布病防治工作中檢測制劑和技術的新動向

阿依江·卡那提拜克 張丹 米吉提·莫合他爾汗

摘 要 布魯氏菌可在人和牲畜間傳染，所引發的布魯氏菌病具有人畜共患特點。被布魯氏菌感染的動物如果懷孕將會流產，未孕則會導致不孕不育，布魯氏菌感染引發的疾病將會導致畜牧業遭受重大經濟損失，該病被人傳染后對于人體生命健康極大，布魯氏菌由于可在人群間傳播曾作為生物戰制劑，布魯氏菌檢測技術受關注程度較高。

關鍵詞 布魯氏菌；檢測制劑；檢測新技術

1 引言

布魯氏菌病可簡稱為補兵，布魯氏菌病臨床確診主要依賴于化驗結果，需要使用檢測制劑，可知布魯氏菌病的防治工作不能脫離生物檢驗技術，必須使用相應的生物制品進行免疫防治。布魯氏菌診斷制品的質量對與患者能否確診得到有效的對癥治療較為關鍵，對于患者預后影響較大，同時對于疫情監測點評估影響較大[1]。本文旨在分析布魯氏菌的檢測制劑以及有關檢測新技術，詳見下文：

2 布魯氏菌檢測制品的淘汰與更新

應用于人群中防治布魯氏菌病的生物制品需要秉承安全、敏感性好以及特異性高的之別原則，其中安全性屬于最為重要的原則，應用體外診斷的生物制品則要求診斷結果可靠和準確。

2.1 新制純化布魯氏菌素替代舊菌素

1921年粗制菌素工藝無法測出菌素含量，各個批次間的品質控制較難，病人使用后通常會出現嚴重的局部反應，例如注射后周圍皮膚會發生水泡和脫皮，嚴重者還會引發淋巴結炎。注射者還會有全身不良反應，發生體溫上升、四肢關節疼痛以及全身乏力。對現有菌素進行淘汰后，改進制品質量，研制得到純化布魯氏菌素，經過動物試驗表明安全性較好，后應用于人體安全性好，不良反應發生率較低。

2.2 酸性虎紅抗原取代舊玻片抗原

上世紀初，應用玻片凝集試驗屬于檢驗人畜流行疾病的快速篩查方式，可快速檢測，將高濃度菌液放置于高濃度鹽水中，使用結晶紫與孔雀綠染料進行染色，操作頻繁的情況下將會導致假陽性時。應用酸性緩沖玻片抗原可用以取代舊玻片抗原，可降低假陽性檢出率。酸性緩沖玻片抗原利用PH值呈酸性的高濃度軍爺，經過標準血清化工序，應用虎紅染料進行染色，活化IgG，操作簡便，基本不會產生假陽性現象，判定結果更加簡便。

3 布魯氏菌檢測技術

3.1 細菌學檢測技術

細菌學檢測技術常用于實驗室檢測，檢測所需的動物樣本可從流產胎兒、胎衣、奶樣以及血液中制取，而檢測人體病原菌所需樣本可從尿液、骨髓以及血液中取得。布魯氏菌種屬不同其生長狀況差異也越大，以牛型布魯氏菌為例，從宿主中分離后初期生長速率較慢，同時對于生長環境的要求較高，必須要適量的二氧化碳，上述特點導致應用細菌學檢測技術檢測牛型布魯氏菌周期非常長，一般需要二至四周的無菌生長時間，才可得出最終檢測結果。研究指出應用骨髓培養法可縮短培養時間，但該分離技術費時費力，同時檢測準確性也不高[2]。

3.2 免疫學檢測技術

免疫學檢測技術中有血清凝集試驗、酶聯免疫吸附試驗、補體結合試驗、免疫熒光試驗以及膠體金免疫層析技術。血液凝集中的試管凝集試驗由于特異性和靈敏度不高，檢驗結果受人為因素影響較大，實際操作不便捷，因此不主張使用試管凝集試驗，布魯氏菌病的檢驗應用試管凝集試驗具有局限性，可采取綜合多種檢測手段的方式用以提升檢測正確率。酶聯免疫吸附技術屬于診斷特異性高，同時靈敏度也較高，因此臨床推廣應用價值較高。酶聯免疫吸附技術可檢測IgG、IgM和IgA抗體，隨著生物技術的發展，用于檢測包括牛、羊和豬在內的iELISA檢測方法被建立，利用抗原抗體轉移性特點，檢測抗體，其中雙抗夾心法通常終于檢測大分子抗原，競爭法用于檢測小分子抗原。補體結合試驗雖然特異性強，但是操作較為復雜，檢測條件較為苛刻，導致實際應用受限。免疫熒光檢測法利用布魯氏菌結合抗體后出現特異性的細菌性熒光特點急性檢測，由于其具有屬特異性，不能區分牛、羊和豬生物物種。膠體金免疫岑溪技術屬于新型標記技術，不僅操作簡單，同時需要的樣本量較少，可節省檢測資金，不僅適用于診斷布魯氏菌病，同時還可用于流行病學調查和現場使用，近年來發展較為廣泛。

3.3 分子生物學檢測技術

PCR（聚合酶鏈反應）檢測、基因檢測以及核酸探針與分子斑點雜交技術均屬于分子生物學檢測技術，可用于檢測布魯氏菌。PCR技術檢測特異性強，靈敏度高且不會破壞樣本，加上檢驗操作較為簡便因而應用范圍越來越廣。應用PCR檢測技術可快速檢測鑒別布魯氏菌，多重PCR和熒光定量PCE由于在檢驗檢疫、診斷以及流行病學調查方面的應用效果較好，而廣泛應用。隨著信息技術的發展，PCR結合芯片技術和與微流體技術，進行技術融合，可同時快速處理和分析大量樣品，可極大程度上提高檢測效率，有助于布魯氏菌快速檢測與分型。基因檢測技術而非常可靠，應用微生物基因測定法測定GC含量與Tm值，通過核算雜交技術辨別微生物類型非常簡單[3]。核酸探針與分子斑點雜交技術利用PCR反應擴增差異片段后設計探針，純化后進行斑點雜交。該方法用于檢測布魯氏菌非常可靠，具備靈敏度好和重復性好的優勢。

4 結語

綜上可知，當前并未有一種單一的檢測技術可用于布魯氏菌病檢疫，當前主要的檢測方法為細菌學檢測和免疫學檢測，PCR技術和ELISA檢測方法敏感性和特異性均較高，且具備檢測等待結果時間短的優勢，因此常用于布魯氏菌防治。隨著科學技術的發展，診斷技術還將會不斷精進，更加先進的檢測方式可用于布魯氏菌病防治中。

參考文獻：

[1]丁雪，王巖，劉麗蓉，肖肖，鄧洪寬，周曉翠.布魯氏菌病檢測和防治方法研究進展[J].中國動物檢疫，2019，36（05）：43-48.

[2]魏春霞，孫淼，趙煒，陳延飛，劉懷東，張敏，李嶺，陳建，才學鵬，曾巧英，薛青紅.牛布魯氏菌病、結核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹瀉黏膜病、副流感、傳染性鼻氣管炎可視化基因芯片檢測方法的建立[J].中國獸藥雜志，2019，53（04）：6-15.

[3]趙鴻雁，李積權，路殿英，樸東日，姜海.一種改良的布魯氏菌病抗體微量凝集檢測方法的建立與評價[J].中國人獸共患病學報，2019，35（02）：149-152.