丙肝患者血清抗-HCV、HCVRNA載量與肝功能關(guān)系研究

陳繼梅 施志農(nóng) 李坤寶

丙型肝炎病毒（HCV）感染呈現(xiàn)全球分布，是常見(jiàn)的慢性肝病之一，我國(guó)丙肝的患病率為1.3%[1]。感染后如不進(jìn)行適當(dāng)?shù)目共《局委煟?0%～30%的丙肝病毒感染者10～20 年后會(huì)發(fā)展為肝硬化，2%～7%會(huì)進(jìn)展為原發(fā)性肝癌[2]。大多數(shù)丙型肝炎感染者早期癥狀不典型，無(wú)明顯臨床癥狀，患者感染多呈隱匿，對(duì)丙肝的篩查和診斷多依賴實(shí)驗(yàn)室檢查。為了解慢性丙型肝炎患者丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）、血清丙型肝炎病毒核酸（HCVRNA）載量與肝功能損害的關(guān)系,本文通過(guò)回顧性分析我院確診的83 例慢性丙型肝炎患者抗HCV抗體、HCVRNA載量及肝功能等項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果，探討慢性丙型肝炎患者此三項(xiàng)檢測(cè)的臨床意義，為HCV的診治提供信息。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2015 年5 月-2017 年4 月確診的慢性丙肝患者83 例作為研究對(duì)象，所有患者均為住院患者,其中男43 例，平均年齡（49.07±12.33）歲；女40 例，平均年齡（54.88±10.42）歲，排除合并其他病毒性肝炎及自免肝、酒精性肝炎等病歷，所選病例均符合2004 年版《丙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.2 試劑與方法

1.2.1 HCVRNA 檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（FQ-PCR）法，所用儀器為美國(guó)SLAN Real Time PCR Detection System 7300 熒光定量檢測(cè)儀，試劑為艾康生物技術(shù)（杭州）有限公司產(chǎn)品。定量線性范圍：500～108copies/mL，測(cè)定結(jié)果＜500 copies/mL為陰性結(jié)果，HCVRNA病毒載量檢測(cè)結(jié)果＞103copirs/mL為陽(yáng)性結(jié)果，直接報(bào)告定量結(jié)果。

1.2.2 抗HCV檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫法（ELISA），試劑購(gòu)自北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，在KHB ST-360 酶標(biāo)儀采用雙波長(zhǎng)（450/630nm）讀取各孔OD，以樣品孔≥臨界值（CUTOFF）者為HCV抗體陽(yáng)性，臨界值=陰性對(duì)照孔均值+0.12。

1.2.3 肝功能檢測(cè) 肝功能指標(biāo)中以反應(yīng)肝臟代謝功能的總膽紅素（TBIL）、反應(yīng)肝臟炎癥程度的肝臟酶丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）及門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）作為觀察指標(biāo),TBIL采用釩酸鹽氧化法測(cè)定，ALT、AST采用雙試劑連續(xù)監(jiān)測(cè)速率法測(cè)定，試劑購(gòu)自浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司，儀器為日立7180 全自動(dòng)生化儀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0 軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 83 例慢性丙肝患者血清抗-HCV和HCVRNA檢測(cè)情況分析 83 例慢性丙肝患者抗-HCV檢測(cè)全部陽(yáng)性,陽(yáng)性率達(dá)到100%，HCVRNA陽(yáng)性為56 例，陽(yáng)性率為67.47%，陰性為27 例，陰性率為32.53%。慢性丙肝患者血清抗-HCV與病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性率比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,慢性丙型肝炎患者HCVRNA檢出率顯著低于丙型肝炎抗體（χ2=32.245，P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 患者抗-HCV和HCVRNA陽(yáng)性率比較 例(%)

2.2 慢性丙肝患者血清中HCVRNA病毒陰、陽(yáng)性與肝功能指標(biāo)TBIL、ALT、AST的關(guān)系 根據(jù)丙肝患者血清中病毒是否復(fù)制分兩組分別探討HCVRNA陰性/陽(yáng)性與肝功能TBIL、ALT、AST水平的關(guān)系，結(jié)果顯示，TBIL水平與HCV病毒是否復(fù)制無(wú)關(guān)（P=0.774），有病毒復(fù)制組血清ALT、AST水平與無(wú)病毒復(fù)制組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 病毒復(fù)制有無(wú)與血清生化指標(biāo)結(jié)果比較

表2 病毒復(fù)制有無(wú)與血清生化指標(biāo)結(jié)果比較

項(xiàng)目 n TBIL(μmol/L) ALT(U/L) AST(U/L)HCVRNA 陰性27 18.21±9.42 33.30±19.85 27.48±10.63 HCVRNA 陽(yáng)性56 18.82±9.04 88.13±65.13 62.70±44.31 t -0.288 -4.268 -4.062 P ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 HCVRNA陽(yáng)性慢性丙肝患者不同復(fù)制載量與肝功能指標(biāo)結(jié)果分析 慢性丙肝患者有病毒復(fù)制者共56 例，根據(jù)血清HCVRNA載量高低分層，分為高病毒量(≥107copirs/mL)、中病毒量(105～106copirs/mL）、低病毒量（103～104copirs/mL）三組,分別探討HCVRNA載量與TBIL、ALT、AST水平的關(guān)系，結(jié)果顯示，隨著HCVRNA病毒載量的升高，相對(duì)應(yīng)患者血清生化部份指標(biāo)TBIL、ALT、AST水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），經(jīng)兩兩比較，高、中、低病毒量間肝功能水平同樣不存在顯著性差異（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 患者不同病毒載量血清TBIL、ALT、AST水平分析

表3 患者不同病毒載量血清TBIL、ALT、AST水平分析

組別 n HCL Vo Rg10 NA(μ T mB oI LL/L)(A U L/T L)(A U S/T L)低病毒量組17 4.17±0.61 17.91±8.96 78.47±67.27 70.41±53.04中病毒量組23 6.18±0.66 19.31±10.18 100.57±66.78 60.70±39.50高病毒量組16 7.35±0.26 18.98±7.62 80.50±61.49 57.38±42.49 F 142.492 0.124 0.708 0.388 P ＜0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

3 討 論

丙型肝炎病毒（HCV）感染的診斷目前主要通過(guò)檢測(cè)HCV抗體和HCV核糖核酸（HCVRNA）。HCV抗體是反映HCV是否存在感染重要指標(biāo)，研究稱丙肝患者產(chǎn)生抗體后，HCV丙型肝炎病毒感染的抗體是基于宿主抗體應(yīng)答的檢測(cè)，抗-HCV指標(biāo)會(huì)長(zhǎng)時(shí)間地呈現(xiàn)陽(yáng)性[4]，通常作為流行病學(xué)篩查丙肝患者常用指標(biāo)，抗體的局限性是無(wú)法區(qū)分HCV復(fù)制活動(dòng)現(xiàn)癥感染和即往感染及自發(fā)或成功治療后的感染。為此臨床指南建議在檢測(cè)到HCV抗體后進(jìn)一步檢測(cè)HCVRNA，HCVRNA是HCV病毒復(fù)制的直接標(biāo)志，可作為丙肝活動(dòng)性感染的重要的確認(rèn)診斷，HCVRNA載量水平也是對(duì)丙肝患者病毒負(fù)荷評(píng)估、抗病毒治療療效監(jiān)測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。但丙肝患者體內(nèi)HCVRNA復(fù)制存在三種模式，即持續(xù)陰性、間歇陽(yáng)性或持續(xù)陽(yáng)性[5]，尤其是慢性丙肝。我室檢測(cè)顯示，慢性丙肝患者HCVRNA陽(yáng)性檢出率顯著低于丙肝抗體。本研究83 例慢性丙肝有27 例（32.53%）HCVRNA陰性，故HCVRNA陰性并不能排除HCV感染，綜合檢測(cè)HCV抗體和HCVRNA載量不但可以明確診斷慢性丙肝病毒感染，還有助于判斷病毒復(fù)制情況[6]。

既往認(rèn)為HCV對(duì)肝細(xì)胞有直接損害作用，我室對(duì)我院83 例慢性丙肝患者按血清中是否存在HCVRNA復(fù)制分為兩組探討與部分肝功能關(guān)系，結(jié)果顯示，有病毒復(fù)制組慢性丙肝患者血清肝臟酶水平顯著高于無(wú)病毒復(fù)制組，ALT、AST是肝臟炎癥反應(yīng)的最敏感指標(biāo)，HCVRNA處于活動(dòng)性復(fù)制時(shí)，患者的肝臟亦處于活動(dòng)性炎癥狀態(tài)，有病毒復(fù)制時(shí)，肝臟酶水平可間接反應(yīng)丙肝病毒的復(fù)制狀態(tài)。我室進(jìn)一步對(duì)有病毒復(fù)制的丙肝患者按HCV載量水平分層，分為高、中、低三組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果表明，隨著HCVRNA病毒載量的升高，其TBIL、ALT、AST 水平不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明病毒復(fù)制雖然可以造成肝臟炎癥，但肝臟炎癥程度并不隨著病毒載量的升高而加重，病毒載量高低與肝臟炎癥程度并不具有相關(guān)性。近年隨著對(duì)丙型肝炎研究的不斷深入，慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染通過(guò)復(fù)雜而尚未被發(fā)現(xiàn)的分子途徑引起肝臟炎癥，不僅有病毒的直接損傷效應(yīng)，感染促發(fā)炎癥,更傾向于細(xì)胞因子途徑、氧化應(yīng)激和脂肪變性誘導(dǎo)等由HCV病毒引起的深層次的免疫反應(yīng)損害，多種途徑的間接機(jī)制導(dǎo)致肝損傷[7～8]，免疫系統(tǒng)可能在決定丙型肝炎病毒感染的損害方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。

總之，對(duì)慢性丙肝診斷應(yīng)聯(lián)合檢測(cè)抗-HCV及HCVRNA載量，兩者可互為補(bǔ)充，對(duì)丙肝患者進(jìn)行明確診斷及判斷病毒復(fù)制情況。肝臟酶水平可反映肝臟炎性反應(yīng)的程度，某種程度上可反映病毒復(fù)制狀態(tài)，但靈敏度差。HCV對(duì)肝細(xì)胞損害中多種途徑導(dǎo)致，HCVRNA復(fù)制可引起肝臟酶升高，但病毒載量高低與肝臟酶水平并不具相關(guān)性，對(duì)于慢性丙肝患者應(yīng)聯(lián)合檢測(cè)是此三項(xiàng)檢測(cè)能提供全面的診療實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，更有效進(jìn)行臨床診斷評(píng)估。