血管緊張素Ⅱ1型受體在口腔鱗癌中的表達(dá)及臨床意義

楊金敏，王露露，陳盛，吳萌萌，朱翠平

口腔鱗癌起源于口腔上皮，其代表了大多數(shù)口腔癌癥。口腔癌發(fā)生通過兩個(gè)主要途徑發(fā)生：（1）正常上皮轉(zhuǎn)化為發(fā)育不良病變和（2）這些發(fā)育異常病變進(jìn)展為侵襲性鱗狀細(xì)胞癌。罹患口腔鱗癌的病人存活率較差，5年生存率只有50%左右［1］，遺憾的是，治療策略在過去幾十年里進(jìn)展甚微。腎素-血管緊張素系統(tǒng)（Renin-Angiotensin-System，RAS）在血壓的控制中起關(guān)鍵作用，血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）通過血管緊張素Ⅱ1型受體（AT1受體）和血管緊張素Ⅱ2型受體（AT2受體）在RAS系統(tǒng)的調(diào)控中起著核心作用。近年多項(xiàng)研究表明AT1受體在多種癌癥組織中高表達(dá)，并參與了癌癥的轉(zhuǎn)移、侵襲過程［2-3］。然而AT1受體在口腔鱗癌中是否表達(dá)以及對(duì)口腔鱗癌的進(jìn)展是否有影響還未見報(bào)道，本研究旨在分析口腔鱗癌組織中AT1受體的表達(dá)與口腔鱗癌的TNM分期和臨床分級(jí)之間的聯(lián)系，明確AT1受體對(duì)口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2012年1—12月期間在南京市口腔醫(yī)院46例住院接受手術(shù)治療并由兩位病理醫(yī)生通過術(shù)后常規(guī)病理確診為口腔鱗癌的病人的石蠟組織切片，其中20例切片中包含了正常的癌旁組織。其中男性27例，女性19例，年齡范圍為29～82歲，所有病人的臨床病例資料完整，術(shù)前均未接受過放化療，所有病人或其近親屬術(shù)前已簽署手術(shù)知情同意書，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 免疫組織化學(xué)和試劑口腔鱗癌石蠟切片利用梯度乙醇脫蠟至水，高壓蒸汽鍋行抗原修復(fù)，血清封閉。滴加AT1受體多克隆抗體（購(gòu)于美國(guó)Abcam公司，貨號(hào)ab124505），稀釋比例1∶400，4℃恒溫過夜，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）沖洗3次；滴加生物標(biāo)記的二抗工作液，37℃孵育30 min；PBS沖洗3次；DAB試劑盒顯色，蒸餾水沖洗終止顯色反應(yīng)。蘇木精復(fù)染，脫水后二甲苯封片。

1.3 結(jié)果判斷切片使用數(shù)字病理切片掃描儀（NanoZoomer-XR C12000，Japan）進(jìn)行掃描，隨機(jī)選取5個(gè)不重復(fù)等面積的視野計(jì)算口腔鱗癌的平均陽(yáng)性細(xì)胞率。評(píng)估免疫反應(yīng)評(píng)分（IRS），通過染色比例評(píng)分（PS）乘以染色強(qiáng)度評(píng)分（IS）計(jì)算得出。PS分為0分（0%～＜1%），1分（1%～＜26%），2分（26%～＜51%），3分（51%～＜76%），4分（76%～100%）。IS分為0分（負(fù)），1分（弱），2分（中等）和3分（強(qiáng)）。根據(jù)獲得的IRS評(píng)分，0分為陰性表達(dá)，1～3分為弱表達(dá)，4～12分為高表達(dá)［4］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法運(yùn)用SPSS 23.0軟件，采用χ2檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)AT1受體的表達(dá)率及AT1受體表達(dá)與病人不同臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。P＜0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AT1受體在正常癌旁組織和口腔鱗癌中的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示AT1受體在正常的癌旁組織中有3例表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為15.0%；而口腔鱗癌組織中AT1受體表達(dá)41例，陽(yáng)性表達(dá)率為89.1%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝109.696，P＜0.01）。AT1受體在口腔鱗癌組織中弱陽(yáng)性表達(dá)14例，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)27例（圖1）。

2.2 AT1受體在口腔鱗癌中的表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)聯(lián)調(diào)取病人的臨床資料，結(jié)合免疫組化的評(píng)分結(jié)果，對(duì)口腔鱗癌中AT1受體的表達(dá)與臨床參數(shù)之間的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示：AT1受體在口腔鱗癌中的表達(dá)與病人年齡、性別無(wú)關(guān)，而在腫瘤大小、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

表1 血管緊張素Ⅱ1型受體（AT1受體）的表達(dá)與口腔鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例（%）

3 討論

口腔鱗癌是一種具有快速增殖能力和高侵襲特性的頭頸部癌癥，其5年生存率僅為50%左右。有報(bào)道稱口腔鱗癌病人的生存率與腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［5］，眾多學(xué)者尋找能夠早期確診口腔鱗癌并鑒別惡性程度的生物分子標(biāo)志物，已報(bào)道核基質(zhì)蛋白特異AT序列結(jié)合蛋白2（SATB2）［6］，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）［7-8］，環(huán)氧合酶-2（COX-2）［9］等參與了口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展，具有一定的診斷和預(yù)后意義。

眾所周知，RAS系統(tǒng)在維持心血管穩(wěn)態(tài)、體液及電解質(zhì)平衡方面起著關(guān)鍵的作用。此外，局部RAS系統(tǒng)在多種組織中表達(dá)并對(duì)細(xì)胞的增殖，生長(zhǎng)和代謝起著一定的作用。AngⅡ是主要的效應(yīng)器，通過其不同的受體發(fā)揮維持組織穩(wěn)態(tài)的作用。近年的臨床前研究表明RAS的各成分在多種人類癌癥組織及細(xì)胞中均有表達(dá)，并參與了癌癥的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移［10］。AngⅡ通過AT1受體可促進(jìn)多種癌細(xì)胞的增殖，遷移及侵襲，而AT1受體的過表達(dá)通常表現(xiàn)為更強(qiáng)的侵襲性（更大的腫瘤，更高的臨床分級(jí)和更高的血管密度）和更差的臨床結(jié)果［11-13］。在實(shí)體腫瘤中，AngⅡ通過在腫瘤微環(huán)境中充當(dāng)旁分泌和或自分泌信號(hào)而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)。同時(shí)，AngⅡ還可促進(jìn)基質(zhì)細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）的生長(zhǎng)，從而導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)因子的分泌增加［14］。大量證據(jù)表明AngⅡ/AT1受體信號(hào)通路在實(shí)體腫瘤中促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）介導(dǎo)的血管生成，AT1受體表達(dá)與VEGF和VEGF受體（VEGFR）的表達(dá)及不同人類腫瘤中微血管的密度（MVD）相關(guān)［11］。AngⅡ還可促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)VEGF的表達(dá)，VEGF也是誘導(dǎo)腫瘤血管通透性過高的主要原因之一［15-16］。研究表明AngⅡ/AT1受體信號(hào)通過多種機(jī)制損害腫瘤供血，如纖維組織介導(dǎo)的血管壓迫，VEGF誘導(dǎo)的血管滲漏和形態(tài)異常，AngⅡ介導(dǎo)的宿主血管收縮等，結(jié)果導(dǎo)致腫瘤缺氧加重及免疫抑制和逃避，而RAS系統(tǒng)抑制劑可以減少VEGF介導(dǎo)的血管生成和纖維增生，使腫瘤血管系統(tǒng)正常化［17］。本次研究結(jié)果顯示AT1受體主要在腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)和胞膜中表達(dá)，陽(yáng)性率較高為89.1%，而在正常的癌旁組織中AT1陽(yáng)性表達(dá)率為15.0%，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，AT1受體的表達(dá)和年齡、性別無(wú)關(guān)，而與原發(fā)腫瘤組織的大小，淋巴轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)，AT1受體的表達(dá)程度越高，腫瘤細(xì)胞的惡性程度越高。本次研究結(jié)果顯示RAS系統(tǒng)可能在口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展中起著一定的作用，AT1受體可作為判斷腫瘤惡性程度的重要指標(biāo)；同時(shí)，我們預(yù)測(cè)AT1受體在腫瘤中的高表達(dá)，可能在口腔鱗癌細(xì)胞惡變，增殖、抗凋亡過程中起促進(jìn)作用。下一步的研究中，我們會(huì)增加研究樣本量，并增加細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步明確RAS系統(tǒng)在口腔鱗癌中的作用及相關(guān)機(jī)制。

綜上所述，本次研究結(jié)果表明AT1受體與口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展及淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為口腔鱗癌的診斷及惡性程度、預(yù)后的重要評(píng)判指標(biāo)，為口腔鱗癌的治療提供新的思路。（本文圖1見插圖12-1）

圖1 血管緊張素Ⅱ1型受體（AT1受體）在癌旁組織和口腔鱗癌組織中的表達(dá)（DAB染色×200）：A為癌旁組織；B～D為口腔鱗癌組織，其中B為陰性表達(dá)，C為低表達(dá)，D為高表達(dá)