圓齒野鴉椿不同部位類黃酮與總三萜含量的比較及采收

邱夢媛, 胡亞林, 林春穆, 林 立, 范劍明, 鄒雙全

(1.福建農林大學林學院，福建 福州 350002; 2.自然生物資源保育利用福建省高校工程研究中心，福建 福州 350002; 3.邵武蔣石省級自然保護區管理處，福建 邵武 354011; 4.梅州市林業科學研究所，廣東 梅州 514011)

圓齒野鴉椿(EuscaphiskonishiiHayata)為省沽油科(Staphyleaceae)野鴉椿屬(EuscaphisSieb. et Zucc.)常綠小喬木[1]，是我國傳統中藥材。常用其果皮治療肝炎、胃炎、類風濕性關節炎等，是畬藥“雞眼睛”和苗藥“血脈通膠囊”的藥源植物[2-4]。目前有關圓齒野鴉椿的研究大多集中在分類學描述[5]、種質資源采集[6]、播種繁殖技術[7-8]與活性成分的分離[9-10]等。對圓齒野鴉椿的開發主要偏向于觀賞價值的利用，而對其藥用價值的開發較少[11-15]。黃維等[4]研究表明，圓齒野鴉椿具有抗炎和抗過敏作用。鄒小興等[16]發現，圓齒野鴉椿枝條及葉片中含有類黃酮及三萜類成分。類黃酮和三萜類化合物是許多藥用植物的重要活性成分。類黃酮在抗心律失常、抗病毒、抗氧化、抗炎鎮痛等方面有一定作用[17-20]；三萜類化合物具有止咳祛痰、調節機體代謝、增強免疫、抗炎、抗腫瘤、抗癌等作用[21-23]。

本研究通過測定圓齒野鴉椿不同部位類黃酮及總三萜含量，以篩選最佳藥用部位，并測定最佳藥用部位類黃酮及總三萜含量的動態變化，以期確定適宜的采收期，為圓齒野鴉椿類黃酮、總三萜藥用開發提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 材料來源 圓齒野鴉椿樣品采自福建省清流縣益晟園林苗木基地。該基地海拔332 m，年均氣溫18.7 ℃，年均降水量1 756.1 mL，年均日照時數 1 789.1 h，無霜期達256 d。選擇10株長勢良好、無病蟲害且正常開花結果的8年生圓齒野鴉椿，分別從每株樹冠下中上部不同方位采集當年生枝條、果皮、嫩葉及種子，并從每株根部的一級側根不同方位采集根，放入干冰運回實驗室，保存于-82 ℃冰箱備用。其中，葉片采樣時間為2017年3月中旬(展葉期)至12月，其他部位采樣時間為2017年7月。

1.1.2 主要儀器與試劑 (1)儀器。UV-9600紫外分光光度計(北京北分瑞利分析儀器公司)，BS-210S電子天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司)，101-0A數顯式電熱恒溫干燥箱(上海陽興實驗儀器有限公司)，KQ250DE數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。(2)試劑。蘆丁對照品、無水乙醇、NaNO2、Al(NO3)3、NaOH、HClO4、齊墩果酸、香草醛與冰醋酸，均為分析純。

1.2 供試方法

1.2.1 標準曲線的制備 (1)類黃酮。將蘆丁對照品置于干燥箱內，在105 ℃下干燥直至恒重狀態。精密稱取10 mg于100 mL小燒杯中，加入適量體積分數為70%乙醇溶液，進行水浴加熱至溶解。完全溶解后冷卻至常溫，將溶液轉移到100 mL容量瓶中，并用70%乙醇溶液定容，搖勻。精密吸取蘆丁對照品溶液0、1、2、3、4、5 mL，分別置于6個25 mL容量瓶中，首先加入0.05 g·mL-1NaNO2溶液1 mL，搖勻后靜置6 min；再加入0.1 g·mL-1Al(NO3)3溶液1 mL，搖勻后靜置6 min；最后加入0.05 g·mL-1NaOH溶液10 mL，用乙醇定容，搖勻后靜置15 min。以不加蘆丁標準液為參照，在510 nm處測定其吸光度。以吸光度對濃度進行線性回歸，得回歸方程：y=2.685 3x-0.019 4(R2=0.994 3)，表明蘆丁濃度與吸光度有良好的線性關系。

(2)總三萜。分別吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL齊墩果酸標準溶液于試管中，在80 ℃下水浴揮干；分別加入0.3 mL香草醛—冰醋酸溶液、1 mL高氯酸，搖勻，60 ℃下水浴20 min；流水將其冷卻至室溫后，加入10 mL冰醋酸進行稀釋，搖勻。在波長550 nm處測定其吸光度。以吸光度對濃度進行線性回歸，得回歸方程：y=0.238 7x+0.002 2(R2=0.997 4)，表明齊墩果酸濃度與吸光度有良好的線性關系。

1.2.2 不同部位類黃酮、總三萜含量的測定 將圓齒野鴉椿葉片、根、果皮、種子、枝條置于干燥箱60 ℃下烘干至恒重，過40目篩粉碎成粗粉備用。(1)類黃酮。分別稱取1 g 葉片、根、果皮、種子以及枝條粗粉，放置于50 mL離心管中，首先用5 mL石油醚脫脂，再加入30 mL 70%乙醇溶液，搖勻，靜置24 h。于200 W超聲波下提取30 min。提取液于10 000 r·min-1下離心，過濾，濾液定容至100 mL。按照1.2.1中方法測定各溶液的吸光值，并根據標準曲線計算類黃酮含量[24]。測定結果以葉片類黃酮含量最高，用其進行后續試驗。(2)總三萜。分別稱取0.1 g葉片、根、果皮、種子以及枝條粗粉，置于具塞試管中，加10 mL無水乙醇提取48 h后離心除去沉淀。吸取0.2 mL上清液于試管中，80 ℃下水浴。按照1.2.1中方法測定各溶液吸光值，并根據標準曲線計算總三萜的含量[25]。測定結果以葉片總三萜含量最高，用其進行后續試驗。

1.2.3 不同月份類黃酮、總三萜含量的測定 分別稱取3—12月圓齒野鴉椿葉片1、0.1 g，按照1.2.2中方法測定類黃酮與總三萜含量。

2 結果與分析

2.1 不同部位類黃酮、總三萜含量比較

2.1.1 類黃酮 從圖1可見，圓齒野鴉椿不同部位的類黃酮含量存在顯著差異。葉片、枝條、種子、根、果皮的類黃酮含量分別為15.47、9.49、2.18、3.35、8.92 mg·g-1。其中，以葉片含量最高，種子含量最低，兩者相差7倍之多；枝條與果皮的類黃酮含量差異不顯著；總體來看，類黃酮含量依次為：葉片>枝條>果皮>根>種子。

圖1 圓齒野鴉椿不同部位的類黃酮含量

2.1.2 總三萜 從圖2可見，圓齒野鴉椿不同部位的總三萜含量存在顯著差異。葉片、枝條、種子、根、果皮的總三萜含量分別為21.54、5.39、7.07、3.08、7.41 mg·g-1。其中，以葉片含量最高，根含量最低，兩者相差近7倍；種子與果皮的總三萜含量較接近，兩者差異不顯著。總體來看，總三萜含量依次為：葉片>果皮>種子>枝條>根。

綜上表明，圓齒野鴉椿地上部分的類黃酮、總三萜含量比地下部分高，其中以葉片含量最高。葉片類黃酮含量甚至高于靈芝[26-27]、人參[28-29]等名貴中藥材，總三萜含量接近三七[30]、石斛[31]等名貴中藥材。

2.2 不同月份類黃酮、總三萜含量比較

圓齒野鴉椿是福建鄉土樹種，萌芽力較強，新老葉片更換在每年4月，葉片生物量大。因此，合理利用葉片提取類黃酮及三萜化合物是提高栽培效益的新選擇。為進一步確定葉片適宜采收期，對3—12月葉片類黃酮及總三萜含量進行測定。

2.2.1 類黃酮 從表1可知，不同月份葉片類黃酮含量存在差異。隨著月份的增加，類黃酮含量總體呈上升趨勢，5—12月無顯著差異。其中，11月含量最高，為17.68 mg·g-1，3月最低，為9.28 mg·g-1。3—11月，類黃酮含量增長了8.4 mg·g-1。

圖2 圓齒野鴉椿不同部位的總三萜含量

2.2.2 總三萜 從表1可知，不同月份葉片總三萜含量存在差異。隨著月份的增加，總三萜含量總體呈上升趨勢，9—12月無顯著差異。其中，11月含量最高，為37.73 mg·g-1，3月最低，為11.72 mg·g-1。3—11月，總三萜含量增長了26.01 mg·g-1。

表1 3—12月圓齒野鴉椿的類黃酮、總三萜含量1)

1)同列數值后附不同小寫字母者表示差異達0.05顯著水平。

綜上表明，不同月份圓齒野鴉椿葉片類黃酮、總三萜含量存在差異，其中以11月類黃酮含量(17.68 mg·g-1)、總三萜含量(37.73 mg·g-1)最高。因此，在確定以葉片為藥用部位的前提下，建議將采收期定在10—12月。

3 小結

本研究表明，圓齒野鴉椿葉片、枝條、種子、根及果皮類黃酮與總三萜含量以葉片含量最高。類黃酮含量依次為：葉片>枝條>果皮>根>種子；總三萜含量依次為：葉片>果皮>種子>枝條>根。目前圓齒野鴉椿常用的藥用部位為果實，葉片利用較少，因此可以將葉片作為開發類黃酮、三萜類化合物的新選擇。對葉片3—12月類黃酮與總三萜含量測定表明，11月類黃酮及總三萜含量最高。陳新強等[32]對野鴉椿不同部位類黃酮含量進行了比較，其類黃酮含量高于本文，這可能與選擇的野鴉椿品種有關。同時不同的立地條件等因素也對該化合物含量造成影響。

本研究僅采用紫外分光光度計法對圓齒野鴉椿類黃酮、總三萜進行測定與分析，存在一定誤差，同時生長年限、種源及立地條件等均可能導致圓齒野鴉椿活性成分存在較大差異。因此，今后可進一步考慮生長年限、種源及立地條件等因素產生的影響。