天冬配方顆粒中5-羥甲基糠醛的測定

魏福榮，聶麗云，徐飛鵬

(江蘇吉貝爾藥業股份有限公司，江蘇 鎮江 212009)

天冬為百合科植物天冬Asparaguscochinchinensis(Lour.) Merr.的干燥塊根，常用于緩解肺部燥熱并時常伴有干咳，咳痰，喉嚨干渴，新陳代謝不規律等癥[1]。現代研究表明天冬具有抗衰老[2]、抗炎癥反應[3]、緩解咳喘[4]、降血糖[5]等作用。天冬配方顆粒是以天冬飲片為原料，經水煎煮、干燥等工藝加工生產制成。作為新型中藥劑型，服用時只需加熱水沖服便可以達到很好的服用效果，相較于傳統湯劑具有方便，效率高，便于貯藏等優點[6]。

5-羥甲基糠醛(5-HMF)是單糖在高溫、酸性等條件下脫水產生的醛類化合物。天冬本身含有大量糖類，在制備配方顆粒過程中進行高溫煎煮，可能會產生一定量5-HMF。該成分對人體橫紋肌和內臟有損害，可能引起血栓性靜脈炎、促進皮膚癌等不良反應，且有潛在致癌風險。2015年版《中國藥典》中將己酮可可堿葡萄糖注射液及甘油果糖氯化鈉注射液等均對5-HMF進行了限度控制[1]。因此，天冬配方顆粒中5-HMF的控制對臨床安全應用有重要意義。

1 儀器與試藥

島津 SIL-10A高效液相色譜儀， Milli-Q超純水儀；島津 AY220電子天平。5-羥甲基糠醛(批號：111626-201711，中國食品藥品檢定研究院，純度99.4%)，天冬配方顆粒(自制，批號18001、18002、18003、18004、18005、18006、18007、18008，4 g/每袋，相當于飲片10g)。甲醇(色譜純，Merck公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

圖1 對照品溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

Waters Symmetry?C18色譜柱(4.6×250 mm，5 μm)，流動相為甲醇-水(5∶95)。柱溫：40℃；流速：1 mL/min；進樣量：10 μL；檢測波長：284 nm。5-HMF的色譜峰與其它色譜峰分離良好，色譜圖見圖1和圖2。

2.2 供試品溶液的制備

取天冬配方顆粒1 g，精密稱定，加1 g硅藻土攪拌均勻，置100 mL錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理50 min。放冷后稱重，用50%甲醇補足減失的重量，混勻。取上清液25 mL，回收溶劑，殘渣加50%甲醇溶解并稀釋至5 mL量瓶中，搖勻即得。

2.3 線性關系考察

精密稱取5-HMF對照品8.55 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照品溶液17.00、8.50、4.25、2.12、1.06 μg/mL。精密吸取上述對照品溶液10 μL，HPLC測定，記錄峰面積。每份溶液進樣2次，得平均峰面積。以5-HMF對照品濃度(μg/mL)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，得線性回歸方程Y=48674X+9884(r=0.9998)，線性范圍為1.06～17.00 μg/mL。

2.4 精密度試驗

取18008批天冬配方顆粒，照“2.2 供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液。精密吸取該溶液10 μL，HPLC測定，記錄峰面積。連續進樣6次，求平均峰面積和RSD(%)。結果表明精密度良好，見表1。

2.5 穩定性試驗

取18008批天冬配方顆粒，照“2.2 供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液。于0、2、4、6、8、10 h，分別精密吸取該溶液10 μL，HPLC測定，記錄峰面積。求平均峰面積和RSD(%)。結果表明10 h內穩定性良好，見表1。

表1 精密度試驗與穩定性試驗結果

2.6 檢測限與定量限

將對照品溶液逐步稀釋，HPLC測定，記錄色譜圖。以信噪比約為2∶1至3∶1時，作為檢測限，為0.05 μg/mL。

2.7 重復性試驗

取18008批冬配方顆粒6份，每份1g，精密稱定，照“2.2 供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液。精密吸取該溶液10 μL，HPLC測定，記錄峰面積。每份溶液進樣2次，求平均峰面積，以標準曲線法計算含量。6份天冬配方顆粒中5-HMF的含量分別為0.0704、0.0704、0.0698、0.0684、0.0664、0.0688 mg/g，平均含量為0.0690 mg/g，RSD為2.22%，表明重復性良好。

2.8 回收率試驗

取18008批天冬配方顆粒6份，每份0.5 g，精密稱定，精密加入17.00 μg/mL對照品溶液2 mL，照“2.2 供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液。精密吸取該溶液10 μL，HPLC測定，記錄峰面積。每份溶液進樣2次，求平均峰面積，計算回收率。結果見表2。

表2 回收率試驗結果

表2(續)

2.9 含量測定

取不同批次的天冬配方顆粒，照“2.2 供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液。精密吸取該溶液10 μL，HPLC測定，記錄峰面積。每份溶液進樣2次，求平均峰面積，以標準曲線法計算含量。

表3 含量測定結果

結果表明，8批天冬配方顆粒中5-HMF含量介于0.0256～0.0986 mg/g之間，平均含量為0.0647 mg/g。

3 討論

(1)在確定供試品溶液制備方法之前，考察了不同提取溶劑(25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇、甲醇)、不同溶劑體積(30、40、50 mL)、不同提取時間(30、40、50 min)對5-HMF提取效率的影響。結果表明50%甲醇50 mL，超聲處理50 min，效果最好。

(2)目前5-HMF的限度控制爭議很大，其危害性并無充分的理論依據。歐盟食品安全委員會食品添加劑、香料、加工助劑及食品接觸材料科學小組以修正理論加權最大日攝入量法為基礎進行研究，認為每人每天攝入的5-HMF的上限為1.6 mg，而聯合食品添加劑專家委員會在1996 年通過大量急性和亞急性動物毒理實驗所得到的標準為每人每天540 μg[7]。天冬每日服用量為6～12 g，折算為配方顆粒為2.4～4.8 g，根據含量測定結果，其中5-HMF含量并未超過上限值，安全性較高。

(3)本研究所建立的5-HMF測定方法，操作簡單方便、快速靈敏，為天冬配方顆粒的質量控制奠定基礎。