鬼燈籠提取物的體外抑菌實(shí)驗(yàn)

楊小良，李瑤，劉振飛

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西 南寧 530222)

鬼燈籠(ClerodendrumfortunatumL.)又名燈籠草，為馬鞭草科植物白花燈籠的莖、葉，主產(chǎn)于廣東、廣西，微苦、微甘，性涼，有清熱止咳、解毒消腫的功效，主治肺癆咳嗽、骨蒸潮熱、跌打損傷、咽喉腫痛、癤腫疔瘡。鬼燈籠根有清熱解毒、涼血消腫的功效，主治感冒發(fā)熱、咳嗽、咽痛、跌打腫痛[1]等。有研究表明,白花燈籠水提取物和醇提取物有較強(qiáng)的抗補(bǔ)體活性[2]。

鬼燈籠能治療癤腫疔瘡，但未見其抑菌研究的相關(guān)報(bào)道。為切合臨床實(shí)際應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)鬼燈籠常用溶劑(水和70%乙醇)的提取物進(jìn)行體外抑菌考察，初步研究其抗菌范圍及所抗病原菌的最小濃度(MIC)，為鬼燈籠的進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

RE52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；GI54DWS型高壓蒸汽滅菌箱。

1.2 菌株及培養(yǎng)基

金黃色葡萄球菌、金黃色葡萄球耐藥菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希桿菌、表皮葡萄球菌、傷寒沙門氏菌、糞腸球菌、屎腸球菌、無乳鏈球菌和化膿性鏈球菌均為標(biāo)準(zhǔn)菌株，購自中國藥品生物制品檢定所；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(杭州濱和微生物試劑有限公司)。

1.3 藥材

采自廣西北流市，經(jīng)廣西植物所寧世江鑒定為馬鞭草科植物白花燈籠(ClerodendrumfortunatumL.)的全株。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

鬼燈籠水提物：稱取鬼燈籠藥材粗粉20 g，加入10倍量的水冷浸1 h，煎煮2次，每次1 h，過濾，合并2次濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮，制成含藥量為1 g/mL的藥液，冷藏備用。

鬼燈籠70%乙醇提物：稱取鬼燈籠藥材粗粉20 g，加入10倍量的70%乙醇先冷浸1 h，然后回流提取2次，每次1 h，過濾，合并2次濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮，制成含藥量為1 g/mL的藥液，冷藏備用[3]。

將鬼燈籠水和70%乙醇提取物，各配制成含相當(dāng)于原藥材濃度為1 000 mg/mL， 500 mg/mL，250 mg/mL，125 mg/mL，62.5 mg/mL，31.3 mg/mL，15.6 mg/mL，7.8 mg/mL，3.9 mg/mL，1.9 mg/mL的濃度系列。

2.2 菌懸液的制備

將10種活化培養(yǎng)后的菌株接種于無選擇性的LB瓊脂培養(yǎng)基上，按照相應(yīng)培養(yǎng)條件培養(yǎng)[4]。挑選新鮮菌落，懸浮于生理鹽水中，振蕩混勻，以0.5號(hào)麥?zhǔn)媳葷峁転闃?biāo)準(zhǔn)，調(diào)整細(xì)菌濃度為1.5×106cfu/mL的菌量，備用[5]。

2.3 紙片藥敏實(shí)驗(yàn)

無菌條件下，將上述10種菌株混懸液分別接種到普通營養(yǎng)培養(yǎng)基表面，每種細(xì)菌平行接種3個(gè)平板，將藥敏片貼于平板上，每個(gè)平板貼4片，其中一片為陰性對(duì)照。37 ℃ 培養(yǎng) 24 h，24 h后觀察抑菌效果[6]。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)，測(cè)試菌的生長被抑制形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映了測(cè)試菌對(duì)鬼燈籠提取物的敏感程度[7]。

2.4 MIC實(shí)驗(yàn)

將定性濾紙制成的6 mm圓形紙片[8-9]，滅菌烘干后,分別取若干紙片浸泡于上述20份溶液中2 h，烘干后備用；浸泡于無菌蒸餾水中做陰性對(duì)照，其他處理?xiàng)l件同前。

3 結(jié)果

鬼燈籠的水提物和70%乙醇提取物對(duì)革蘭陽性菌如金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌顯著的抑制其生長，但對(duì)金黃色葡球耐藥菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、傷寒沙門氏菌、糞腸球菌、屎腸球菌、無乳鏈球菌和化膿性鏈球菌則無抑制其生長的作用；而70%乙醇提取物對(duì)化膿性鏈球菌有一定抑制生長。結(jié)果見表1～表4。

表1鬼燈籠水、70%乙醇提取物對(duì)細(xì)菌抑制生長的影響

菌種類型抑菌環(huán)直徑(mm)水提液濃度(1 000 mg/mL)70%乙醇提液濃度(1 000 mg/mL)無菌水金黃色葡萄球菌19.6522.080金黃色葡萄球耐藥菌000銅綠假單菌000大腸埃希桿菌000表皮葡萄球菌22.6624.440傷寒沙門氏菌000糞腸球菌000屎腸球菌000無乳鏈球菌000化膿性鏈球菌07.280

表2鬼燈籠水提物對(duì)金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌作用(mg/mL)

抑菌環(huán)直徑(mm)金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌1 00019.6522.6650019.4821.7525016.6119.8062.57.6917.6632.25010.9215.63007.81003.91001.9500000

表3鬼燈籠70%乙醇提取物對(duì)金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌作用(mg/mL)

抑菌環(huán)直徑(mm)金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌1 00022.0824.4450020.4123.8325011.4020.6262.510.6515.8532.25010.9215.6308.477.81003.91001.9500000

表4水和70%乙醇提取物對(duì)金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)

供試菌水提物(mg/mL)70%乙醇提取物(mg/mL)金黃色葡萄球菌125125表皮葡萄球菌62.532.25

4 小結(jié)

鬼燈籠有清熱止咳、解毒消腫的功效。體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鬼燈籠水和70%乙醇提取物均對(duì)金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均具有明顯的抑菌作用，水和70%乙醇提取物對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度均為125 mg/mL；而對(duì)表皮葡萄球菌的最小抑菌濃度上有差別，水提物的最小抑菌濃度為62.5 mg/mL，70%乙醇提取物的最小抑菌濃度為32.25 mg/mL。鬼燈籠的水和70%乙醇提取物所含成分比較復(fù)雜，至于何種成分起作用有待下一步研究，本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果將為鬼燈籠不同部位的抑菌能力考察提供一定依據(jù)。