蘇州西部地區女性人乳頭瘤病毒感染情況調查分析*

溫江濤，王芙蓉，朱紅楠，嚴茹紅

(南京醫科大學附屬蘇州科技城醫院檢驗科，江蘇蘇州 215153)

宮頸癌是一種常見女性惡性腫瘤。2018年世界衛生組織國際癌癥研究機構數據顯示，全球宮頸癌每年新發病例約57.0萬，死亡病例31.1萬，其中90%病例發生在發展中國家[1]。人乳頭瘤病毒(HPV)是乳頭病毒科病毒，包括200多個亞型，其主要侵犯皮膚及黏膜上皮。根據致癌性的高低，HPV分為高危型、中危型和低危型[2-3]。高危型HPV感染易誘發多種惡性腫瘤，如宮頸癌、膀胱癌肉瘤、喉癌等[4]。低危型HPV感染常常引起濕疣等病變[5]。本研究主要分析江蘇省蘇州西部地區女性HPV感染與基因型分布情況，從而為該地區HPV感染的防治提供理論依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2 195例于2017年11月至2018年5月在本院婦科門診自愿做HPV篩查的女性患者宮頸脫落細胞樣本。所有患者均符合：(1)長期居住于蘇州西部地區(>5年)；(2)至少有1年性生活史；(3)非妊娠期、無盆腔放療和化療史；(4)檢查前48 h內無性生活史及用藥史等。

1.2儀器與試劑 全自動核酸提取儀與熒光定量PCR儀分別購自中國江蘇碩世生物技術有限公司和中國上海宏石有限公司；HPV病毒核酸提取及分型檢測試劑盒購自中國江蘇碩世生物技術有限公司。

1.3標本采集與保存 用宮頸刷置于宮頸口處沿順時針旋轉3～5圈采集宮頸口及宮頸管足夠的移行區上皮細胞，并迅速將宮頸刷頭部放入細胞保存液中，旋緊管蓋，若不能立即檢驗的樣品置于4 ℃冰箱保存，嚴格按照操作說明進行，應避免反復凍融。

1.4檢測方法 樣本DNA提取和加樣：按照全自動核酸提取儀提取HPV-DNA。剩余DNA樣品置于-20 ℃冰箱保存。將反應液和A-H引物溶液依次加入PCR八聯管，再將2 μL待測樣本核酸溶液、陰性和陽性對照分別加入對應的PCR八聯管。PCR擴增與變性：將PCR八聯管放入熒光PCR擴增儀內進行擴增檢測。檢測結果：根據HPV亞型探針熒光標識表進行結果判斷，HPV亞型擴增曲線結果顯示典型S型曲線且CT值<參考值，表明HPV亞型為陽性；HPV亞型擴增曲線結果不顯示S型擴增曲線或CT值>參考值，表明HPV亞型為陰性。通過檢測宮頸脫落細胞內單拷貝基因，測算樣本中的細胞數量，獲得HPV定量的基準，再報告同等細胞數量(10 000個細胞)內的HPV病毒拷貝數，實現同步對21種HPV基因亞型進行基因分型及標準化定量。

本檢測將21種HPV亞型分為13種高危型(HPV16、52、58、18、31、33、35、39、45、51、56、59和68亞型)，5種中危型(26、53、66、73和82亞型)及3種低危型(HPV6、11和81亞型)，有≥2種HPV亞型合并感染者為多重感染，對多重感染者，各HPV亞型陽性率重復計算。

1.5統計學處理 采用SPSS16.0軟件進行統計學分析，計數資料用n(%)表示，不同年齡組間檢出率差異采用用χ2檢驗，SPSS分析不同年齡段陽性檢出率差異有無統計學意義，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HPV感染狀況和基因型分布 2 195名女性中有420名感染HPV，總感染率為19.13%(420/2 195)。高危型HPV感染率14.90%(327/2 195)，其中高危型單一感染率為11.07%(243/2 195)，84例發生高危型多重感染，占高危型感染的25.69%(84/327)。低危型HPV感染率僅為3.51%(77/2 195)，其中低危型合并高危型感染率為1.46%(32/2 195)。感染率最高的HPV亞型為HPV52(3.83%)，排名第2的是HPV16(2.28%)和HPV58(2.28%)，第3是HPV39(1.64%)。

2.2各年齡段HPV感染陽性率比較 2 195名研究對象分成3個年齡段：<30歲556例(占25.33%)、30～54歲1 549例(占70.57%)、>54歲90例(占4.10%)。2 195例受試患者中，>54歲組HPV高危型的感染率為23.33%，30～54歲組為15.11%，<30歲組為12.95%。各年齡組間高危型感染陽性檢出率及HPV總陽性檢出率差異均有統計學意義(P<0.05)，而高危型單一感染率和高危型多重感染率差異卻無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 江蘇省蘇州西部地區婦女不同年齡段HPV感染檢出情況[n(%)]

2.3HPV亞型感染的病毒載量分布 420例HPV感染患者中，將HPV多重感染者在各HPV亞型感染中分別計數，故所得總例數是540例。HPV52，HPV16、HPV58和HPV39型感染者以中、低病毒載量為主，而HPV51型感染者以低病毒載量為主。見表2。

表2 HPV亞型感染的病毒載量分布(n)

續表2 HPV亞型感染的病毒載量分布(n)

注：a表示計量單位為拷貝數/104個細胞；低危型沒有列出；-表示此項無數據

3 討 論

本研究采用多重熒光PCR技術，高通量、自動化分管及閉管檢測21種HPV基因亞型，該項目是全球首個、也是目前唯一可以同步HPV分型及標準化定量的檢測技術。檢測HPV DNA靶標，分管區分18種高中危及3種低危型總計21種HPV基因型別，并同步報告各基因亞型的病毒拷貝數；另外，通過檢測宮頸脫落細胞內獨特的單拷貝基因，還可以報告樣本中的采集的細胞數量，最終報告“單位數量細胞中不同HPV型別及其攜帶病毒載量”，從而實現同步HPV分型及標準化定量。中國醫科大學附屬第一醫院研究數據表明碩世HPV與測序法陽性一致性為100.0%，而傳統分型方法僅為59.1%[6]。

女性宮頸HPV感染與當地經濟、衛生水平有關，不同地區HPV感染率差異較大。本研究結果顯示，2 195名蘇州西部地區婦女的HPV感染率為19.13%，其中高危型HPV感染率為14.90%，與甘肅地區一致[7]，低于重慶地區[8]和石家莊地區[9]。HPV總感染率高于北京地區15.57%[10]和天津地區15.93%[11]。不同地區HPV感染的型別也存在較大差異，本研究發現蘇州西部地區婦女易感HPV型別為HPV52、HPV16、HPV58和HPV39。甘肅地區常見HPV感染基因亞型為HPV16，HPV58，HPV52，HPV18和HPV53型[7]。石家莊地區常見HPV感染基因亞型為HPV16，HPV58，HPV52，HPV6和HPV18型[9]。而天津地區HPV感染率比較高的亞型分別為HPV52，HPV16，HPV58，HPV56和HPV81型[11]。這些差異可能與風俗習慣、文化程度及生活方式等有關。

從各HPV亞型感染患者中不同級別病毒負荷量的分布來看，在HPV52，HPV16、HPV58和HPV39型感染者以中、低病毒載量為主，而HPV51型感染者以低病毒載量為主。高病毒載量與宮頸病變相關，因此蘇州西部地區女性HPV感染可以定期檢測和治療來預防早期宮頸病變。

女性的年齡是影響HPV感染的重要因素之一。本研究結果顯示，>54歲婦女高危型HPV的感染率為23.33%，30～54歲組為15.11%，<30歲組為12.95%。而石家莊地區與此相反，HPV感染的年齡主要集中在40歲以下，甚至25歲以下HPV感染率為最高[9]。而天津地區HPV感染的年齡主要集中在35～45歲[11]。

本研究主要圍繞蘇州西部地區女性感染HPV特點及其基因型分布展開，有望為研發適應于本地區的HPV多價疫苗提供了重要的理論基礎。