使用SPR技術快速檢測登革熱患者血清ADE效應

蔡銀鳳　何思杰

【摘 要】目的：探討使用SPR技術快速檢測登革熱患者血清ADE效應的價值。方法：納入2018年1月～2019年6月我院收治的疑是登革熱患者200例，制備蛋白質芯片，檢測血清樣本，觀察檢測結果。結果：通過表面引發聚合反應，制備獲得寡聚乙二醇高分子膜。通過microarray針點技術，獲得蛋白質陣列芯片。通過SPR技術，檢測蛋白質芯片性能。當濃度為6.7nmol/L的時候，IgG仍有明顯的信號變化。通過檢測后得出，樣品0.5μL依然存在信號，經標準曲線對照后，對應的檢測濃度為3.3nmol/L，IgM和NS1的檢測濃度為3.3nmol/L和6.7nmol/L。通過SPR技術、酶聯免疫法以及PCR檢測，所有200份樣本血清，陽性率分別為7.00%（14/200）、5.50%（11/200）、2.50%（5/200）。因此，SPR法的檢測陽性率最高，不同方法對比，P<0.05，差異有統計學意義。結論：使用SPR技術快速檢測登革熱患者血清ADE效應的價值較高，值得臨床推廣。

【關鍵詞】SPR技術;檢測;登革熱;血清ADE效應

【中圖分類號】R455【文獻標識碼】A【文章編號】1005-0019（2019）22--01

登革熱是由黃病毒屬的登革熱病毒經傳播后引起的，是一種急性蚊傳疾病，該病癥也是熱帶、亞熱帶地區的一個嚴重的公共衛生問題。登革熱的主要血清學標記物包括NS1、登革熱IgG、IgM等，臨床可通過膠體金法、酶聯免疫法、免疫熒光法等進行檢測，當然，各種方法都有其一定的局限性[1]。表面等離子共振儀（SPR）是一種新型的光學生物傳感器，是比較理想的檢測工具之一。本文研究了使用SPR技術快速檢測登革熱患者血清ADE效應的價值。匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入2018年1月～2019年6月我院收治的疑是登革熱患者200例，患者均在發熱次日或第3日就診，其中，血清樣本中，核酸檢測陽性4例，IgG、IgM陽性10例。其中，男性130例，女性79例，年齡范圍為7～58歲，平均年齡為（34.79±4.87）歲。采集所有樣本血清2ml，進行檢測。

1.2 主要儀器和試劑 SPR芯片;登革熱重組抗原;NS1抗原;登革IgG陽性標本;登革IgM陽性標本。

1.3 方法 制備蛋白質芯片：在芯片表面組裝引發劑單層，然后制備高分子膜，配置反應溶液。將芯片浸泡在10ml的EDC/NHS混合水溶液中活化30min。進行各抗體的點樣。血清樣本的檢測：以PBS緩沖溶液為流動相，平穩基線后，加入血清樣品、標準品，通過甘氨酸溶液再生芯片。對比基線差值，獲得定量分析依據。

1.4 觀察指標 觀察檢測結果。

1.5 統計學分析 數據中的計量數據用均數±標準差（）表示，計數數據用百分率（%）表示，使用SPSS 19.0進行數據處理，兩個獨立樣本比較采取t檢驗與檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 蛋白質芯片制備效果 通過表面引發聚合反應，制備獲得寡聚乙二醇高分子膜。通過microarray針點技術，獲得蛋白質陣列芯片。

2.2 蛋白質芯片性能檢測 通過SPR技術，檢測蛋白質芯片性能。當濃度為6.7nmol/L的時候，IgG仍有明顯的信號變化。

2.3 登革熱標準品檢測 通過檢測后得出，樣品0.5μL依然存在信號，經標準曲線對照后，對應的檢測濃度為3.3nmol/L，IgM和NS1的檢測濃度為3.3nmol/L和6.7nmol/L。

2.4 臨床樣本的檢測 通過SPR技術、酶聯免疫法以及PCR檢測，所有200份樣本血清，在就診第1d的時候陽性率分別為7.00%（14/200）、5.50%（11/200）、2.50%（5/200），在就診第4d、第7d的時候陽性率分別為8.50（17/200）、6.00%（12/200）、3.00（6/200）。因此，SPR法的檢測陽性率最高，不同方法對比，P<0.05，差異有統計學意義。具體見表1。

3 討論

登革熱是世界范圍內的多發病，我國南方地區發病率較高，而且該病癥存在明顯的季節性[2-3]。。一旦爆發登革熱，則將會對整個地區的社會活動和經濟活動造成嚴重影響[4]。。因此，準確的診斷該病癥，對于社會各個方面來說，都具有重要價值。

建立快速的疫情監測機制，嚴防疫情的爆發，十分重要，對于患者病情的及時控制和治療效果的提高，都是十分重要的。本文研究結果顯示，SPR技術在快速檢測登革熱患者方面，效果較好。黃熱屬病毒之間存在明顯的交叉反應，多指標聯合檢測是十分必要的。通過表面化學的聯合探討，制備登革熱檢測蛋白質芯片，可以在復雜的血清中檢測到其特異性物質，對于疾病的診斷和治療，都是十分重要的。

總之，使用SPR技術快速檢測登革熱患者血清ADE效應的價值較高，值得臨床推廣。

參考文獻

祝緋飛， 袁寒艷， 王芝敏， 等.2017年浙江省杭州市拱墅區登革熱暴發疫情調查分析[J].疾病監測， 2019， 34（05）： 422-426.

范建華， 馮云， 朱進， 等.2017年云南省西雙版納州登革1型病毒暴發疫情的調查研究[J].疾病監測， 2019， 34（05）： 427-434.

中華醫學會感染病學分會， 中華醫學會熱帶病與寄生蟲學分會， 中華中醫藥學會急診分會.中國登革熱臨床診斷和治療指南[J].傳染病信息， 2018， 31（05）： 385-392.

牛叢， 王淼， 萬成松， 等.登革病毒非結構蛋白NS1在檢測和免疫預防中的應用[J].熱帶醫學雜志， 2018， 18（10）： 1394-1397.