miR-138 在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血中的表達(dá)及其與Th1/Th2 的關(guān)系

吳瑋瑋，卜殷中

（1.寧波市鄞州區(qū)第二醫(yī)院，浙江 寧波315192；2.上海市普陀區(qū)人民醫(yī)院，上海200060）

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatic arthritis，RA）是一種常見(jiàn)的結(jié)締組織炎癥，與自身免疫異常有關(guān)[1]。 以關(guān)節(jié)、肌肉游走性酸痛、紅腫為主要特征，易受陰冷、潮濕等環(huán)境因素的影響[2]。miR-138 可靶向調(diào)控多種與自身免疫性疾病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的基因，參與疾病的進(jìn)展[3]，Th1/Th2 失衡與類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]，但在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中，miR-138與Th1/Th2 的關(guān)系尚不清楚。 本研究主要通過(guò)觀(guān)察RA 患者及健康者外周血血清miR-138 的表達(dá)情況，分析其與Th1/Th2 平衡的關(guān)系，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 根據(jù)診斷分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[5]，選擇2017年9月-2018 年9月寧波市鄞州區(qū)第二醫(yī)院收治的RA 活動(dòng)期患者41 例，RA 穩(wěn)定期患者34 例，另選取同期體檢健康者30 例作為對(duì)照組。 三組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 三組一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本的采集與處理 所有研究對(duì)象晨起空腹抽取肘靜脈血5mL，分成兩管，其中一管-80℃保存；另一管3000r/min、-4℃冷凍離心10 分鐘，分離的上清液-80℃保存。

1.2.2 血清miR-138 的檢測(cè) 采用qRT-PCR 法檢測(cè)所有研究對(duì)象外周血血清中miR-138 相對(duì)表達(dá)量。 按照Trizol 試劑盒說(shuō)明書(shū)操作提取血清總RNA， 按照miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作步驟將2μgRNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA， 之后按照SYBR Green RCR master mix 試劑說(shuō)明配反應(yīng)體系并加樣。qRT-PCR 反應(yīng) 體 系共為20μL：SYBR Premix Ex Taq Ⅱ（2×）10μL，cDNA 2.0μL，上下游引物各0.8μL，ROX Reference Dye Ⅱ（50×）0.4μL，ddH2O 6.0μL。完成后將其放入熒光定量PCR 儀上反應(yīng)， 程序設(shè)定為：95℃預(yù)處理30 秒，95℃15 秒，60℃15 秒，72℃15 秒。 上述三個(gè)步驟循環(huán)40 次，72℃終延伸10 分鐘。 miR-138 以U6 為內(nèi)參，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。反應(yīng)結(jié)束后收集數(shù)據(jù)，并對(duì)所得數(shù)據(jù)CT 值進(jìn)行分析，采用2-ΔΔCT算法計(jì)算miR-138 的相對(duì)表達(dá)量。……