液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)錫林浩特地區(qū)馬奶中泛酸含量的測(cè)定

王亞慧 ，侯海榮 ，陳明濤 ，孫春玲 ， 郝苗苗

（1.錫林郭勒職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古錫林浩特 026000；2.錫林郭勒食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心，內(nèi)蒙古錫林浩特 026000）

泛酸是B族維生素中的一種，又名“遍多酸”，也稱為維B5，是人體所必需的維生素之一，也是輔酶A的組成部分，其主要功能是參與蛋白質(zhì)、脂肪、糖在體內(nèi)的新陳代謝[1-4]。馬奶作為重要的馬產(chǎn)品極具有地方特色，并且含有豐富的維生素、鈣、磷和鋅等多種微量元素[5]。有研究表明馬奶相較于牛奶更接近人乳的營(yíng)養(yǎng)組分[6]，而對(duì)于馬奶中泛酸的具體含量分析報(bào)道較少。因此，以馬奶為研究對(duì)象，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[7]對(duì)馬奶中的泛酸進(jìn)行測(cè)定，為今后馬奶的研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料及方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來(lái)源

試驗(yàn)樣品5份采集自內(nèi)蒙古錫林浩特地區(qū)，由試驗(yàn)人員根據(jù)試驗(yàn)要求采集并及時(shí)送回檢測(cè)。

1.1.2 儀器

SHIMADZU LCMS-8040型液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀，日本島津公司產(chǎn)品；Accucore aQ柱（150 mm×2.1 mm，2.6 μm，美國(guó)賽默飛世爾科技中國(guó)有限公司產(chǎn)品；天平（感量0.1 mg，0.01 mg），梅特勒-托利多上海儀器有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 試劑

乙腈（AR）、甲酸（AR）、鹽酸（AR）、乙酸鋅（AR）、亞鐵氰化鉀（AR)、泛酸鈣（純度≥98%），德國(guó)Dr Ehrenstorfer GmbH公司提供。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取0.010 87 g泛酸鈣倒入100 mL容量瓶，用水定容至刻度線，制得質(zhì)量濃度為1 mg/mL的泛酸[8]儲(chǔ)備液。從儲(chǔ)備液中吸取1 mL至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度線，制得質(zhì)量濃度為10 μg/mL的泛酸工作液A。從泛酸工作液A中吸取1 mL至10 mL容量瓶中，用水定容至刻度線，制得質(zhì)量濃度為1 μg/mL的泛酸工作液B。取一定量的泛酸工作液，分別配制成質(zhì)量濃度為50，100，500，1 000，1 500 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)并對(duì)上述質(zhì)量濃度點(diǎn)依次進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)、各質(zhì)量濃度點(diǎn)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 樣品前處理

（1） 試驗(yàn)組。稱取樣品20 g（精確到0.000 1 g）于150 mL三角瓶中，加入25 mL 30～40℃水，超聲提取30 min。用濃度為5 mol/L的鹽酸[9]溶液調(diào)節(jié)pH值至4.5±0.1[10]，加入2 mL乙酸鋅（質(zhì)量濃度為183 g/L）溶液及2 mL亞鐵氰化鉀（質(zhì)量濃度為92 g/L） 溶液，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度線。將上述溶液倒入離心管中，以轉(zhuǎn)速6 000 r/min離心5 min。取上清液經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，待測(cè)，每份樣品稱3組平行樣。

（2） 加標(biāo)組。選取其中2份樣品做加標(biāo)試驗(yàn)。每份樣品稱取18組試樣，添加不同量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)得到3個(gè)水平濃度的加標(biāo)樣品，樣品前處理過(guò)程與試驗(yàn)組一致，待測(cè)。

1.2.3 色譜條件

以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%甲酸水為流動(dòng)相A相，乙腈為B相，流速0.2 mL/min，Accucore aQ柱，柱溫40℃[9]，進(jìn)樣量5 μL。洗脫梯度：0.01～5 min，B相為95%～30%；5～5.1 min；B 相為 30%～95%；5.1～10 min，B相為30%～95%。電霧化離子源ESI，正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM模式），離子源接口電壓為4.5 kV，碰撞氣為氬氣進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 泛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及色譜圖

泛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

圖1 泛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)各質(zhì)量濃度點(diǎn)及測(cè)定結(jié)果繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=8 477.63X+38 675.7，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9，擬合度R2=0.999 7，擬合度高，在線性良好，線性范圍在50～1 500 ng/mL，滿足試驗(yàn)要求。

500 ng/mL泛酸標(biāo)曲點(diǎn)色譜圖見圖2，1號(hào)樣品色譜圖見圖3。

圖2 500 ng/mL泛酸標(biāo)曲點(diǎn)色譜圖

圖3 1號(hào)樣品色譜圖

由圖2可知，質(zhì)量濃度500 ng/mL的泛酸標(biāo)曲點(diǎn)色譜圖，可以看出泛酸的保留時(shí)間在3.760 min附近，色譜峰出峰明顯，峰形對(duì)稱。

2.2 樣品測(cè)定結(jié)果

泛酸樣品試驗(yàn)結(jié)果（n=3） 見表1。

表1 泛酸樣品試驗(yàn)結(jié)果（n=3）

由表1可知，選取的試驗(yàn)號(hào)分別為1，2，3，4，5共5組樣品，同組樣品做3次平行樣的平均值及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

泛酸2份樣品加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6） 見表 2。

表2 泛酸2份樣品加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

由表2可知，選取3號(hào)添加100 μg/mL的標(biāo)品0.10，0.15，0.20 mL這 3個(gè)級(jí)別，4號(hào)添加 100 μg/mL的標(biāo)品0.20，0.30，0.40 mL這3個(gè)級(jí)別，每個(gè)級(jí)別做6次平行的平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

3 結(jié)論

利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)錫林郭勒盟馬奶樣品中的泛酸含量進(jìn)行測(cè)定，配制50，100，500，1 000，1 500 ng/mL的標(biāo)曲點(diǎn)所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=8 477.63X+38 675.7，相關(guān)系數(shù)R=0.999 9，擬合度R2=0.999 7，擬合度高，線性良好，滿足試驗(yàn)要求。加標(biāo)回收率為97.4%～102.7%，加標(biāo)回收試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.8%～2.4%，試驗(yàn)數(shù)據(jù)可信度高。經(jīng)測(cè)定錫林郭浩特地區(qū)馬奶樣品泛酸含量分別為406.14，297.38，426.25，307.58，188.61 μg/100 g；平均值為 325.2 μg/100 g，相較于牛奶中含量365.9 μg/100 g[11]，人乳中含量 250.5 μg/100 g 而言，馬奶中泛酸含量亦能滿足機(jī)體的需要。