超高效液相色譜檢測農作物中農藥殘留

張镅

齊齊哈爾市質量技術監督檢驗檢測中心 黑龍江齊齊哈爾 161000

1 高效液相色譜法

高效液相色譜技術指高壓液相色譜技術，是以經典液相色譜法為前提條件，然后引入氣相色譜理論形成的檢測方法。高效液相色譜法的適用范圍比較廣闊、分離效率比較高、檢測的速度比較快。在利用高效液相色譜技術檢測時，流動相能選擇的范圍比較寬，固定相的種類比較多，色譜柱還可以反復使用，具有很大的便利性。高效液相色譜法廣泛地運用在揮發性比較低、熱穩定性比較差的高分子化合物和離子型的化合物中進行分離檢測[1]。

2 超高效液相色譜檢測農作物中農藥殘留

2.1 儀器與試劑

儀器的選擇中，超高效液相色譜儀器是必備設備之一，除此之外還需要配備溶劑萃取儀、超聲波清洗機、元素型1820A超純水機以及固相萃取裝置等設備。必備試劑有各類農藥殘留物的對照品，主要分為甲基硫菌靈、多菌靈、三聚氰胺以及環丙氨嗪。以上4種對照液溶度要求為：＞97.7%、＞97.2%、＞99.5%、＞99.5%。除此之外，還需要配備甲醇、超純水、鹽酸以及丙酮等。檢測應用的流動相A為甲醇溶液；流動相B為融合溶液，由乙酸銨+水+三氟乙酸調節而成，最終pH控制在3.8。萃取溶劑主要是由丙酮（100mL）和甲醇，最終需要定容在500mL，pH控制在3.0。標準儲備液：0.01g甲基硫菌靈以及多菌靈溶劑應用甲醇，最終定容到100mL；0.02g環丙氨嗪以及三聚氰胺同樣應用甲醇進行定容，定容規格與上述相同。工作液：結合實際需求進行工作液配置，配置用試劑為甲醇和水。

2.2 樣品萃取與凈化

本次實驗中，所有應用到的食用菌樣品全部都是常見菌類品種，從超市隨機采購。采購之后，將食用菌進行勻漿處理，并且進行避光存儲，存儲溫度為4℃。加速溶劑萃取：在對應儀器萃取池底部設置1層直徑為16.2mm的墊片，在其中放置0.5g硅藻土，目的在于保證收集瓶干凈整潔，不會有多余雜質進入。樣品稱取量為10g，將其均勻地混合到萃取池中。萃取溶劑為丙酮、甲醇、鹽酸混合液，保證萃取溫度為70℃恒定，壓強為10.3MPa恒定。進行初期的靜態萃取，時間為5min，一共需要循環2次。之后以10000r/min的速度進行離心，離心時間為10min，可以得到檢測應用的上清液，將上清液轉移到梨形瓶進行旋轉蒸發處理，最后應用3：7比例的甲醇水溶液進行定容，定容規格為3mL。固相萃取凈化：將固相萃取小柱應用甲醇溶液進行活化處理，應用清水進行平衡，加入待測樣品[2]。

2.3 超高效液相分析應用

色譜柱進行檢測，要求色譜柱的柱溫度在40℃。在檢測之前進行梯度洗脫，該過程中應用到的溶劑為乙酸銨+水+三氟乙酸和甲醇。確定4種殘留農藥最大檢測波長分別為甲基硫菌靈264nm、多菌靈280nm、環丙氨嗪240nm、三聚氰胺237nm。保證外部條件最佳，對殘留農藥進行峰值、峰面積、工作曲線測定。

3 結果分析

3.1 檢測波長分析

規定色譜條件一致，檢測4類殘留農藥標準液，應用儀器在190-400mm波長范圍內進行測試。檢測結果表明，TM、CAR、CYR、MEL分別在280nm、264nm、240nm、237nm時存在有特征吸收峰，比對結果為四者在237nm處均有響應，并且干擾并不大；最終確定，CYR、MEL的最佳波長參數為237nm，這一檢測結果與其它文獻參數相同。

3.2 線性和檢出限

應用流動相進行逐級稀釋，最終得出甲基硫菌靈、多菌靈、環丙氨嗪、三聚氰胺濃度分別為5-500ng/mL、4-400ng/mL、3.6-360ng/mL、2.4-240ng/mL，并且保證檢測條件最佳狀態進峰面積測定。而對于檢測線性的展示則是通過坐標軸完成，本次采用的坐標軸橫縱坐標分別為分析物濃度和峰面積。通過線性檢測分析可以發現，以上4種分析物都存在良好的線性關系，按照規定，最終確定上述4種分析物的檢出限分別為1.7、1.2、0.72以及1.1對照相關的GB/T22388以及GC-MS，本文應用的檢測方法更加便捷，并且具有良好的檢測效果[3]。

3.3 精確度

在精確度的檢測過程中，保證檢測環境為最佳條件，最終經測試4種分析物的日標準差基本維持在2.3%-4.5%之間，而相對標準差則維持在3.1%-6.3%之間，上述數據證明，本文應用到的檢測方法具有良好重現性。

3.4 樣品分析

在本次檢測過程中，采集的食用菌為常見的香菇、杏鮑菇、雙孢菇以及金針菇等，檢測時確保萃取、凈化、分析等過程沒有受到外界環境條件影響，最終檢測結果為：在上述食用菌中沒有檢測到4種分析物，也就是不存在農藥殘留。其中，香菇的4種分析物檢測回收率在83%-99%之間，杏鮑菇在82%-105%之間，雙孢菇以及金針菇在83%-98%、85%-97%之間。

3.5 檢測結果分析

本文檢測過程中所提出的ASE-SPE結合UPLCDAD方法，在實際應用過程中，成功的檢測出采購蘑菇樣品中甲基硫菌靈、多菌靈、環丙氨嗓、三聚氰胺農藥殘留量。從檢測應用情況以及具體表現角度而言，此種方法具有很好的立足點，較高的靈敏度，精密度和較低的溶劑消耗，4種分析物能夠在ug/kg水平上檢測藥物的殘留。因此，該方法可以用于蘑菇樣品中甲基硫菌靈、多菌靈、環丙氨嗦和三聚氰胺的常規檢測，并且可以發揮重要作用。