通過固相萃取凈化/高效液相色譜-串聯質譜法測定華南黃瓜和華北黃瓜中的烯酰嗎啉與啶蟲脒殘留

馬藝蕎王祿祿 王劍鋒譚 克 李彥軍姜奇峰*

（1.吉林省蔬菜花卉科學研究院 吉林長春 130033 2.吉林省正恒檢測有限公司 長春 130011）

啶蟲脒是一種新型殺蟲劑，可有效防治農產物的蟲害，并可殺卵，此殺蟲劑經常用于蔬菜[1]。烯酰嗎啉是一種信息內吸治療性殺菌劑，對卵菌各個階段都有抑制作用，醉霜霉病霜疫霉病、晚疫病、疫（霉）病、疫腐病、腐霉病、黑脛病等低等真菌性病害均具有很好的防治效果[2]。兩種農藥經常被用于葡萄、荔枝、黃瓜、甜瓜、苦瓜、番茄、辣椒、馬鈴薯、十字花科蔬菜[3]。

近年來，電噴霧液相色譜-質譜聯用（HPLC-ESI MS MS）經常因靈敏度高，分析快速，定性定量準確而被用于多種農殘檢測[4]。本文采用超高效液相色譜-串聯質譜的方法，經過前期處理步驟，建立了快速分析啶蟲脒與烯酰嗎啉殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

華南黃瓜和華北黃瓜（市面購買）：乙腈（美國Fisher chemical公司)、甲酸（麥克林）均為色譜純：氯化鈉（國藥化學試劑有限公司）；啶蟲脒、烯酰嗎啉（農業部環境保護科研監測所）。

儀器：Agilent 1260 UPLC-Agilent 6470A高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜聯用儀（配ESI離子源）；離心機TG16.5（上海盧湘儀離心機儀器有限公司）；固相萃取ASE-12(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；超聲波提取儀KQ-8000DE（昆山市超聲儀器有限公司）；氮吹儀BF2000-15A（北京八方世紀科技有限公司）；旋轉蒸發RE-2000A（上海亞榮生化儀器廠）；可調式混勻儀MX-S（大龍興創實驗儀器（北京）有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理

華南黃瓜和華北黃瓜取代表性樣品500g，取可食部分，避光勻漿，每種樣品平均分為2份保存在0～4℃冷藏保存。

1.2.2 樣品前處理

稱取10g試樣于50mL離心管中，加入20mL乙腈，渦旋1min，超聲 30min，加 5g 氯化鈉，在渦旋 1min[5]，8000r/min 離心5min，取上清10mL，在50℃水浴中旋轉濃縮至約1mL，待凈化。

1.2.3 凈化

在Sep-Pak固相萃取柱中加入2cm左右無水硫酸鈉，并放在雞心瓶固定架上，加樣前使用5mL乙腈預洗柱，當液面即將流干時，加入樣品濃縮液，并更換雞心瓶接收凈化液，使用乙腈10mL乙腈分3次洗脫，并接收洗脫液于雞心瓶中，在50℃水浴中旋轉蒸發至約1mL。將濃縮液至于50℃氮吹儀上吹干，迅速加入1mL乙腈+甲酸水0.1%（3+2）渦旋混勻，經0.22μm濾膜過濾后進行液相色譜-串聯質譜測定[5]。

1.2.4 液相色譜-串聯質譜測定條件

1） 色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 2.1mm×50 mm，1.8-Micron。

2）流動相及洗脫程序見表1

表1 流動相及梯度洗脫條件

流動相A：乙腈 流動相B：0.1%甲酸水溶液梯度洗脫，流速0.4mL/min，進樣量 1μL。

3）電噴霧離子源（ESI）：正離子掃描，多反應監測（MRM）模式；毛細管電壓3.5KV，噴嘴電壓500V，鞘氣流速11L/min，鞘氣溫度250℃，霧化器壓力45psi，干燥器流速5L/min，干燥器溫度300℃。

4）烯酰嗎啉與啶蟲脒MRM質譜優化參數

啶蟲脒保留時間0.405min，母離子223.2：定量離子126.2，去簇電壓100eV，碰撞能量20eV；定性離子90.0，去簇電壓100eV，碰撞能量30eV。

烯酰嗎啉保留時間0.510min，母離子388.1：定量離子301.1，去簇電壓100eV，碰撞能量20eV；定性離子165.1，去簇電壓100eV，碰撞能量30eV。

2 結果

2.1 質譜條件優化

根據每種化合物的準分子離子及其特征離子的質譜圖，選擇兩個子離子與母離子組成兩對離子對進行MRM檢測。先對啶蟲脒與烯酰嗎啉進行全掃（MS2 Scan），確定啶蟲脒與烯酰嗎啉的母離子為223.2與388.1，依次對兩種物質進行選擇離子檢測（MS2 SIM）、子離子掃描（Product lon）、多重反應監測（MRM），確定子離子、碰撞能量、加速電壓等質譜參數[6]。

圖1 啶蟲脒與烯酰嗎啉的質譜方法

2.2 華南黃瓜與華北黃瓜檢測結果分析

市面上的華南黃瓜與華北黃瓜的啶蟲脒與烯酰嗎啉檢測結果均為未檢出。

圖2 啶蟲脒與烯酰嗎啉的線性范圍及回歸方程

表2 啶蟲脒與烯酰嗎啉的線性范圍、回歸方程、相關系數、檢出限、定量限

固相萃取凈化/高效液相色譜-串聯質譜測定華南黃瓜和華北黃瓜中烯酰嗎啉與啶蟲脒殘留[7]。樣品經過處理凈化，電噴霧（ESI）離子源多反映檢測模式進行質譜檢測，外標法定量[8-10]。

結果表明在0.5～50ng/mL范圍內呈良好線性關系，相關系數均大于0.9960。啶蟲脒與烯酰嗎啉的定量限分別為0.84μg/kg與0.15μg/kg。

2.3 回收率與精密度

空白樣品分別添加 5μg/kg，10μg/kg，20μg/kg 混合標準溶液，每個濃度做5個平行樣品，按照方法1.2.2處理，啶蟲脒與烯酰嗎啉平均回收率為76.7%～117.6%，相對偏差（RSD）為2.3%～9.8%。

3 結論

本實驗采用固萃取凈化/高效液相色譜-串聯質譜測定華南黃瓜和華北黃瓜中烯酰嗎啉與啶蟲脒殘留。樣品經過破壁凈化處理，電噴霧（ESI）離子源多反映檢測模式進行質譜檢測，外標法定量。結果表明在0.5～50ng/mL范圍內呈良好線性關系，相關系數均大于0.9960。在5～20μg/kg的加標濃度范圍內，平均回收率為76.7%～117.6%，相對偏差（RSD）為2.3%～9.8%。