流式細胞術診斷急性混合細胞白血病臨床意義探討

劉夫鵬　劉紅黔

[摘要] 目的 對急性混合細胞白血病臨床診斷中流式細胞術的應用價值進行探討。 方法 方便選擇該院2014年1月—2017年12月收治的初發(fā)急性白血病患者416例，應用流式細胞儀和三色熒光標記抗體檢測免疫表型。結果 416例初發(fā)急性白血病患者，28例（6.7%）為混合細胞白血病（MAL），其中20例（71.4%）B/髓系表達，6例（21.4%）T/B共表達，2例（7.1%）T/髓共表達;FAB分型診斷為急性淋巴細胞白血病（ALL）142例，62例純淋系抗原表達，80例（56.3%）淋系伴髓系抗原表達（My+ALL）;FAB分型診斷為急性髓細胞白血病（AML）246例，158例純髓系抗原表達，88例（35.8%）髓系伴淋系抗原表達（Ly+AML）;MAL28例，cCD3、CD79a、MPO表達比例分別為100.0%、100.0%、64.3%。MAL28例中表達CD34患者26例（92.9%）。18例（81.8%）CD117表達。 結論 實際中單純通過細胞形態(tài)學無法準確診斷MAL、My+-ALL、Ly+-AML，流式細胞術免疫分型可彌補FAB分型不足，準確進行白血病細胞的分型診斷，為進一步開展臨床治療提供有效依據(jù)。

[關鍵詞] 混合細胞白血病;流式細胞儀;免疫分型

[中圖分類號] R733.7? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2019）09（a）-0036-03

[Abstract] Objective To investigate the application value of flow cytometry in the clinical diagnosis of acute mixed cell leukemia. Methods A total of 416 patients with initial acute leukemia admitted to this hospital from January 2014 to December 2017 were convenient selected and enrolled. The immunophenotype was detected by flow cytometry and trichrome fluorescent antibody. Results Of the 416 patients with newly diagnosed acute leukemia， 28 cases（6.7%） were mixed cell leukemia （MAL），in cluding 20 cases（71.4%） were B/medullary， 6 cases（21.4%） were co-expressed， and 2 cases（7.1%） T/myeloid co-expression; FAB typing diagnosis of 142 cases of acute lymphoblastic leukemia （ALL）， 62 cases of pure lymphoid antigen expression， 80 cases （56.3%） of lymphoid system with myeloid antigen expression （My+ALL） FAB classification diagnosis of acute myeloid leukemia （AML） in 246 cases， 158 cases of pure myeloid antigen expression， 88 cases （35.8%） myeloid with lymphoid antigen expression （Ly + AML）; MAL 28 cases， cCD3， CD79a， MPO expression ratios were 100.0%， 100.0%， and 64.3%， respectively. In MAL28 patients， 26 patients （92.9%） expressed CD34， 18 cases（81.8%） had CD117 expression. Conclusion In practice， MAL， My+-ALL and Ly+-AML cannot be accurately diagnosed by cell morphology alone. Flow cytometry immunophenotyping can make up for the deficiency of FAB typing and accurately diagnose the classification of leukemia cells， providing effective basis for further clinical treatment.

[Key words] Mixed cell leukemia; Flow cytometry; Immunophenotyping

近年來細胞遺傳學、免疫學、分子生物學技術發(fā)展迅速，MICM分型方案被廣泛應用于臨床白血病臨床診斷，其中白血病免疫學分型發(fā)展最快，作為研究急性白血病的基礎性手段，其有效補充了傳統(tǒng)形態(tài)學檢查不足[1-2]。該研究將分析并總結2014年1月—2017年12月應用流式細胞儀進行急性白血病血細胞簇分化抗原CD系列檢測結果，對急性混合細胞白血病診斷中流式細胞術的應用價值進行明確，報道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便選擇該院收治初發(fā)急性白血病患者416例，患者均于流式細胞室行血細胞促分化抗原CD系列檢測。416例患者中，142例為急性淋巴細胞白血病（ALL），其中包括女54例、男88例;年齡2～65歲，平均（27.8±3.5）歲。246例急性髓細胞白血病（AML），其中包括女110例、男136例;年齡范圍7～81歲，平均（41.6±3.6）歲。28例混合細胞白血病（MAL），其中包括女6例、男22例;年齡范圍7～65歲，平均（33.4±2.8）歲。有BD公司提供所有熒光標記單克隆抗體（McAb）及其他試劑;應用熒光包括PE（藻紅蛋白熒光素）、FITC（異硫氰酸熒光素）、PerCP（葉綠素蛋白）;胞漿抗體為CD79a、MP0、cCD3;胞膜單克隆抗體為CD33、CD13、CD14、CD15、CD11b、CD117、CD3、CD4、CD5、CD7、CD10、CD8、CD20、CD19、HLA-DR、CD45。

1.2? 儀器和設備

單激光三色流式細胞儀由美國BD公司生產(chǎn);高速低溫離子機由美國貝克曼公司生產(chǎn)。

1.3? 試驗方法

應用直接免疫熒光標記法進行熒光標記染色，治療前為所有病例抽取外周血或抗凝骨髓3～5 mL。標本染色前進行細胞數(shù)計數(shù)，應用磷酸鹽緩沖液稀釋骨髓標本并計數(shù)，將有核細胞數(shù)密度調(diào)整為1×106個/mL，6 h內(nèi)行染色體標記。

1.3.1? 胞膜抗原染色過程? 對流式專用試管進行標記，將PE、FITC、PerCP標記的抗體加入管中，同時設定同型對照（IgG1和IgG2a），加入抗凝骨髓后避光孵育15 min，溶血素2 mL裂解紅細胞10 min，離心后去除上清，PBS洗滌，加入300 μLPBS后檢測。胞漿抗原染色：固定已進行膜抗原標記的標本，加入破膜劑作用10 min，PBS洗滌后加胞漿抗體，避光孵育15 min，進行PBS洗滌，加300 μL緩沖液檢測。

1.3.2? 流式細胞儀檢測和分析? 應用三色標準熒光微球校準儀器進行儀器流路和光路的檢測，對儀器的各種參數(shù)進行設置和調(diào)節(jié)，應用Cellquest軟件對獲取條件進行設置，依次上樣獲得數(shù)據(jù)，然后進行幼稚細胞群中白血病細胞表面標記的計算。結果判斷時按照同型對照設置對抗原表達強弱進行描述。

1.4? 診斷標準

依據(jù)骨髓細胞形態(tài)學、臨床表現(xiàn)、細胞化學染色、免疫分型指標確診。依據(jù)FAB分型標準進行細胞形態(tài)學診斷，參照歐洲白血病免疫分型協(xié)作組（EGIL）標準進行MAL分娩分型診斷。

2? 結果

2.1? FAB分型

416例急性白血病患者FAB分型結果，見表1。

2.2? 免疫表型分型結果

初發(fā)急性白血病FAB分型和免疫分型結果，見表2。

2.3? 28例混合細胞白血病免疫分型主要抗原表達

28例混合細胞白血病免疫分型主要抗原表達情況，見表3。

3? 討論

白血病患者的造血細胞在某分化階段會大量積累白血病細胞，臨床中檢驗分析這些細胞可對患者進行正確分型，進而為臨床診斷和治療提供有效依據(jù)[3-5]。臨床中存在多種診斷白血病技術，其中應用最廣泛的分型和診斷方法是形態(tài)學分型，其具有明確的分型標準。但作為經(jīng)典分型標準，F(xiàn)AB具有一定局限，其對檢驗者的經(jīng)驗要求較高，同時存在較強的主觀性，所以臨床診斷符合率不高，形態(tài)學不足雖然能夠通過細胞化學染色得到一定程度彌補，但細胞內(nèi)環(huán)境變異性和染色方法的酶學靈敏性會形成制約，難以得到較高符合率[6-7]。

當前臨床開始廣泛認識到白血病免疫學分型的重要意義，流式細胞術是白血病免疫分型的重要方法，其通過不同熒光標記單克隆抗體標記細胞，獲得SSC、FSC、多個熒光參數(shù)，在此基礎上對細胞核、細胞質(zhì)、細胞膜的免疫分型進行分析，進而實現(xiàn)對白血病細胞的有效檢測，外周血、骨髓、腦脊液是可進行檢測的標本類型，能夠避免FAB分型方法的不足[8-10]。流式細胞術通過分析細胞核特定生物大分子，可對其分類、來源、分化狀況進行精確判定，白血病分型準確性和診斷靈敏度大大提升，對于臨床進一步開展治療具有重要價值。

該研究中，416例初發(fā)急性白血病患者，28例（6.7%）為混合細胞白血病（MAL），其中20例（71.4%）B/髓系表達，6例（21.4%）T/B共表達，2例（7.1%）T/髓共表達;FAB分型診斷為急性淋巴細胞白血病（ALL）142例，62例純淋系抗原表達，80例（56.3%）淋系伴髓系抗原表達（My+ALL）;FAB分型診斷為急性髓細胞白血病（AML）246例，158例純髓系抗原表達，88例（35.8%）髓系伴淋系抗原表達（Ly+AML）;MAL28例，cCD3、CD79a、MPO表達比例分別為100.0%、100.0%、64.3%。MAL28例中表達CD34患者26例（92.9%）。18例（81.8%）CD117表達。可見，實際中單純通過細胞形態(tài)學無法準確診斷MAL、My+-ALL、Ly+-AML，流式細胞術免疫分型可彌補FAB分型不足，準確進行白血病細胞的分型診斷。王建中[11]研究顯示，F(xiàn)AB分型診斷為急性淋巴細胞白血病（ALL）36.7%，15.9%純淋系抗原表達，20.8%淋系伴髓系抗原表達（My+ALL）;FAB分型診斷為急性髓細胞白血病（AML）63.3%，40.2%純髓系抗原表達，23.1%髓系伴淋系抗原表達（Ly+AML）。這進一步驗證了該研究結論。

綜上所述，流式細胞術在急性混合型白血病診斷中具有較大意義，后期有待進一步探討其與疾病治療、預后的關系。另外該研究樣本容量較小，未來研究中應進一步擴大樣本容量，提升研究結果的科學性。在急性混合細胞白血病診斷中流式細胞術具有重要價值，其能夠有效提升白血病細胞分型診斷效果，對于患者進一步接受有效治療具有重要意義。

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（收稿日期：2019-06-04）