TRPV4 過表達載體轉染促進骨髓間充質干細胞向神經細胞分化的相關研究

董小群，李曉飛，楊騏寧

（金華市中心醫院，浙江 金華321000）

神經系統的損傷具有創傷大、危險系數高、康復難的特點。 如何促進神經系統的快速恢復也是目前我國康復醫學面臨的巨大挑戰[1-2]。 目前，神經系統疾病尚無可靠的治療方案，主要依靠針灸、藥物等輔助治療方法[3]。 干細胞領域對于此類損傷的治療具有潛在的應用價值[4]。而骨髓間充質干細胞（Bone marrow mesenchymal stem cells， BMSCs）具有多向分化潛能，在特定環境下可以分化成人體內的各種細胞。 有研究報道，BMSCs 可定向分化為神經細胞[5]。 但是，干細胞具有來源少、分化能力低的特點[6]。應用基因工程原理，增強BMSCs 的分化能力可以有效解決這一問題， 本研究提取兔BMSCs，利用流式細胞儀進行鑒定，檢測骨髓間充質干細胞CD 分子表達，探究其生物學行為。 瞬時感受器電位離子通道香草素受體亞家族4（TRPV4） 是瞬時感受器電位離子通道家族（Transient Receptor Potential， TRP） 中的亞類，與真核生物細胞的生物學行為密切相關[7]。 有研究報道，脊髓損傷小鼠背根神經元修復過程中可以檢測到TRPV4 蛋白的過表達[8]。 立足于此，本研究利用shRNA 技術構建TRPV4 的過表達載體，通過慢病毒介導轉染BMSCs， 以神經細胞標志物外周蛋白Peripherin 和神經元特異性烯醇化酶 （NSE） 為指標，觀察TRPV4 的過表達載體促進BMSCs 向神經細胞分化的能力，為干細胞促進神經損傷修復提供新的思路與方法。

1 材料與方法

1.1 材料 1640 細胞培養基和PBS 溶液購自北京碧云天公司；胎牛血清購自以色列BI 公司；2.5g/L胰酶細胞消化液購自上海博谷生物科技有限公司；Trizol 試劑、 逆轉錄PCR 試劑盒和熒光定量PCR試劑盒均購自日本TAKARA 公司；……