桑葉多糖對2型糖尿病大鼠IRS-2mRNA表達的影響

劉洪鳳　宋鐵軍　楊勇　任巖海　岳輝　李齊　薛繼婷　趙聰

【摘 要】目的：觀察桑葉多糖對2型糖尿病大鼠胰腺組織胰島素受體底物-2（IRS-2）mRNA表達的影響。方法：Wistar大鼠尾靜脈注射鏈脲佐菌素（STZ）制備2型糖尿病模型，將其隨機分為正常組、模型組、桑葉多糖高、中、低劑量治療組。給藥第8周后，RT-PCR法檢測胰腺IRS-2mRNA表達。結果桑葉多糖可上調IRS-2mRNA表達（P<0.01）。結論：桑葉多糖能夠改善2型糖尿病大鼠的胰島素抵抗，其作用機制可能與上調胰腺IRS-2mRNA表達有關。

【關鍵詞】桑葉多糖;2 型糖尿病;胰島素受體底物-2

【中圖分類號】R284.2【文獻標識碼】A【文章編號】1005-0019（2019）22-0-01

2型糖尿病高血糖的主要原因是IR，改善IR對于預防和治療2-DM至關重要。胰島素受體底物-2（insulin receptor substrate-2， IRS-2）是胰島素信號傳導受體后水平中的重要介質，該基因在表達數量上的缺陷可能參與了IR的形成[1]。桑葉多糖（mulberry leavespolysaccharide，MLP）是桑葉降血糖作用的主要功效成分。本實驗從分子生物學角度研究MLP對2-DM大鼠IRS-2基因表達的影響，探討其降低2-DM大鼠IR的分子生物學機制，以期為治 療 2-DM 提供科學的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 清潔級 Wistar大鼠60只，2月齡，體重（200±50）g，雌雄各半;MLP購自南京澤朗醫藥技術有限公司。

1.2 大鼠模型的制備及分組 大鼠適應性喂養 1周后隨機選取 50只，給以高脂高糖飲食喂養; 另取正常大鼠10只，給以基礎飼料飲食。8周后，共篩選出 IR 模型大鼠 50只，尾靜脈注射STZ注射液 25mg /kg。正常組（A）大鼠，注射相 同 體 積 的 檸 檬 酸 鈉-檸 檬 酸 緩 沖 液。2d后，以11.1mmol/L≤FPG <33.3mmol /L 且伴有糖耐量減退和IR者為早期 2-DM胰島素抵抗大鼠模型成功 。選取造模成功的40只大鼠隨機分為四組，每組10只，分別為模型組（B）、桑葉多糖高（C）、中（D）、低（E）劑量治療組。桑葉多糖治療組分別給予腹腔注射MLP 1.0、0.5、0.25g/（kg·d），正常組和模型組大鼠，每日給予等量無菌飲用水腹腔注射。藥物干預8周后處死大鼠取材備用。

1.3 觀察指標及檢測方法

1.3.1 一般狀況 觀察各組大鼠飲食情況、行為、毛發光澤度、精神狀態、活動狀態等。

1.3.2 胰腺IRS-2 mRNA 檢 測 Trizol 法提取大鼠胰腺組織總RNA，經瓊脂糖凝膠電泳 RNA 顯示 18S、28S 兩條帶，紫外分光光度計測A值計算RNA樣品純度，A260： A280>1.8表明純度高。應用RT-PCR法檢測給藥組、模型組、正常組大鼠胰腺組織IRS-2 mRNA表達。PCR 反應條件：94℃，5 min; 94℃，35s; 57℃，45s; 72℃，35s，35cycle;退火溫度，60℃。PCR 產物經 1.5% 瓊脂糖凝膠電泳后經紫外透射反射分析儀攝片，應用 Quantity One 4.6.2 軟件測定吸光度，以IRS-2/β-actin 條帶吸光度的比值作為待測基因的相對表達水平。

1.4 統計學方法 統計學處理采用 SPSS 19.0軟件進行，計量資料以均數±標準差（）表示，兩組間比較采用 t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q 檢驗，以 P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況 正常組大鼠精神狀態良好，反應靈敏，毛色有光澤，活動正常。模型組大鼠行動遲緩，精神萎靡，毛凌亂且無光澤，多飲、多食、多尿、消瘦較明顯。MLP 治療組大鼠精神狀況較好，反應較靈敏，毛色好，較模型組大鼠體重有所增加，較正常組反應靈敏度差，但仍高于模型組。

2.2 大鼠胰腺組織IRS-2 mRNA 表達情況 正常組胰腺組織 IRS-2mRNA 呈高水平表達，擴增后得到 IRS-2（523bp） 和β-actin （452bp）兩個片段。圖像分析結果顯示，與正常對照組相比（9.78±1.67），模型組大鼠IRS-2mRNA 表達明顯降低 （3.85±2.39，P<0.01） ; 與模型對照組比較，MLP高、中、低劑量治療組 IRS-2mRNA 表達明顯增高（7.61±1.76、5.95±3.43 、4.27±2.23，P<0.01）。

3 討論

胰島素受體是胰島素信號轉導通路中重要信號蛋白，被激活后，可以使下游的IRS1 和 IRS2 磷酸化繼而促進脂肪肌肉利用葡萄糖，促進肝臟合成糖原，從而降低血糖。IRS-2在調節胰島素及控制胰腺β細胞發育中發揮重要作用。桑葉是囯家衛生部門認定的 “藥食同源”植物葉，是國際食品衛生組織認定的“人類 21 世紀十大保健食品之一”。 MLP有降血糖、降血脂、抗氧化等功能[2][3]，利用領域廣闊，潛力巨大。本研究結果提示，MLP可以改善IR，提示其分子機制可能與上調胰腺 IRS-2mRNA 表達有關。

參考文獻

Anjali G， Kaur S， Lakra R， et al.FSH stimulates IRS-2 expression in human granulosa cells through c AMP/SP1，an inoperative FSH action in PCOS patients[J].Cell Signal， 2015， 27（12）： 2452-2466.

任巖海，劉洪鳳，韓智學.桑葉多糖對Ⅱ型糖尿病大鼠血糖血脂的影響[J].中醫藥學報，2013，41（1）：20-21.

高欣妍，王海英，劉志明.桑葉化學成分及藥用功效研究進展[J].廣東化工，2017（6）：83.