連續監測新發現HIV感染者外周血T淋巴細胞亞群變化對機會性感染的預測價值

黃 萍

(廣西來賓市人民醫院感染性疾病科，來賓市 546100，電子郵箱：hp175114130@163.com)

人獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immune deficiency syndrome，AIDS)又稱艾滋病，是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)侵犯人體的免疫器官及系統，使機體免疫功能受損，進而出現各種機會性感染(opportunistic infections,OIS)的臨床綜合征[1]。隨著現代社會不斷發展，人口流動速度不斷加快，HIV感染已經到了廣泛流行的快速增長期。截至2016年9月30日，我國存活的HIV感染者共384 384例[2]，位居全球第14位，亞洲第2位[3]，HIV感染正在嚴重威脅我國居民身體健康與安全。HIV感染者大多因免疫抑制誘發各種OIS或腫瘤而死亡[4]，其中呼吸道(尤其是肺臟)是發生OIS最常見的部位。HIV感染者合并OIS則提示患者已發展為AIDS，大大增加了治療的難度，有研究顯示，80%～90% AIDS患者不是死于AIDS疾病本身，而是死于OIS[5]。T淋巴細胞亞群是反映機體細胞免疫功能的重要指標之一，其表達水平是否能預測HIV感染者發生OIS的風險，目前仍缺乏相關報道。本研究通過連續監測新發現HIV感染者外周血T淋巴細胞亞群的表達狀態，探討T淋巴細胞亞群表達狀態改變情況與OIS的相關性，為治療、控制疾病進展及改善預后提供參考。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2016年1月至2017年8月在我院感染性疾病科首診發現的28例HIV感染者臨床資料。其中男性20例，女性8例，年齡32～62(44.24±8.52)歲。納入標準：(1)符合《艾滋病診療指南》[1]中的HIV感染診斷標準：① 血漿HIV-RNA陽性；② 患者無其他臨床癥狀，可有全身淋巴結腫大；③ CD4+T淋巴細胞≥200個/μL。(2)血漿HIV-RNA陽性，經廣西區或來賓市有確證資格的疾病預防控制中心，采用蛋白印跡試驗確證。(3)無乙型肝炎及丙型肝炎者。(4)既往無肺結核及其他結核病病史。(5)連續監測期間未發生OIS者。排除標準：(1)不配合完成相關檢測者。(2)既往合并腫瘤者。(3)過去1個月內接受過增強免疫相關治療者。(4)符合AIDS診斷標準[1]，即血漿HIV-RNA陽性，HIV抗體陽性，且合并25種臨床癥狀中一種或者多種者。根據患者在連續4次監測(入組后每月監測1次，共監測4次)后1個月內是否出現OIS進行分組，發生OIS 8例為OIS組，未發生OIS 20例為非OIS組。其中OIS組男性6例、女性2例，年齡36～62(44.45±9.48)歲；非OIS組男性14例、女性6例，年齡32～60(44.08±8.12)歲。兩組性別、年齡比較，差異均無統計學意義(均P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 T淋巴細胞亞群檢測：(1)樣本制備。采用真空抗凝管(乙二胺四乙酸三鉀)采集靜脈血5 mL，標記患者姓名及檢測時間。在旋渦器中等速度混勻(倒立/正立時間5 min)，使用開蓋器打開試管蓋，加入50 μL Zenker固定液(上海澤葉生物科技有限公司，生產批號：ZY131223)，抗凝全血試管顛倒混勻>5次，混勻后，在避光室溫條件下孵育2 h，整個樣本制備過程均在<25℃室溫下進行，操作時間<48 h。(2)上機檢測。采用美國BD公司生產的流式細胞儀(FACSCalibur)檢測外周血CD4+T淋巴細胞，操作過程嚴格按照儀器說明書進行。(3)結果讀取。記錄血常規結果中淋巴細胞計數值和流式細胞術檢測的CD4+T淋巴細胞亞群占比，計算出CD4+T淋巴細胞計數，CD4+T淋巴細胞計數=血常規結果中淋巴細胞計數×流式細胞術檢測的CD4+T淋巴細胞亞群占比。入組后患者每月檢測1次，共檢測4次。

1.2.2 OIS診斷：參照《艾滋病診療指南》[1]中OIS的診斷標準：(1)持續發熱時間超過1個月；(2)慢性腹瀉時間超過1個月，且每日腹瀉4～5次；(3)腫瘤；(4)中樞神經系統感染；(5)青年患者出現癡呆；(6)明確合并結核病、弓形體病、卡氏肺孢子蟲肺炎等感染；(7)不明原因出現帶狀皰疹。符合上述7條中的2條及2條以上，即可診斷為OIS。

1.3 觀察指標 詳細記錄患者每次檢測的CD4+T淋巴細胞計數，△CD4+T淋巴細胞計數=前次檢測的CD4+T淋巴細胞計數-后次檢測的CD4+T淋巴細胞計數。其中△1=第1次檢測的CD4+T淋巴細胞計數-第2次檢測的CD4+T淋巴細胞計數，△2=第2次檢測的CD4+T淋巴細胞計數-第3次檢測的CD4+T淋巴細胞計數，△3=第4次檢測的CD4+T淋巴細胞計數-第3次檢測的CD4+T淋巴細胞計數。CD4+T淋巴細胞下降比例(%)=△CD4+T淋巴細胞計數/前次CD4+T淋巴細胞計數×100%。其中△1%=(第1次檢測的CD4+T淋巴細胞計數-第2次檢測的CD4+T淋巴細胞計數)/第1次檢測的CD4+T淋巴細胞計數×100%，△2%=(第2次檢測的CD4+T淋巴細胞計數-第3次檢測的CD4+T淋巴細胞計數)/第2次檢測的CD4+T淋巴細胞計數×100%，△3%=(第4次檢測的CD4+T淋巴細胞計數-第3次檢測的CD4+T淋巴細胞計數)/第3次檢測的CD4+T淋巴細胞計數×100%。

1.4 統計學分析 應用SPSS 19.0軟件進行統計分析。計量資料以(x±s)表示，重復測量資料采用重復測量方差分析；計數資料用率(%)表示，比較采用χ2檢驗。繪制受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線并計算曲線下面積，評價參數的預測價值。以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組CD4+T淋巴細胞計數比較 兩組的CD4+T淋巴細胞計數比較，差異有統計學意義(F組間=12.652，P組間=0.024)，兩組的CD4+T淋巴細胞計數均有隨時間變化的趨勢(F時間=7.285，P時間=0.039)，分組與時間有交互效應(F交互=6.124，P交互=0.043)。OIS組在第3次及第4次測量的CD4+T淋巴細胞計數均低于非OIS組(均P<0.05)。見表1。

表1 兩組CD4+T淋巴細胞計數比較(x±s，個/μL)

注：與OIS組比較，*P<0.05。

2.2 兩組CD4+T淋巴細胞計數△1、△2、△3比較 OIS組的△1、△2、△3均高于非OIS組(均P<0.05)。見表2。

表2 兩組CD4+T淋巴細胞計數△1、△2、△3比較(x±s，個/μL)

2.3 兩組CD4+T淋巴細胞計數下降比例△1%、△2%、△3%比較 OIS組的CD4+T淋巴細胞數量下降比例△1%、△2%、△3%均高于非OIS組。見表3。

表3 兩組CD4+T淋巴細胞數量下降比例△1%、△2%、△3%比較(x±s，%)

2.4 各參數預測OIS發生的價值 分別對4次檢測的CD4+T淋巴細胞計數及△1、△2、△3、△1%、△2%、△3%進行ROC曲線分析，發現△1、△2、△3、△1%、△2%、△3%的ROC曲線面積較大，同時特異度和靈敏度均較高。見表4。

表4 各參數的ROC曲線分析結果

3 討 論

HIV感染人體后會破壞機體CD4+T淋巴細胞，導致CD4+T淋巴細胞數量減少及功能下降，最終發展成為AIDS，OIS或腫瘤的發生是HIV感染發展為AIDS患者的標志之一，同時也是造成AIDS患者死亡的主要原因。但從HIV感染發展至AIDS過程的個體化差異較大，短則0.5年，長則可達20年[6]。近年來，出現不同作用靶點、不同作用機制的抗HIV藥物，可減少藥物使用劑量及服用次數，給患者帶來極大的便利，但治療時機的選擇仍然是個難題，若剛確診HIV陽性就開始服用抗病毒藥物治療，則可能需要終生接受抗病毒治療，這一方面增加了耐藥發生的概率，另一方面抗病毒藥物的毒副反應會影響患者的生活質量，同時還增加醫療資源的壓力[7]。因此，如何在HIV感染者中鑒別出快速發展為AIDS的患者，并對這些患者進行有針對性治療，延長其發展至AIDS的時間顯得尤為重要。

本研究結果顯示，兩組的CD4+T淋巴細胞計數均有隨時間變化的趨勢(P<0.05)，但OIS組僅在第3次及第4次測量時的CD4+T淋巴細胞計數低于非OIS組(均P<0.05)，提示單次測量的CD4+T淋巴細胞計數對HIV感染者近期是否發生OIS的預測價值不高。分析其原因可能為：(1)HIV感染時間難以確定。HIV感染/AIDS患者的流行病學特征如年齡[8]、傳播途徑[9]、性別、民族、地區、感染時間等均會影響T淋巴細胞亞群的表達狀態[10]，其中年齡、傳播途徑、性別、民族、地區等因素比較好明確，而HIV感染時間常難以確定[11]。(2)未感染HIV前的CD4+T淋巴細胞水平無法確定。彭庭海等[12]對342例湖北省健康青少年及成人進行CD4+T淋巴細胞檢測發現，CD4+T淋巴細胞計數參考值為(865.73±289.97)/mm3，可見該參考值的范圍較廣，如果無法參考患者HIV感染前的CD4+T淋巴細胞水平，而直接根據患者HIV感染后的CD4+T淋巴細胞水平無法準確鑒別其是否會快速發展為AIDS。鑒于以上原因，本研究通過連續監測患者CD4+T淋巴細胞的動態改變，可以規避上述兩個無法確定的因素。本研究中，OIS組的△1、△2、△3、△1%、△2%、△3%均高于非OIS組(均P<0.05)，且△1、△2、△3、△1%、△2%、△3%預測OIS發生的ROC曲線面積較大，同時特異度和靈敏度均較高，提示機體的免疫功能正在被破壞，免疫細胞數量進行性下降，患者發生OIS的風險增加，因此以上參數對HIV感染者近期是否發生OIS具有較大的預測價值。但本研究的樣本量較小，今后仍需要增大樣本量進一步研究證實本研究結論。

綜上所述，CD4+T淋巴細胞計數下降幅度較大，可能提示新發現HIV感染者免疫功能受到破壞，其OIS的風險升高，需積極治療。