本研究中的新生患兒及健康新生兒家長(zhǎng)知情同意本項(xiàng)目并簽署知情同意書。

1.2 方法

標(biāo)本采集：分別采集所有新生兒6、24、48 h的新鮮尿液，每次5 mL并按組標(biāo)記好，離心5 min(轉(zhuǎn)速為1 500 r/min)，置于－80 ℃冰箱保存待測(cè)IL-18、Cys-C水平。此外采集新生兒6、24、48 h的靜脈血2 mL，采集兩份，以5 000 r/min離心5 min置于－80 ℃冰箱保存待測(cè)，其中一份用于檢測(cè)血清Cys-C水平，另一份用于檢測(cè)血尿素氮(BUN)、Scr水平。

檢測(cè)方法：尿液樣本IL-18、Cys-C水平采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)(eBiosicience BMS 267/2試劑盒購(gòu)自?shī)W地利 Vienna公司)；采用全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào)：日本 Hitachi 7600 型全自動(dòng)生化分析儀)檢測(cè)BUN、Scr；上述指標(biāo)檢測(cè)操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

新生兒急性生理學(xué)(SNAP)評(píng)分：所有研究對(duì)象在入院24 h內(nèi)予以SNAP評(píng)分。其基于患兒生命體征、血生化指標(biāo)、血?dú)庵笜?biāo)及有無(wú)窒息或驚厥等28個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行評(píng)分，使用入院當(dāng)天相關(guān)指標(biāo)中最差值計(jì)算結(jié)果。SNAP分值越高，表示病情越嚴(yán)重。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)采集數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較；計(jì)數(shù)資料用百分比[n(%)]表示，采用卡方檢驗(yàn)行組間比較。應(yīng)用Logistic回歸分析法評(píng)價(jià)校正混雜因素后尿IL-18及Cys-C水平與窒息新生兒AKI的相關(guān)性；應(yīng)用受試者工作特征曲線(ROC曲線)及曲線下面積(AUC)評(píng)價(jià)有關(guān)指標(biāo)對(duì)AKI的早期診斷預(yù)測(cè)價(jià)值。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 對(duì)照組和窒息組患兒基礎(chǔ)資料的比較

2 結(jié)果

2.1 新生兒不同時(shí)間段尿液中IL-18和Cys-C水平

窒息組新生兒出生后6、24、48 h的尿液標(biāo)本中IL-18、Cys-C水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，詳見表2。

2.2 新生兒出生后24 h尿液標(biāo)本中IL-18、Cys-C水平與血液Cys-C、Scr、BUN水平

重度窒息組、輕度窒息組、對(duì)照組的新生兒出生后24 h尿液標(biāo)本中IL-18、Cys-C水平及血液Scr、BUN、Cys-C水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或0.05)，詳見表3。

表2 對(duì)照組和窒息組不同時(shí)間段尿液標(biāo)本中IL-18、Cys-C水平的比較 (±s，n=65)

表2 對(duì)照組和窒息組不同時(shí)間段尿液標(biāo)本中IL-18、Cys-C水平的比較 (±s，n=65)

與對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)比較：aP<0.01

IL-18/(ng/L)Cys-C/(mg/L)組別對(duì)照組6 h 24 h 48 h窒息組6 h 24 h 48 h 1.56±0.29 1.53±0.35 1.49±0.66 0.02±0.04 0.04±0.11 0.04±0.26 44.63±8.63a0.48±0.26a49.05±8.87a0.53±0.47a51.04±7.17a0.58±0.52a

表3 各組新生兒生后24 h尿IL-18、Cys-C水平與血液Cys-C、Scr、BUN水平的比較(±s)

表3 各組新生兒生后24 h尿IL-18、Cys-C水平與血液Cys-C、Scr、BUN水平的比較(±s)

與對(duì)照組比較：aP<0.05，bP<0.01；與重度窒息組比較：cP<0.05，dP<0.05

組別對(duì)照組輕度窒息組重度窒息組n 65 38 27尿IL-18/(ng/L)1.53±0.35尿Cys-C/(mg/L)0.04±0.11 37.58±2.71a0.43±0.27b血液Cys-C/(mg/L)1.55±0.38血液Scr/(μmol/L)75.35±17.62 76.17±23.82 57.72±7.84ac0.60±0.25bd血液BUN/(mmol/L)4.35±1.87 4.79±2.462.27±0.49b117.47±29.76ac9.14±2.45ac2.87±0.7bd

2.3 對(duì)照組和AKI組患兒各項(xiàng)資料的比較

AKI組患兒的胎齡、出生時(shí)身體質(zhì)量與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而Apgar評(píng)分明顯低于對(duì)照組，尿Cys-C、IL-18、MA、α1-MG水平及SNAP評(píng)分均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或0.05)，詳見表4。

表4 對(duì)照組和AKI組患兒各項(xiàng)資料的比較

2.4 預(yù)測(cè)AKI早期指標(biāo)的多因素分析

比較對(duì)照組和AKI組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，在校正胎齡、日齡、出生時(shí)身體質(zhì)量、尿MA、Apgar評(píng)分及α1-MG水平等因素后，SNAP評(píng)分與窒息新生兒AKI不相關(guān)，但尿液標(biāo)本中IL-18、Cys-C水平與窒息新生兒AKI明顯相關(guān)，詳見表5。

表5 各個(gè)指標(biāo)與AKI的相關(guān)性

2.5 尿IL-18和Cys-C預(yù)測(cè)窒息新生兒AKI診斷價(jià)值

尿IL-18預(yù)測(cè)窒息新生兒AKI的AUC值為0.691(95% CI 0.688～0.871，P=0.015)，特異度為68.16%、敏感度為65.73%；Cys-C預(yù)測(cè)窒息新生兒AKI的AUC值為0.898(95% CI 0.789～0.939，P<0.01)，特異度為82.41%、敏感度為87.26%，詳見表6、圖1。

表6 尿IL-18和Cys-C預(yù)測(cè)窒息新生兒AKI的AUC值

3 討論

AKI是導(dǎo)致醫(yī)院圍產(chǎn)新生兒致殘率與病死率的重要因素，治療AKI的關(guān)鍵則在于臨床快捷、經(jīng)濟(jì)、敏感的診斷方式。此前臨床評(píng)價(jià)窒息新生兒常用的指標(biāo)為Scr，因其易受影響、靈敏度差、性質(zhì)不穩(wěn)定等缺點(diǎn)嚴(yán)重阻礙其在臨床診斷上的應(yīng)用[4]；同時(shí)臨床上也亟需一些可信的指標(biāo)用于該病早期診斷，便于醫(yī)生及時(shí)展開治療，有效改善患者預(yù)后，從而降低患者病死率。近些年來(lái)，有研究表明成人尿液中IL-18、Cys-C與AKI之間的聯(lián)系緊密，IL-18、Cys-C表現(xiàn)出很好的特異性與靈敏度[5-6]，但I(xiàn)L-18、Cys-C在窒息新生兒AKI早期診斷中的價(jià)值研究鮮有報(bào)道。因此本文就IL-18、Cys-C在窒息新生兒AKI早期診斷價(jià)值展開研究。

圖1 尿IL-18和Cys-C檢測(cè)ROC曲線

IL-18是近年來(lái)研究較熱的一種促炎細(xì)胞因子，主要由近端腎小管中的單核吞噬細(xì)胞生成，歸類于IL-1大家族[7]；有研究表明IL-18在早期AKI患者尿液標(biāo)本中極易檢測(cè)出，而當(dāng)AKI發(fā)生后，IL-18水平呈現(xiàn)出明顯增高趨勢(shì)，AKI在刺激IL-4介導(dǎo)的機(jī)體炎癥反應(yīng)和激發(fā)FOX-O1誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的過(guò)程中發(fā)揮重要作用[8]，其與機(jī)體炎癥反應(yīng)、腎小管增生、氧化應(yīng)激及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有重要聯(lián)系[9]。Cys-C是一種有核細(xì)胞分泌生成的酶抑制劑，其具有不受年齡、藥物、感染等因素影響的特點(diǎn)，僅與腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR)有關(guān)，當(dāng)GFR輕微下降變化均可影響Cys-C水平改變[10-11]；多項(xiàng)研究表明，Cys-C可作重癥患者AKI診斷的優(yōu)良指標(biāo)[12]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，窒息組新生兒出生后6、24、48 h的尿液標(biāo)本中IL-18、Cys-C水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，且尿IL-18、Cys-C水平與血清Scr、BUN呈正相關(guān)，表明尿IL-18、Cys-C可用于窒息新生兒AKI早期診斷的生物學(xué)指標(biāo)。通過(guò)Logistic回歸分析，排除某些混雜因素后，發(fā)現(xiàn)尿IL-18及Cys-C水平與窒息新生兒AKI有明顯相關(guān)性。通過(guò)患者工作特征曲線分析可得，尿IL-18、Cys-C的AUC(0.691和0.898)較高，特異度和敏感度都較高，充分顯示出尿IL-18、Cys-C在預(yù)測(cè)窒息新生兒AKI有較高的精確性，可用于其早期診斷。

綜上所述，尿IL-18、Cys-C可作為窒息新生兒AKI早期診斷評(píng)估的優(yōu)良生物學(xué)指標(biāo)，易于臨床檢測(cè)與應(yīng)用。因本研究樣本量較少，仍需要更進(jìn)一步的探索研究，需要更多樣本研究來(lái)證實(shí)其應(yīng)用實(shí)用性；同時(shí)，需要深入研究這些生物學(xué)標(biāo)志物在AKI中的分子病理機(jī)制，探索出針對(duì)性解決方法，便于有效治療早期腎損傷。