牛結(jié)節(jié)性皮膚病樣品采集和保存方法

薛文 蘇曉慧 李舵 居馬別克·夏拉巴依

摘 要 牛結(jié)節(jié)性皮膚病（Lumpy skin disease，LSD），是一種由媒介傳播的牛的痘病，其特征是皮膚出現(xiàn)結(jié)節(jié)，主要由蚊子、其它吸血昆蟲和蒼蠅傳播。該病在非洲和中東呈地方性流行，2016年，LSD在歐洲及歐亞交界等地蔓延，哈薩克斯坦等國(guó)相繼報(bào)告發(fā)生LSD疫情[1]。2019年8月12日，經(jīng)中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心國(guó)家外來動(dòng)物疫病研究中心確診，新疆伊犁哈薩克自治州發(fā)生牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情，這是我區(qū)首次確診發(fā)生該病。該病是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織OIE要求法定報(bào)告的動(dòng)物疫病[2]。在《中華人民共和國(guó)進(jìn)境動(dòng)物檢疫疫病名錄》中，其被列為一類動(dòng)物疫病[3]。動(dòng)物感染該病后，病毒廣泛存在于皮膚、皮膚損傷病灶、皮膚結(jié)痂、唾液、眼鼻分泌物、牛乳、精液、肌肉、脾臟、淋巴結(jié)等處[4]。由于LSD沒有單純的帶毒不發(fā)階段[5]，具有高度特征性的臨床癥狀，出現(xiàn)輕微病癥的動(dòng)物通常不會(huì)有內(nèi)部病變，外部病變非常明顯也不需要打開嚴(yán)重病變的動(dòng)物。在此，下面把活體動(dòng)物病料采集和保存方法的經(jīng)驗(yàn)資料進(jìn)行整理，希望能為廣大獸醫(yī)工作者提供幫助。

關(guān)鍵詞 牛結(jié)節(jié)性皮膚病；樣品采集；保存方法

1 樣品的采集

1.1 病原學(xué)檢測(cè)的樣品采集

1.1.1 結(jié)痂和皮膚病變樣本 結(jié)痂是最好的樣品材料，易于收集，不需要鎮(zhèn)靜或局麻，能在不同溫度下長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸并含有高濃度的病毒。可使用局部環(huán)阻滯麻醉，使用16-17mm的一次性活檢穿孔器采集皮膚病變樣本。

1.1.2 鼻拭子 使用無菌拭子收集鼻拭子，要盡量擦拭鼻粘膜，放入無菌試管中用于運(yùn)輸。

1.1.3 血液 從頸靜脈或尾靜脈采集血液置于加EDTA抗凝劑（紫色頂部）的真空采血管中采集4ml血液。

1.2 血清學(xué)檢測(cè)的樣品采集

1.2.1 血清 從頸靜脈或尾靜脈采集血液樣本。采集后，因?qū)?chǔ)血器在室溫下直立放置至少1-2小時(shí)，血液凝塊開始收縮，盡快將血清吸出。

2 樣品保存的注意事項(xiàng)

2.1 血液，唾液拭子和組織樣本如果運(yùn)輸時(shí)間不超過48小時(shí)，應(yīng)保持在2-6℃，如果超過48小時(shí)則應(yīng)保持在-20℃。

2.2 血清樣品

如果運(yùn)輸時(shí)間少于5天，則樣品可以保持在2-8℃冰箱中。如果超過5天，應(yīng)將血清樣品存儲(chǔ)在-20℃。

3 送檢運(yùn)輸中樣品注意事項(xiàng)

3.1 選擇合適的包裝

樣品應(yīng)使用三重包裝。樣品容器應(yīng)防漏、防水、無菌，使用膠帶或者封口膜密封樣品容器的蓋子。二級(jí)包裝袋應(yīng)密封防漏。三級(jí)包裝應(yīng)貼有標(biāo)簽注明內(nèi)容物清單，包括樣本類型和數(shù)量。

3.2 做好相關(guān)的記錄

樣品必須附有送樣表，送樣表應(yīng)隨樣品包裝在二級(jí)包裝和外包裝之間。送樣表中除基本信息外還應(yīng)包含觀察到的臨床癥狀，簡(jiǎn)短的流行病學(xué)描述，包括發(fā)病率、死亡率、感染動(dòng)物數(shù)量、發(fā)病經(jīng)過、涉及的動(dòng)物和可能的鑒別診斷。

4 總結(jié)

牛結(jié)節(jié)性皮膚病會(huì)消減牛奶產(chǎn)量，破壞皮革并導(dǎo)致繼發(fā)細(xì)菌感染而死亡。由于該病的存在引發(fā)了嚴(yán)格的貿(mào)易限制，應(yīng)引起高度的重視。一般根據(jù)典型臨床癥狀即可做出現(xiàn)場(chǎng)診斷，最終確診還需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。感染病例的初期輕度病例在診斷時(shí)應(yīng)與偽牛痘、螨蟲病、牛皮膚真菌病等相區(qū)別。牛結(jié)節(jié)性皮膚病皮膚會(huì)出現(xiàn)全身性堅(jiān)硬的丘疹與有痛感的結(jié)節(jié)，一般多發(fā)生于夏季；牛螨蟲病主要表現(xiàn)為奇癢、脫毛、結(jié)痂，一般發(fā)生于秋末、冬初及初春[6]；牛皮膚真菌病表現(xiàn)為脫毛、鱗屑、形成痂皮，初期不癢至逐漸發(fā)癢[7]，多發(fā)生于小犢牛和青年牛，常發(fā)生在冬季；偽牛痘一般在牛乳房和乳頭上引起丘疹、痂皮，常無全身癥狀，多見于泌乳母牛。

參考文獻(xiàn)：

[1]袁麗萍，宋建德.2013-2016年全球牛結(jié)節(jié)性皮膚病流行狀況分布[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2017，34（9）：19-22，49.

[2]European Food Safety Authority（EFSA）.Urgent advice on lumpy skin disease EFSA panel on animal health and welfare [J]. European Food Safety Authority Journal ，2016，14（8）：4573.

[3]農(nóng)業(yè)部、國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢驗(yàn)總局.中華人民共和國(guó)進(jìn)境動(dòng)物檢疫疫病名錄：聯(lián)合公告的2013號(hào)【EB/OL】.（2013-12-5）【2017-06-22】.

[4]盧曉立，顏新敏，張強(qiáng).牛疙瘩皮膚病概述[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30（11）：118-121.

[5]張志誠(chéng)，李興元，戈勝強(qiáng).俄羅斯北高加索聯(lián)邦區(qū)牛結(jié)節(jié)性皮膚病的釋放風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及其監(jiān)測(cè)抽樣模擬[J].畜牧與獸醫(yī)，2018，50（3）：126-130.

[6]馮世武，張晉.牛螨蟲病的防治[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2018，37（1）：94-95.

[7]余黎明.三種常見牛傳染性皮膚病的鑒別與診治[J].動(dòng)物保健，2015（9）：39-40.

第一作者：薛文（1987-），女，漢族，河南正陽，本科學(xué)歷，助理獸醫(yī)師，從事病毒性人獸共患病研究。