尿液巰基化合物檢測在篩查子宮頸癌及癌前病變中的臨床價值

劉芬芬，余海瀛，趙德宇，胡世蓮，程民，徐婷娟，沈國棟

(1.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院、安徽省立醫(yī)院，a 老年病科，b婦產(chǎn)科，合肥 230001；2.腫瘤免疫與營養(yǎng)治療安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;3.安徽省老年醫(yī)學(xué)研究所；4.安徽省循證醫(yī)學(xué)中心)

·論著·

尿液巰基化合物檢測在篩查子宮頸癌及癌前病變中的臨床價值

劉芬芬1a,2,3,4，余海瀛2，趙德宇1b，胡世蓮1a,2,3,4，程民1a,2,3,4，徐婷娟1a,2,3,4，沈國棟1a,2,3,4

(1.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院、安徽省立醫(yī)院，a 老年病科，b婦產(chǎn)科，合肥 230001；2.腫瘤免疫與營養(yǎng)治療安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;3.安徽省老年醫(yī)學(xué)研究所；4.安徽省循證醫(yī)學(xué)中心)

目的 探討尿液巰基化合物檢測作為子宮頸癌早期篩查手段的可行性。方法 收集144例就診者尿液作為對照組，其中包括健康體檢結(jié)果正常人員104例、陰道炎患者20例、人乳頭瘤病毒(HPV)感染者20例；確診子宮頸癌等婦科腫瘤患者的尿液標(biāo)本107例作為研究組。取1 mL新鮮尿液作為標(biāo)本，使用化學(xué)顯色法對標(biāo)本進(jìn)行巰基化合物含量檢測，并以宮頸活檢的組織病理學(xué)為金標(biāo)準(zhǔn)，評價尿液中巰基含量檢測在子宮頸癌篩查中的臨床價值。結(jié)果 在研究組中陽性反應(yīng)有98例，陽性率為91.6%；健康對照組中人員無陽性反應(yīng)；陰道炎患者陽性反應(yīng)有5例，陽性率為25%；HPV感染者陽性反應(yīng)有12例，陽性率為60%；研究組與健康對照組之間尿液巰基檢測陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 尿液中巰基化合物檢測對子宮頸癌及癌前病變篩查具有較高的敏感度，該方法簡便、快速，適用于子宮頸癌的早期篩查。

宮頸腫瘤；尿分析；巰基化合物

子宮頸癌是嚴(yán)重危害女性健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率位于婦科惡性腫瘤的第二位；全世界每年的新發(fā)病例約為50萬人，死亡人數(shù)約27萬，發(fā)展中國家女性占其中的80%[1]。近年來，子宮頸癌的發(fā)病率呈上升趨勢且發(fā)病年齡趨于年輕化。通過流行病學(xué)和病原學(xué)研究，已經(jīng)明確子宮頸癌的發(fā)病與持續(xù)性人乳頭瘤病毒(HPV)感染關(guān)系密切[2-3]。人們尋求通過廣泛的篩查來防治子宮頸癌，目前較為成功的篩查項(xiàng)目有液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測、HPV病毒學(xué)檢測及陰道鏡活檢等，已證明子宮頸癌是通過篩查取得防治效果最好的惡性腫瘤[4-5]。然而，目前的篩查方式仍然存在標(biāo)本取材困難、檢測成本昂貴等問題。因此，如何研發(fā)簡便、快速、靈敏且價格低廉的篩查方法成為子宮頸癌防治研究中的熱點(diǎn)與難點(diǎn)。本研究觀察檢測尿液中巰基含量在子宮頸癌篩查中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 經(jīng)安徽省立醫(yī)院臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會的批準(zhǔn)，選擇2015年7月18日至2015年9月13日期間在安徽省立醫(yī)院健康體檢中心接受健康檢查結(jié)果正常者104例作為健康對照組，婦科門診陰道炎患者和HPV感染者各20例作為疾病對照組，婦科與放療科患者107例作為研究組，其中子宮頸癌患者69例(包括子宮頸癌術(shù)后化療7例)，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅲ33例，子宮內(nèi)膜癌5例。受試者年齡18～70歲，所有患者的診斷均以病理組織學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 標(biāo)本采集 用尿杯收集禁飲食8 h后的新鮮清潔尿液2 mL，并于2 h內(nèi)完成檢查。

1.3 試劑 尿液巰基化合物檢測試劑(化學(xué)顯色法)由江西華裕康生物科技有限公司提供。生產(chǎn)許可證號：20150028號，產(chǎn)品批號：150323001，有效期：2017年3月。

1.4 檢測方法 用滴管分別吸取尿液標(biāo)本0.5 mL到測試管和對照管，稍搖勻，然后分別加入顯色劑，稍搖勻后靜置。在10 min內(nèi)觀察測試管與對照管的顯色，比較顏色是否一致。

1.5 結(jié)果判讀 檢測結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：淺黃色為陰性，淺藍(lán)色為弱陽性，藍(lán)色或深藍(lán)色為陽性。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.01為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

健康對照組104例尿液巰基檢測結(jié)果均陰性；20例陰道炎患者中尿液巰基檢測陽性者為5例，陽性率為25.0%；20例HPV感染者中尿液巰基檢測陽性者為12例，陽性率為60.0%；而107例研究組患者中尿液巰基檢測陽性者為98例，陽性率為91.6%，研究組和健康對照組陽性率比較，χ2=177.861，P<0.01，兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

研究組患者按病理類型可分為子宮頸癌(69例)，CINⅢ(33例)與子宮內(nèi)膜癌(5例)，患者尿液巰基檢測結(jié)果見表1。其中子宮頸癌陽性率為94.2%；CINⅢ是子宮頸癌的癌前病變，其陽性率為87.9%；另外還有子宮內(nèi)膜癌5例，陽性率是80.0%。

表1 研究組中不同病理類型患者尿液巰基檢測結(jié)果

3 討論

子宮頸癌是目前婦科腫瘤中病因明確、可以預(yù)防和及時發(fā)現(xiàn)的癌癥。子宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展是一個由宮頸上皮內(nèi)瘤變逐漸發(fā)展為浸潤性癌的長期病變過程，一般患者從出現(xiàn)宮頸病變到發(fā)展成為子宮頸癌往往需要大約10年時間。研究發(fā)現(xiàn)，進(jìn)行子宮頸癌前病變的篩查，盡早診斷，及時治療，對于子宮頸癌患者預(yù)后非常重要[6-8]。因此，研發(fā)子宮頸癌早期篩查新技術(shù)具有重要意義。

目前子宮頸癌常用的篩查方法及其局限性有：①傳統(tǒng)巴氏涂片，取材和制片方法存在缺陷，檢測敏感性低、假陰性率高；②液基細(xì)胞學(xué)檢查(TCT/LCT)，成本較高，需要昂貴的設(shè)備與耗材制片以及專業(yè)的病理醫(yī)師閱片；③HPV病毒DNA檢測，該方法雖提高了敏感性，但檢測成本高，對設(shè)備與環(huán)境的要求也很高；④臨床肉眼檢查，其特異度低且篩出的多數(shù)是浸潤性癌和早期癌，并非癌前病變。宮頸細(xì)胞學(xué)檢查和(或)HPV檢測，根據(jù)檢查結(jié)果確定是否需要進(jìn)一步使用陰道鏡及宮頸病理活組織檢查是目前育齡婦女子宮頸病變檢查的主要方法與診療流程，也被稱為子宮頸癌前病變篩查的 “三階梯”技術(shù)。然而，這些方法存在檢測過程繁瑣、價格昂貴等缺點(diǎn)。

HPV感染是引起子宮頸癌的必要因素[9]。已知HPV型別有130多種，其中約40種涉及生殖道感染，約20種與腫瘤相關(guān)，其中最常見的致癌亞型是 HPV16 型。E6和E7基因是HPV最重要的致癌基因[10-11]，HPV16編碼的E6蛋白能與定位于胞核周圍的細(xì)胞內(nèi)E6相關(guān)蛋白(E6-AP)形成復(fù)合物，E6蛋白通過E6AP連接介導(dǎo)與p53蛋白特異性結(jié)合，再通過體內(nèi)泛素途徑促進(jìn)p53蛋白被降解，由此造成宮頸細(xì)胞中p53蛋白或阻抑蛋白的巰基分子大量且不可逆脫落并從尿液中排出[12]。而健康人則無巰基代謝物從尿液中排出。因此，通過女性尿液中巰基類代謝物的檢測可以提示子宮頸癌病變的發(fā)生。

本研究中檢測104例健康女性尿液巰基化合物結(jié)果均陰性，20例陰道炎患者尿液標(biāo)本檢測陽性率為25.0%，20例HPV感染患者檢測結(jié)果陽性率為60.0%。陰道炎的病原微生物包括加德納菌、陰道毛滴蟲、白假絲酵母菌等，不能排除這些微生物感染時會產(chǎn)生巰基類代謝產(chǎn)物，造成尿液標(biāo)本檢測陽性。HPV感染診斷是使用二代雜交捕獲(HC2)技術(shù)檢測HPV,正常參考值是(RLU/CO)<1.00 ng/L，HPV感染患者尿液標(biāo)本顯示陽性，大多數(shù)HPV檢測值>200 ng/L，甚至高達(dá)4000 ng/L，所以推測可能是HPV感染較嚴(yán)重，或是感染類型主要是高危性的HPV感染，造成尿液標(biāo)本顯示陽性。而69例子宮頸癌患者標(biāo)本檢測陽性率為94.2%，33例子宮頸癌前病變患者標(biāo)本檢測陽性率為87.9%。提示尿液巰基化合物檢測方法的敏感度較高。而5例子宮內(nèi)膜癌患者的標(biāo)本檢測陽性率達(dá)到80.0%，一方面可能是因?yàn)槟蛞簷z測陽性的子宮內(nèi)膜癌患者也受到HPV的感染，另一方面可造成細(xì)胞中巰基代謝物析出的致病基因可能不局限于E6，其他基因也可能導(dǎo)致細(xì)胞中巰基化合物的析出。具體原因尚不清楚，有待深入研究。

總之，尿液中巰基化合物檢測對子宮頸癌及癌前病變的篩查具有較高的敏感度，該方法簡便、快速、經(jīng)濟(jì)且無創(chuàng)，易于被人們接受，對技術(shù)條件和環(huán)境要求低，適用于子宮頸癌的早期篩查。

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Clinical value of urine thiol detection in cervical cancer and precancerous lesion screening

Liu Fenfen*,Yu Haiying,Zhao Deyu,Hu Shilian,Cheng Min,Xu Tingjuan,Shen Guodong

(*Department of Geriatrics,Anhui Provincial Hospital,Hefei 230001,China)

ShenGuodong,Email:gdshen@ustc.edu.cn

Objective To investigate the feasibility of the content of urine thiol detection as an early screening method of cervical cancer.Methods Urine collected 144 cases of patients as control group,including the physical examination results 104 cases of normal people,vaginitis patients 20 cases and HPV infection 20 cases.And 107 cases with cervical cancer or other gynecological cancer were in the experimental group.The thiol content in urine was detected using chemical color testing method.The pathological result of cervical biopsy was as the gold standard to evaluate the clinical value of the urine thiol detection in the screening of cervical cancer.Results This method only needs 1mL sample of fresh urine and the detection procedure is simple and quick.The clinical results showed that there were 98 cases of positive reaction in the experimental group,and the positive rate was 91.6%.Whereas,physical examination results in control group normal persons without positive reaction.Vaginitis patients with positive reaction in 5 cases,positive rate is 25%.HPV infection positive reaction in 12 cases,positive rate was 60%.Data analysis showed that the difference between the two group was statistically significant (P<0.01).Conclusion The method of thiol detection in urine has a high sensitivity for cervical cancer and precancerous lesion screening and is characterized as a simple,rapid and economical method,and thus is suitable for early screening of cervical cancer.

Uterine cervical neoplasms；Urinalysis；Sulfhydryl compounds

安徽省科技攻關(guān)項(xiàng)目(1301042094) ；安徽省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(1408085MH167)

劉芬芬，碩士在讀，Email：1350696027@qq.com

沈國棟,研究員，Email:gdshen@ustc.edu.cn

R737.33;R446.12

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2017.01.004

2016-06-21)