濰坊地區非綜合征型耳聾患者遺傳性耳聾基因突變情況分析

竇曉寧，徐榮華，高玲，任雪蓮，張敏敏，鄭燕

(濰坊市婦幼保健院，山東濰坊261011)

先天性耳聾的致病因素可以分為遺傳性和非遺傳性。遺傳因素造成的耳聾中,約30%為綜合征型耳聾(SHI)，70%為非綜合征型耳聾(NSHI)[1]。NSHI患者中，75%～80%為常染色體隱性遺傳，20%為常染色體顯性遺傳，2%～5%為X連鎖遺傳，1%的線粒體突變母系遺傳[2]。NSHI的致病基因和突變種類繁多，不同地區、不同種族遺傳背景存在差異。了解本地區常見耳聾基因突變特點，能夠針對耳聾人群、高危人群進行遺傳性耳聾基因檢測和篩查，有依據地制定本地區遺傳性耳聾防治工作規劃。濰坊地區尚缺乏遺傳性耳聾基因致病突變類型的研究。為此，我們對濰坊地區142例NSHI患者進行耳聾基因檢測，分析該地區耳聾基因的流行情況和突變類型。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院2017年7月～2018年12月聽力中心確診的耳聾患者，以及本市聾校的部分耳聾學生?；颊咴诙呛砜漆t師指導下完成調查問卷，問卷內容包括一般信息、分娩情況、聽障高危因素調查、家族史、疾病史等。納入標準：籍貫為本市及所轄縣區；經聽力學檢測及影像學檢查(包括耳科常規檢查、純音測聽或聽性腦干反應、耳聲發射、聲導抗、顳骨CT或MR)確診為永久性神經性聽力損失；排除后天致病因素造成的耳聾和SHI。共納入142例患者，其中男78例、女64例，年齡0.2～40(14.4±6.8)歲。本研究經我院醫學倫理委員會審核通過，由患者本人或法定監護人簽署《遺傳性耳聾基因檢測知情同意書》。

1.2 耳聾基因檢測方法 采集外周靜脈血3～5 mL，EDTA抗凝。采用一代測序Massarray法檢測耳聾基因。檢測基因及位點：GJB2基因的109G>A，MET34THR，35delG，427C>T，176_191del16，235delC，299_300delAT，167delT，508_511dupAACG；GJB3基因的538C>T，547G>A，357C>T，423A>G，497A>G，R42P，CYS86SER，GLY12ASP；SLC26A4基因的281C>T，589G>A，IVS7-2A>G，1174A>T，1229C>T，IVS15+5G>A，1975G>C，2027T>A，2162C>T，2168A>G，1226G>A；12SrRNA基因的1555A>G，1494C>T，1291T>C，827A>G，961T>G；POU3F4基因的LYS202TER，LEU317TRP，LYS334GLU，ARG323GLY；GJB6基因的THR5MET，GLY11ARG，ALA88VAL，VAL37GLU。

1.3 統計學方法 采用SPSS21.0統計軟件。計數資料以百分數表示，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NSHI患者耳聾基因突變類型及位點 142例NSHI患者中，共檢測出耳聾基因突變60例，突變率為42.25%。其中單基因純合突變15例，單基因雜合突變29例，單基因復合雜合突變10例，多基因復合突變6例。具體基因突變類型及位點見表1。

表1 NSHI患者耳聾基因突變類型及位點

注：*為純合突變。

2.2 耳聾基因突變攜帶者的性別分布 60例耳聾基因突變攜帶者中，男性39例，檢出率為27.46%(39/142)，男性攜帶率為50.00%(39/78)，攜帶占比65.00%(39/60)；女性21例，檢出率為14.79%(21/142)，女性攜帶率為32.81%(21/64)，攜帶占比35.00%(21/60)。男性檢出率、攜帶率、攜帶占比均高于女性(P<0.05或<0.01)。

2.3 NSHI患者耳聾突變基因的突變位點、檢出頻次及構成比 見表2。

3 討論

表2 NSHI患者耳聾突變基因的突變位點、檢出頻次及構成比

現實生活中，聾聾結合在聾人中比例較高，這是造成基因突變呈現多形態、多種基因復合攜帶的重要原因，也是先天性耳聾發生率居高不下的原因之一。耳聾中遺傳因素占比約60%，很大一部分耳聾患者由于自身基因缺陷或基因多態性造成對環境易感性增加而致聾。耳聾基因致病類型及頻率存在明顯地域特征，耳聾基因檢測可以明確病因，預測病情變化，協助治療，更重要的是可以指導并阻止耳聾傳遞，預防耳聾發生。因此，了解耳聾基因的流行情況和突變類型，掌握其發生發展規律及分布情況，對耳聾防治具有重要作用。

GJB2基因與常染色體隱性遺傳NSHI相關，其突變可導致內耳K+循環紊亂，影響信使分子傳遞，從而導致聽覺異常。本研究中，GJB2基因在濰坊地區NSHI患者中的突變頻次為16次，檢出率為11.27%，其中235delC位點突變，占該基因突變位點的58.8%，預示該位點在本地區NSHI者中為GJB2基因主要致病位點。與林文津等[3]報道的檢出率11.06%接近，但與余紅等[4]報道的26.72%及劉雙雙等[5]報道的19.1%差異較大，表明存在明顯的地域性差異。

GJB3基因編碼間隙連接蛋白31，其突變主要導致高頻聽力損失。以往研究發現，GJB3基因538C>T、547G>A位點突變較多[4]；但劉雙雙等[5]對山東省845例NSHI者GJB3基因538C>T、547G>A位點檢測結果僅發現1例538C>T雜合突變者(不包括濰坊地區)，可見以上2個位點并不是山東地區主要的致病位點。而本研究的357C>T位點突變檢出率高達20.78%，表明357C>T位點是濰坊地區GJB3基因主要的突變位點。

SLC26A4基因位于人類染色體7q31，具有較強的遺傳異質性，其突變廣泛，目前國內外已報道200余種突變類型。SLC26A4基因編碼Pendrin蛋白質，該蛋白是一種跨膜碘/氯轉運蛋白，具有高度疏水性。Pendrin蛋白質功能障礙可引起Cl-轉運障礙或內耳淋巴液流動異常，引起前庭水管擴大(EVA)和內淋巴管內壓升高，內耳毛細胞受損和聽神經萎縮，從而導致聽力下降，為常染色體隱性遺傳，EVA為感音神經性聾兒童最常見的內耳畸形[6]。本研究SLC26A4基因突變檢出率為25.35%，突變占比46.75%，明顯高于其他基因，這與國內孟培等[7]的研究結果有所不同，可以看出SLC26A4基因為本地區NSHI者主要致病基因。IVS7-2A>G位點為中國地區最常見突變，本研究中該位點的突變檢出率為14.08%，略高于全國其他地區[5，8]。該位點的突變占比為55.56%，在本地區NSHI者中占該基因突變的第1位，高于張艷芳等[9]報道的28.29%。2168A>G位點檢出率為4.93%，占SLC26A4基因突變第2位，與我國其他地區[10，11]相近，但高于全國平均水平[4]。

12SrERNA基因為藥物性耳聾的易感基因，是以母系線粒體DNA為遺傳方式的基因遺傳，為“一針致聾”的主要原因。以往國內研究其突變位點多集中在1555A>G與1494G>T[12～14]。本研究中12SrERNA基因突變全部為純合突變，以827A>G位點突變與1555A>G位點突變為主，且827A>G位點突變攜帶率(2.82%)略高于1555A>G位點突變攜帶率(2.11%)。這與Lu等[13]報道的12SrERNA基因突變位點以1555A>G與1494G>T為主不同，與江帆等[14]報道的廣州地區耳聾基因分析主要以1555A>G位點突變也不同，存在明顯的地域差異。1494C>T位點未發現突變攜帶者，可見此位點并非本地區NSHI者12SrERNA基因主要致病位點。12SrERNA基因突變者對氨基糖苷類藥物極為敏感，小劑量短時應用即可造成聽力嚴重受損。12SrERNA基因檢測可以指導用藥，避免因使用氨基糖苷類藥物發生耳聾。

POU3F4基因位于X染色體上，以X連鎖隱性遺傳的方式向后代傳遞，家系中患者多為男性呈現明顯的隔代遺傳規律。大部分表現為混合性聾，聽力損失可成進行性發展，少數表現為感音神經性聾。GJB2/GJB6基因突變導致的聽力損失程度更重，一般為極重度。本研究上述2個基因檢出率均為0，提示在本地人群中少見。

本研究中單基因雜合突變檢出率20.42%，占比48.33%,單基因雜合突變通常認為不致病，而同一基因的不同位點雜合突變通常認為可致病。耳聾患者出現單基因雜合突變，有必要對該基因全外顯子測序，以期找到其他協同致病的突變位點。本研究還發現，在本地區NHSI者中，基因突變攜帶率表現為多種類型與形態，多基因復合突變檢出率達4.23%，突變占比10.00%，在以往的報道中較少見。

綜上所述，濰坊地區NSHI者遺傳性耳聾的主要致病基因和位點依次為：SLC26A4基因IVS7-2A>G、1174A>T、2168A>G、IVS15+5G>A、589G>A、1975G>C位點，GJB2基因235delC、299_300delAT、MET34THR、109G>A、176_191del16位點，GJB3基因357C>T、538C>T位點，12SrERNA基因827A>G、1555A>G位點。本地區耳聾基因突變形態多樣，與其他地區有明顯地域差異。由于NSHI的臨床表型差異大而且遺傳異質性非常強，醫學工作者應將遺傳性耳聾基因的基因型與表型之間的相關性作為研究重點，為臨床提供更準確的指導。