HPLC對比分析福鼎大白茶綠茶、紅茶中的茶多酚兒茶素類物質

楊秀群 劉永祺 劉燕 羅菊

摘? ?要? ?建立了一種檢測茶葉中茶多酚兒茶素含量的方法。對比研究超聲提取和冷凝回流提取方法處理樣品，結果表明，提取溫度50 ℃，時間70 min，樣品與溶劑料液比為1∶20時效果最佳。經孔徑0.22 μm有機相濾頭過濾，高效液相色譜儀檢測，結果顯示目標物在20 min內出峰，在濃度20～1 600 μg·mL-1范圍內線性關系良好，相關系數達0.998 7以上，精密度RSD（n=5）在1.04%～1.28%，日內重現性好，回收率在81.7%～83.6%。應用該方法檢測福鼎大白茶綠茶、紅茶中的茶多酚，發現兩種加工工藝處理的福鼎大白茶兒茶素的含量有差異，該研究結果可以用于指導消費者依據自身需要選取茶葉，同時為茶葉功能食品的研發提供理論依據。

關鍵詞? ?高效液相色譜法;福鼎大白茶;綠茶;紅茶;茶多酚兒茶素

中圖分類號：S132? ? 文獻標志碼：A? ? DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.28.006

我國茶葉分類方式多樣，最常見的是以加工工藝劃分，根據是否發酵及發酵的程度通常把茶葉分為紅茶、黃茶、黑茶、白茶、青茶、綠茶。其中，綠茶又稱為不發酵茶，由新葉經殺青、揉捻和干燥等工藝制成，而紅茶經揉捻、發酵、干燥制成[1]。發酵能使茶葉的內含成分發生生物化學變化，加工工藝不同將影響茶葉的組成成分，特別是茶多酚[2]。

茶多酚（Tea-poly0phenols，TP）是茶葉中最主要的功能成分之一，占茶葉干重的10%～30%[3]。茶多酚又叫茶鞣質、茶單寧，是茶葉中一類多羥基酚類化合物的總稱，主要包括兒茶素類、黃酮、花青素類和酚酸類[4]。其中兒茶素類化合物為茶多酚的主體成分，占茶多酚總量的65%～90%。兒茶素可分為表沒食子兒茶素（Epigallocatechin，EGC）、表兒茶素沒食子酸酯（Epicatechingallate，ECG）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（Epigallocatechingallate，EGCG）、兒茶素（C）、表兒茶素（Epicatechin，EC）[5]等。兒茶素是茶葉中最主要的活性物質，具有強于VC、VE的抗氧化性[6]，有抗腫瘤、抗誘變、預防齲齒等諸多藥效[7]，尤其EGCG具有抗病毒、抗腫瘤[8]、抗突變[9]、降壓、抗白血病等功效[10]。兒茶素已成為一類重要的食品添加劑和藥物。兒茶素是茶樹次生物質代謝的重要成分，也是茶葉保健功能的主要物質，決定茶葉色、香、味品質的重要因素[11]。兒茶素的成分受不同品種茶樹、栽培環境和加工工藝的影響[12]，研究兒茶素可為評價茶葉及其制品的品質及藥用價值[13-14]，以及用于解讀茶樹多酚代謝的生理調控機制提供一定的依據[15]。

茶多酚的檢測方法分為總量檢測和組分含量檢測，總量檢測有分光光度法、電化學法、近紅外光譜法等;組分檢測有高效液相色譜法、毛細管電泳法、原子吸收法、氣相色譜法等。其中，液相色譜法因分析簡單、快速、靈敏、準確而被廣泛應用[16-20]。

本文采用超聲和冷凝回流的方法提取茶多酚，高效液相色譜法測定福鼎大白茶綠茶、紅茶中4種兒茶素的含量，通過對比研究同種茶葉兩種加工工藝即綠茶、紅茶處理后4種兒茶素的含量，評價兩種加工工藝對兒茶素含量的影響，以便更好地指導消費者依據自身需要選取茶葉，同時為茶葉功能食品的研發提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：LC-20AT型高效液相色譜儀（儀器配置：SPD-M20A檢測器，SIL-20A自動進樣器，LC-20AD二元泵，CYO-10AASVP柱溫箱，CBM-20A系統控制器），日本島津;ML104型電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司;KH-250DB型數控超聲波清洗器，昆山禾創超聲儀器有限公司;HH-8數顯恒溫水浴鍋，上海梅香儀器有限公司;WGL-65B電熱鼓風干燥箱，天津市泰斯特儀器有限公司;TST-UPW-20L超純水儀，石家莊泰斯特儀器設備有限公司;BCD-271VMQ冰柜，美的公司。

試劑：表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG， 純度99.92%），表兒茶素茶多酚沒食子酸酯（ECG， 純度98.93%），表沒食子兒茶素（EGC， 純度98.34%），（+）-兒茶素（C， 純度99.58%）標準品，成都曼思特生物科技有限公司;甲醇、乙腈色譜純，美國TEDIA;甲醇、磷酸、檸檬酸分析純，重慶富宇。實驗用水：超純水，超純水機制得。

材料：采用紅茶、綠茶工藝加工的福鼎大白茶（貴州省貴陽市清鎮某茶廠生產），分別命名為福鼎大白茶紅茶、福鼎大白茶綠茶。二者經恒溫箱50 ℃干燥至恒重。

1.2 實驗方法

1.2.1 液相色譜條件

采用InertSustaiu C18 Column（4.6 mm×250 mm， 5 μm）色譜柱;用乙腈和0.1%磷酸水溶液作為流動相，體積比為20∶80，總流速1 mL·min-1，柱箱溫度35 ℃，檢測波長280 nm，進樣量10 μL。

1.2.2 標準溶液的制備

單一標準品儲備液的配制：分別準確稱取EGC、C、EGCG、ECG標準品各0.800 0 g，分別溶解后轉移至5 mL的容量瓶中，用甲醇定容，所得各標準品溶液的濃度為1 600 μg·mL-1。

混合標準品儲備液的配制：分別準確稱取EGC、C、EGCG、ECG標準品各0.800 0 g，混合溶解后轉移至5 mL的容量瓶中，用甲醇定容，所得各標準品溶液的濃度為1 600 μg·mL-1。將混合標準品儲備液用甲醇逐級稀釋為20、40、80、100、200、800、1 600 μg·mL-1的混合標準溶液，并用0.22 μm的有機系微孔濾膜過濾，避光低溫儲存待測。

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（責任編輯：丁志祥）