復方枸杞泡騰片的制備及含量測定

楊梅，余建強，2，鄭萍，2，李婷，馬學琴，2，張霞，2，楊建宏，2，劉寧，2，*

（1.寧夏醫(yī)科大學藥學院，寧夏銀川750004；2.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術研究中心寧夏回醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心，寧夏藥物創(chuàng)新與仿制藥研究重點實驗室，寧夏銀川750004）

枸杞子為茄科植物寧夏枸杞（Lycium barbarum L.）的干燥成熟果實[1]。文獻報道，其具有多種藥理作用及營養(yǎng)價值[2]。前期研究發(fā)現(xiàn)，枸杞總黃酮具有提高小鼠運動耐力及清除活性氧的作用，說明枸杞具有抗疲勞的作用[2]。淫羊藿中的黃酮類化合物具有改善機體的氧消耗，使機體的糖、蛋白質的降解減少，具有抗疲勞的作用[3-4]。菟絲子具有補益肝腎、固精縮尿、安胎、明目、止瀉之功效，可用于治療肝腎不足、腰膝酸軟、脾腎虛瀉等[5]。據(jù)研究表明有多種傳統(tǒng)中藥材起到補腎壯陽的作用，如枸杞、淫羊藿、肉蓯蓉等[6]。目前已有將枸杞子、淫羊藿及菟絲子作為單味藥物或與其他藥物組方配伍用于抗疲勞的相關研究報道[4，7]，而關于將枸杞、淫羊藿、菟絲子、胡蘆巴這4 種中藥原料合理配伍制成具有緩解疲勞作用的健康休閑食品的研究，目前國內外尚未見報道。

泡騰片是近年來國外研究開發(fā)較熱的一種新型片劑，它可遇水發(fā)生泡騰反應，其崩解時產(chǎn)生的二氧化碳部分溶解于水中，有汽水般的口感[8]。泡騰片因其具有以下優(yōu)點：風味自然，速溶性好，應用范圍廣，飲用方便；包裝簡易，運輸方便；易于保持衛(wèi)生[9]，深受大眾喜愛。為此，以枸杞提取物為原料，旨在開發(fā)一種具有保健功能的泡騰片，以期為其他泡騰片的開發(fā)提供參考依據(jù)，增加消費者的選擇。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原輔料與試劑

枸杞提取物：寧夏香草生物技術有限公司；胡蘆巴提取物、淫羊藿提取物、菟絲子提取物：西安賽奧生物技術有限公司；乳糖：武漢信之德生物科技有限公司；檸檬酸、碳酸氫鈉、聚乙二醇6000（polyethylene glycol 6000，PEG 6000）、甜菊糖苷：鑫鑫食化有限公司；食用酒精：鄭州食品添加有限公司；金絲桃苷對照品：上海源葉生物科技有限公司；乙腈（色譜純）：Fisher 公司。

1.1.2 儀器

THP-4 花籃式壓片機：上海天馳制藥機械合作公司；DHG-9140 電熱鼓風干燥箱：上海-恒科學儀器有限公司；AL104 電子天平：梅特勒-拖利多儀器上海有限公司；AR1502CN 型電子天平：奧豪斯儀器常州有限公司；LC-20AT 型高效液相色譜儀（含二元梯度泵、SIL-20A 自動進樣器、SPD-20A 紫外檢測器等）：日本島津公司；InerSustain 色譜柱（4.6 mm×25 mm，5 μm）、KQ-500E 型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；AR1502CN 型電子天平：奧豪斯儀器常州有限公司。

1.2 方法

1.2.1 復方枸杞泡騰片配方篩選

1.2.1.1 泡騰劑總量及其酸堿質量比的確定

堿源常用的有碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀，其中碳酸氫鉀較昂貴，碳酸鈉在中和同樣量的酸時用量較多，碳酸氫鈉沒有以上缺點且制成的泡騰片崩解迅速，故堿源選用碳酸氫鈉。酸源常用的有酒石酸和檸檬酸，酒石酸價格較高，故酸源選用檸檬酸。

泡騰劑總量可影響泡騰片的崩解時間，以泡騰片的外觀、崩解時限和pH 值為指標，對泡騰劑總量為50%、60%、70%時進行考察。并考察泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉質量比分別為 0.6 ∶1、0.8 ∶1、1 ∶1、1.2 ∶1 和1.4 ∶1 時，固定枸杞、胡蘆巴、淫羊藿、菟絲子 4 種提取物用量，潤滑劑PEG 6000 3%，制備復方枸杞泡騰片，測定其吸濕率、崩解時限和口感。

1.2.1.2 填充劑種類及其用量的確定

常用的水溶性填充劑的性質見表1。

表1 常用的水溶性填充劑的性質Table 1 Properties of commonly used water-soluble fillers

泡騰片需在水中完全溶解，因此所用填充劑需可溶。由表1 初步選擇乳糖和甘露醇為本試驗填充劑的考察對象，試驗分別選用甘露醇、乳糖、甘露醇∶乳糖（1 ∶1，質量比）、甘露醇 ∶乳糖（2 ∶1，質量比）、甘露醇 ∶乳糖（1 ∶2，質量比）作為填充劑，并固定枸杞、胡蘆巴、淫羊藿和菟絲子4 種提取物用量，泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉質量分數(shù)共占70%（檸檬酸與碳酸氫鈉的質量比為 1.2 ∶1，即檸檬酸 38.18%，碳酸氫鈉 31.82%），潤滑劑PEG 6000 3%，制備復方枸杞泡騰片，測定其顆粒成型性、休止角和吸濕率，并對篩選出的填充劑的用量作進一步考察。

1.2.1.3 黏合劑的選擇

由于泡騰片具有吸潮特性，且本品原料具有濕熱性，黏合劑宜選用乙醇溶液。考察無水乙醇含量80%、85%、90%、95%對片劑的影響，考察其軟材情況、過篩情況及成型性，以篩選黏合劑。

1.2.1.4 潤滑劑種類及用量的確定

為避免工業(yè)化生產(chǎn)時片重波動大、黏沖及出片困難等現(xiàn)象，使壓片工序順利進行，顆粒在壓片前必須加入潤滑劑，硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉、PEG 6000等潤滑劑較為常用。水溶性潤滑劑PEG 6000 具有優(yōu)良的潤滑性和抗黏性，且對泡騰片溶解后的澄清度沒有影響。所以選擇PEG 6000 作為泡騰片的潤滑劑，壓片前與顆粒混勻，添加量2%～3%[10]。

分別選用PEG 6000、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠作為泡騰片的潤滑劑，以2%的比例與顆粒混合，并固定枸杞、胡蘆巴、淫羊藿、菟絲子提取物添加量，將乳糖作為填充劑，制備復合枸杞泡騰片，考察顆粒的流動性，壓片過程中是否出現(xiàn)粘沖現(xiàn)象以及崩解后溶液的外觀，并對潤滑劑的用量進行考察。

1.2.1.5 甜味劑的選擇

本品泡騰劑中的檸檬酸會使泡騰片的味道偏酸，選用甜味劑進行矯味。常用甜味劑包括天然和合成的兩大類，天然的甜味劑有蔗糖、單糖漿、蜂蜜、山梨醇、甘露醇、甜菊糖苷等；合成的甜味劑有糖精鈉、阿斯巴甜和甜蜜素等。本試驗選擇天然甜味劑甜菊糖苷，它具有高甜度、低熱能的特點，其甜度是蔗糖的200 倍～300 倍，熱值僅為蔗糖的1/300，是一種可替代蔗糖非常理想的甜味劑，常作為保健甜味添加劑。分別按總藥量的0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%加入甜菊糖苷，研磨混勻，制粒壓片，考察矯味效果。

1.2.2 正交試驗優(yōu)化復方枸杞泡騰片配方

試驗結果發(fā)現(xiàn)，影響復方枸杞泡騰片綜合評分的主要因素是泡騰劑總量、填充劑添加量和潤滑劑添加量。故本試驗選擇泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉總量（A）、填充劑乳糖添加量（B）和潤滑劑PEG 6000 添加量（C）為考察因素，進行三因素三水平正交試驗，如表2 所示。考察最優(yōu)配方時，將復方枸杞泡騰片的pH 值、吸濕率和崩解時限以權重0.2 ∶0.2 ∶0.6 進行綜合評分，以復方枸杞泡騰片綜合評分作為正交試驗的評價指標。

表2 正交試驗因素水平表Table 2 Orthogonal test factor level table

1.2.3 泡騰片的質量指標

1.2.3.1 pH 值的測定

取該品3 片，于100 mL 20 ℃蒸餾水中崩解完全后，用酸度計測定溶液的pH 值[11]。

1.2.3.2 崩解時限的測定

參照《中國藥典》2015 版第四部通則0921 崩解時限檢查法，取本品1 片，置250 mL，內有200 mL 溫度為（20±5）℃的水中，即有許多氣泡放出，當片劑或碎片周圍氣體停止逸出時，片劑應溶解或分散在水中，無聚集的顆粒剩留。除另有規(guī)定外，同法檢查6 片，均應在5 min 內崩解。如有1 片不能完全崩解，應另取6 片復試，均應符合規(guī)定。

1.2.3.3 發(fā)泡容量的測定

取一只燒杯，加50 mL 熱蒸餾水，投入樣品1 片，立即將所產(chǎn)生的氣體導入一倒立充滿水的10 mL 量筒中，至該片不再有氣體產(chǎn)生時，記錄量筒中氣體的體積，即為發(fā)泡容量[12]。

1.2.3.4 休止角測定

休止角測定法是根據(jù)落下法（定落差法）進行的試驗方法，即將粉末或顆粒體從一定高度的漏斗中自然下落到水平板上，直至漏斗中不再有供試品落下（流出），求所形成的圓錐和水平板間的角度θ。粉體自漏斗自由下落在圓盤上形成半徑為r，高度為h，則tan θ=h/r。

1.2.3.5 成型性測定

對顆粒劑粒度要求為不能通過1 號篩（10 目）與能過5 號篩（80 目）的總和，不得過15%。選用內控指標為10 目～80 目之間的顆粒為合格顆粒，以合格顆粒量除以總顆粒量即為成型率[13]。

1.2.3.6 吸濕率測定

參照《中國藥典》2015 版第四部通則9103 藥物引濕性試驗指導原則，取干燥的具塞玻璃稱量瓶（外徑為50 mm，髙為15 mm），于試驗前一天置于適宜的（25±1）℃恒溫干燥器（下部放置氯化銨或硫酸銨飽和溶液）或人工氣候箱內，設定溫度為（25±1）℃，相對濕度為（80±2）%，精密稱定重量m1（g）。取供試品適量，平鋪于上述稱量瓶中，供試品厚度一般約為1 mm，精密稱定重量m2（g）。將稱量瓶敞口，并與瓶蓋同置于上述恒溫恒濕條件下24 h。蓋好稱量瓶蓋子，精密稱定重量m3（g）。

1.2.4 復合枸杞泡騰片制備工藝

原輔料均應過80 目篩，根據(jù)單因素和正交試驗結果，確定填充劑、矯味劑、泡騰劑、潤滑劑、黏合劑的用量。將枸杞提取物、菟絲子提取物、淫羊藿提取物、胡蘆巴提取物、乳糖添加量的一半與檸檬酸、甜菊糖苷混勻，加少量90%乙醇水溶液，攪拌使之成軟材，用14 目篩制粒后，于50 ℃條件下烘干，得A 粒。

將碳酸氫鈉和剩余的枸杞提取物、菟絲子提取物、淫羊藿提取物、胡蘆巴提取物、乳糖混勻，加入少量90%的乙醇水溶液，攪拌使之成軟材，用14 目篩制粒后，于50 ℃條件下烘干，得B 粒。

將A 粒和B 粒過14 目篩整粒，混入潤滑劑PEG 6000，壓制成 1.5 g 的片。

操作要點：

1）粉碎過篩：原料及各輔料均過100 目篩。

2）混合：分別稱取A 混合粉末與B 混合粉末，各自混合均勻，保持顏色均一。

3）制軟材：加90%乙醇水溶液，制軟材，以用手緊握能成團而不黏手，用手指輕壓能裂開為度。

4）制粒：用手將軟材握成團塊，用手掌輕輕壓過14 目篩網(wǎng)制成濕粒。

5）干燥：50 ℃干燥，干粒水分控制在3.0%以下。

6）整粒：14 目篩整粒。

7）混合：加潤滑劑PEG 6000 混合均勻。

8）壓片：在壓片機中調好片重、壓力、硬度等達到要求后壓片。

9）包裝：將泡騰片裝入瓶中，密封、貼好標簽。陰涼干燥處存放。

1.2.5 復合枸杞泡騰片中金絲桃苷含量的測定

1.2.5.1 色譜條件

InerSustain C18色譜柱（4.6×250 mm，5 μm），流動相乙腈-水（30 ∶70，體積比），流速 1.0 mL/min，檢測波長360 nm，柱溫30 ℃，進樣量10 μL，色譜峰理論塔板數(shù)不應低于5000。

1.2.5.2 溶液制備

1）對照品溶液的制備

精密稱取金絲桃苷對照品0.002 7 g 于25 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并定容，精密量取對照品儲備液4.5 mL 于10 mL 容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得48.6 mg/L 的對照品溶液。

2）供試品溶液的制備

取杞羊強力泡騰片20 片，研細。取藥粉約4.5 g，精密稱定，置小燒杯中，加入15 mL 蒸餾水，等待氣泡完全散去，轉移至50 mL 容量瓶中，用5 mL 蒸餾水沖洗燒杯，洗液完全轉移至容量瓶，再加20 mL 無水乙醇，振搖，待無氣泡，密塞，超聲處理30 min，放冷，以50%乙醇定容，過濾，取續(xù)濾液，濾液用0.22 μm 微孔濾膜濾過，再取續(xù)濾液作為供試品溶液。

3）陰性對照溶液的制備

取不含提取物的陰性對照藥粉約1.5 g，精密稱定，照供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

1.2.5.3 線性關系考察

取對照品溶液以0.22 μm 濾膜過濾后，裝入進樣瓶，分別進樣 1、5、10、15、20 μL，按 1.2.5.1 項下的色譜條件測定。以金絲桃苷濃度X（mg/L）為橫坐標，峰面積Y 為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.5.4 精密度考察

精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣5 次，按

1.2.5.1 項下的色譜條件測定，測定色譜峰面積。

1.2.5.5 穩(wěn)定性考察

精密吸取同一供試品溶液，分別于 0、2、4、6、8、12 h進樣10 μL 進樣測定，記錄金絲桃苷峰面積。

1.2.5.6 重復性考察

取同一批杞羊強力泡騰片5 份，精密稱定，按照

1.2.5.2 項下的方法制備供試品溶液，按1.2.5.1 項下的色譜條件測定。

1.2.5.7 加樣回收率考察

取供試樣品藥粉6 份，各約4.5 g，精密稱定，各加入濃度為48.6 mg/L 的金絲桃苷對照品溶液1 mL，按

1.3.6.2 項下方法平行制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣。

1.2.5.8 樣品含量測定

精密稱取3 批樣品粉末，每批3 份，每份約4.5 g，精密稱定，照1.2.5.2 項下方法制成供試品溶液，分別精密吸取20 μL，按1.2.5.1 項下色譜條件進樣，計算藥粉中含量。

2 結果與分析

2.1 泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉總量的確定

泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉的總量對復方枸杞泡騰片的外觀、崩解時限及pH 值的影響見表3。

表3 泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉的總量對復方枸杞泡騰片的外觀、崩解時限及pH 值的影響Table 3 Effect of the total amount of effervescent citric acid and sodium bicarbonate on the appearance,disintegration time and pH of compound Lycium barbarum effervescent tablets

結果顯示，當泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉總質量分數(shù)為70 %時，復方枸杞泡騰片崩解時限最短（小于5 min），但對泡騰后溶液的pH 值影響不大，故確定泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉總量為70%。

2.2 泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉質量比的確定

泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉質量比的不同對泡騰片吸濕率、崩解時限和口感的影響見表4。

表4 泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉質量比的不同對泡騰片吸濕率、崩解時限和口感的影響Table 4 Effects of mass ratio of citric acid and sodium bicarbonate on the moisture absorption,disintegration time and taste of effervescent tablets

當泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉質量比為1.2 ∶1 時，泡騰片吸濕性較小，崩解時限較短，口感較佳。綜合考慮，確定泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉的質量比為1.2 ∶1（即檸檬酸38.18%，碳酸氫鈉31.82%）。

2.3 填充劑種類及其用量的確定

以顆粒吸濕率、成型性及休止角為指標，對乳糖和甘露醇這兩種填充劑進行考察，篩選結果見表5。

選用乳糖為填充劑時，顆粒成型性好，且吸濕性與流動性也相對較小，因此選擇乳糖作為填充劑。

表5 填充劑種類的篩選Table 5 Selection of fillers

以顆粒成型性、休止角及吸濕率為指標，對填充劑乳糖的用量作了進一步篩選，結果見表6。

表6 填充劑乳糖用量的不同對顆粒成型性、流動性及片劑吸濕性的影響Table 6 The effects of lactose content on particle formability，fluidity and hygroscopicity of tablet

隨著填充劑乳糖用量的增大，顆粒流動性逐漸變好，但變化不明顯。當乳糖占原料量的40 %（即乳糖7.14 %）時，顆粒成型性、流動性及復方枸杞泡騰片的吸濕性都相對較好，因此確定填充劑乳糖用量為7.14 %。

2.4 黏合劑的選擇

黏合劑對制粒過程的影響見表7。

表7 黏合劑對制粒的影響Table 7 Effect of adhesive on granulation

綜合考慮制粒過程中軟材情況和過篩情況，選取90%的乙醇溶液，制粒成型性較好且容易過篩，軟材不會太黏而且易成團，因此本試驗采用90%的乙醇溶液作為黏合劑。

2.5 潤滑劑種類及用量的確定

潤滑劑對顆粒流動性及泡騰片的影響見表8。不同潤滑劑PEG 6000 添加量對泡騰片外觀、黏沖情況及顆粒流動性的影響見表9。

表8 潤滑劑對顆粒流動性及泡騰片的影響Table 8 Effect of lubricant on particle fluidity and effervescent tablets

表9 不同潤滑劑PEG 6000 添加量對泡騰片外觀、黏沖情況及顆粒流動性的影響Table 9 The effects of different lubricant PEG 6000 on the appearance，adhesion and fluidity of effervescent tablets

結果表明，微粉硅膠作為潤滑劑時，溶液不澄清；而十二烷基硫酸鈉的流動性不如潤滑劑PEG 6000，因此選擇PEG 6000 為潤滑劑。

試驗結果表明，潤滑劑PEG 6000 用量增大時可使顆粒休止角減小，流動性增大。當潤滑劑PEG 6000添加量為1%時，黏沖情況較為明顯；當潤滑劑PEG 6000 用量為2%或3%時，泡騰片表面光滑有光澤、無黏沖現(xiàn)象。因此，確定潤滑劑PEG 6000 的適宜添加量為3%。

2.6 矯味劑的選擇

不同甜菊糖苷添加量對片劑口感的影響見表10。

表10 甜菊糖苷添加量的不同對泡騰片口感的影響Table 10 Effects of different amount of stevia glycoside on the taste of effervescent tablets

結果表明，當甜菊糖苷添加量為2%時酸甜可口，故確定甜菊糖苷用量為總藥量的2%。

2.7 正交試驗優(yōu)化復方枸杞泡騰片配方

試驗結果如表11 所示，方差分析見表12。

3 個因素對綜合評分的影響程度大小為：泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉總量（A）＞潤滑劑PEG 6000 添加量（C）＞填充劑乳糖添加量（B）。由表12 方差分析結果可知，因素A 有統(tǒng)計學意義（p＜0.05），表明泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉總量（A）對綜合評分的影響最明顯。正交試驗結果為A3B2C3，即最優(yōu)配方為：泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉總量70%、填充劑乳糖7.14%、潤滑劑PEG 6000 3%。

表11 正交試驗直觀分析表Table 11 Visual analysis table of orthogonal test

表12 正交試驗方差分析表Table 12 Orthogonal test anova table

2.8 復方枸杞泡騰片中金絲桃苷含量的測定

本研究以金絲桃苷為復方枸杞泡騰片的指標性成分，為了控制復方枸杞泡騰片的質量，建立了測定復方枸杞泡騰片中金絲桃苷含量的方法，并對該方法進行了方法學考察（線性、精密度、穩(wěn)定性、重復性和加樣回收率）。

2.8.1 線性關系考察

金絲桃苷標準曲線回歸方程為：Y=21 902X-4 122.1（r = 0.999 9）。結果表明，金絲桃苷濃度在4.86 μg/mL～97.2 μg/mL 范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.8.2 精密度考察

根據(jù)1.2.5.4 步驟得到精密度的相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）為 0.27 %，表明該高效液相儀器精密度良好。

2.8.3 穩(wěn)定性考察

根據(jù)1.2.5.5 步驟得到穩(wěn)定性的RSD 值為0.45%，結果表明，供試品溶液在配制后的12 h 內穩(wěn)定。

2.8.4 重復性考察

根據(jù)1.2.5.6 步驟得到重復性的RSD 值為1.1%，金絲桃苷的平均含量為0.092 mg/g，結果表明，此方法重復性較好。

2.8.5 加樣回收率考察

根據(jù)1.2.5.7 步驟得到金絲桃苷平均回收率為97.1%，RSD 值為 0.91%（n=6），表明方法準確度良好。結果如表13 所示。

表13 復方枸杞泡騰片中金絲桃苷的加樣回收Table 13 Recovery of hypericin from compound Lycium barbarum effervescent tablets

2.8.6 樣品含量測定

由結果可知，此次試驗制備的復方枸杞泡騰片中，3 批樣品金絲桃苷含量分別為 0.410、0.412、0.408 mg/g。

3 結論

本研究經(jīng)過組方篩選制備了一種復方枸杞泡騰片，該泡騰片的最佳配方為：填充劑乳糖7.14%，泡騰劑檸檬酸與碳酸氫鈉總量為70 %（檸檬酸與碳酸氫鈉的質量比為1.2 ∶1，即檸檬酸38.18 %，碳酸氫鈉31.82%）、潤滑劑PEG 6000 3%，甜味劑甜菊糖苷2%，黏合劑90%乙醇。金絲桃苷平均含量為0.410 mg/g。該泡騰片呈淺咖色，表面完整光潔，硬度適中，泡騰效果較好，有啤酒的香氣，酸甜適口，質量可控，符合泡騰片的制備要求。

枸杞是大眾所喜愛的藥食同源品種之一，營養(yǎng)豐富，將其制成口感良好的泡騰片，不僅保留了枸杞的營養(yǎng)價值，豐富產(chǎn)品種類，并且攜帶、使用方便，促進了枸杞、菟絲子等的高值化利用，契合現(xiàn)代社會快節(jié)奏生活方式的需求，具有較廣闊的市場發(fā)展前景。